一种检测葛根中生物胺的方法技术

首次建立了一种超高效液相色谱方法，用于快速提取和测定药食同源产品葛根中的9种药用生物胺。9种生物胺包括色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺、精胺。葛根样品打碎后用0.4 mol/L盐酸提取，丹磺酰氯柱前衍生化,加入氨水终止反应,乙腈定容。采用UPLC色谱柱,以乙酸铵和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用二极管阵列检测器在波长254nm下检测，检测方法呈现良好的线性关系。样品加标回收率75.6～97.2%,相对标准偏差0.12～5.32%；9种生物胺的方法定量限均为10mg/kg。该方法简便、快速、灵敏，可用于葛根等动植物性食品中9种生物胺残留量的同时测定。

【技术实现步骤摘要】
一种检测葛根中生物胺的方法
本专利技术涉及一种检测葛根中生物胺的方法，属于检测

技术介绍
生物胺(BAS)是一类具有生物活性和氮的低分子碱性化合物。它们主要由相应的氨基酸在微生物脱羧下形成，或由醛和酮在氨基酸转氨酶的作用下产生[1]。常见的生物胺包括色胺、腐胺、酪胺、组胺、精胺、亚精胺、苯乙胺、章胺、尸胺等[2]。一般情况生物胺是有毒的，当人体在一定程度上积聚时，会对人体造成中毒。它们可引起头痛、恶心、呕吐、腹泻、心悸、血压变化、呼吸紊乱和其他过敏反应，严重时可能危及生命[3]。在生物胺中，组胺毒性最大，腐胺、尸胺、精胺和亚精胺可以与亚硝酸盐反应生成亚硝胺，一种强致癌物质[4]。生物胺广泛存在于富含蛋白质和氨基酸的食物中，如肉类和肉制品、罐头食品、海鲜、奶酪、啤酒、葡萄酒植物和农产品[5-6]。近来发现中草药中也可能有生物胺的存在[1]。目前，一些国家已对食品中生物胺含量的限制提出了规定。例如，在欧盟[6]中，组胺限量为100mg/kg，而在美国[7]，水产品中组胺限量为50mg/kg；而在中国，高组胺鱼类组胺限量为40mg/100g，其他鱼类组胺限量为20mg/100g[8-9]。国内外植物产品中生物胺均未见限量规定，但本研究中发现葛根的根茎含有生物胺。生物胺具有较高的活性，有助于葛根的功效。然而，微量生物胺是人体内的正常活性成分，在生物细胞中具有重要的生理功能[11]。建立葛根中生物胺的鉴别和同步测定方法，无论是从食品安全的角度还是从成分活性的角度，都是十分必要的。生物胺的检测方法有GC-MS/MS[12]、离子色谱[13-14]、HPLC[15-17]、TLC[18]和HPLC-MS/MS方法[1][18]，但前处理步骤比较复杂，操作困难，检测难度较大。同时，九种生物胺的测定超过30min。现有国家标准[19]是针对食品中生物胺的测定的，但前处理方法十分复杂。样品预处理相对繁琐，包括正己烷脱脂、液-液萃取、pH调节、吹氮等步骤，需要大量的有机溶剂，这对实验人员的健康有害。[1]WuYH,ZhouS,XuGM.Determinationofeightbiogenicaminesinanimal-derivedfoodstuffsbyhighperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometrywithoutderivatization.ChineseJournalofChromatography,2013.31(2):111-116.[2]SillaSantosMH.Biogenicamines:theirimportanceinfoods.InternationalJournalofFoodMicrobiology,1996,29(2/3):213-231.[3]WangGQ,YuJS,HuJ,etal.ProgressinResearchonBiogenicAminesinFoods.FoodScience,2016,37(1):269-278.[4]SHALABYAR.Significanceofbiogenicaminestofoodsafetyandhumanhealth.FoodResearchInternational,1996,29(7):675-690.[5]LiuJ,RenJ,SunKJ.SafetyofBiogenicAminesinFoods.FoodScience,2013,34(5):322-326.[6]ZhangLu,BianYin-Bing,XingZeng-Taoetal.Advanceindetectingtechniquesofbioaminesinagri-foodandagri-products.ActaAgricultureShanghai,2011,27(3):135-139.[7]EuropeanCommission(EC).Commissionrecommendationof10January2003concerningacoordinatedprogrammerfortheofficialcontroloffoodstuffsfor2003(2003/10/EC).[8]U.S.FoodandDrugAdministration.CPGSec.540.525Decompositionandhistamineraw,frozentunaandmahi-Mahi；cannedtuna；andrelatedspecies,revisedcompliancepolicyguide,availability.[9]GB2733-2015Nationalfoodsafetystandardsoffresh,frozenanimalaquaticproducts.[10]NY5073—2006thepollution-freefoodPoisonousandharmfulmaterialsetlimittoofaquaticproducts.[11]SunYN,ZhangN,WangCL.IdentificationandDeterminationofBiogenicaminesinEvodiaRutaecarpa(Juss.)BenthbyHighPerformanceLiquidChromatography.AnalyticalChemistry.2014,42(2):273-277WenYZ,FanWL,XuY.IdentificationofavarietyofbiogenicaminesbyGC-MSmethodinChina’sliquor.LiquorMaking,2013,140(1):38-41.[12]ZhaoXY,JiaoX,XiaM,etal.Determinationoffivebiogenicaminesinsourcewaterbyionchromatography.ChineseJournalofChromatography,2009,27(4):505-508.[13]ZhouY,WangPY,ZhaoH,etal.DeterminationofBiogenicAminesinFrozenMeatProductsbyHighPerformanceIon-exchangeChromatography-electrochemical.TheFoodIndustry,2014,35(5):238-241.[14]HuY,HuangZY.ColumnbeforederivativeHPLCdeterminationofmanykindsofbiogenicaminesinfishatthesametimeanditschangerule.JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnology,2012,12(11):142-147.[15]ZhaiHL,YangXQ,HaoSX,etal.OptimizationofOperatingConditionsforHPLCDeterminationofBiogen本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测葛根中生物胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：第1步，生物胺单标溶液的配制：准确称量腐胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺、苯乙胺、章胺、尸胺、色胺的标准品，放入容量瓶；加入盐酸定容；配制成标准储备溶液；第2步，生物胺混合标准溶液的配制：分别取等量的第1步中得到的各个标准品的标准储备溶液，混合之后，用盐酸定容，配制成生物胺混合原液；第3步，生物胺混合工作液的配制：将生物胺混合原液用水稀释后制成设定浓度的溶液，作为生物胺混合工作液；第4步，生物胺标准溶液衍生化：取0.5‑2mL的生物胺混合工作液移入15mL离心管中，然后加入1.5 mL饱和碳酸钠溶液和1 mL丹磺酰氯溶液；盖上盖子后，在40℃的温度控制的动筛中放置和振摇1小时，然后加入100μL的氨水终止反应；加入乙腈将体积调节到5 mL，在4000r/min下进行5分钟的离心，最后用0.22μm的过滤器过滤上清液；第5步，样品溶液的制备：取待检测的葛根样品，加入盐酸溶液进行提取，再在冷冻离心中进行离心，取上清；将上清中加入饱和碳酸氢钠溶液和丹磺酰氯化物溶液，在摇床上放置和摇动，加入氨水中止反应，反应液加乙腈稀释，作为样品溶液；第6步，UPLC检测：采用第4步得到的衍生化生物胺标准溶液以及第5步得到的标准溶液，通过UPLC检测，通过外标法得到待测的生物胺的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种检测葛根中生物胺的方法，其特征在于，包括如下步骤：第1步，生物胺单标溶液的配制：准确称量腐胺、组胺、酪胺、精胺、亚精胺、苯乙胺、章胺、尸胺、色胺的标准品，放入容量瓶；加入盐酸定容；配制成标准储备溶液；第2步，生物胺混合标准溶液的配制：分别取等量的第1步中得到的各个标准品的标准储备溶液，混合之后，用盐酸定容，配制成生物胺混合原液；第3步，生物胺混合工作液的配制：将生物胺混合原液用水稀释后制成设定浓度的溶液，作为生物胺混合工作液；第4步，生物胺标准溶液衍生化：取0.5-2mL的生物胺混合工作液移入15mL离心管中，然后加入1.5mL饱和碳酸钠溶液和1mL丹磺酰氯溶液；盖上盖子后，在40℃的温度控制的动筛中放置和振摇1小时，然后加入100μL的氨水终止反应；加入乙腈将体积调节到5mL，在4000r/min下进行5分钟的离心，最后用0.22μm的过滤器过滤上清液；第5步，样品溶液的制备：取待检测的葛根样品，加入盐酸溶液进行提取，再在冷冻离心中进行离心，取上清；将上清中加入饱和碳酸氢钠溶液和丹磺酰氯化物溶液，在摇床上放置和摇动，加入氨水中止反应，反应液加乙腈稀释，作为样品溶液；第6步，UPLC检测：采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴玉杰，蔡翔宇，江思华，
申请(专利权)人：广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：广西,45