SETDB1在调控胆固醇途径中的应用制造技术

本发明专利技术公开了SETDB1在调控胆固醇途径中的应用，下调SETDB1表达可下调胆固醇含量和下调胆固醇途径相关基因的表达，过表达SETDB1可以增加神经母细胞瘤软琼脂克隆形成能力中和胆固醇途径相关基因的表达，SREBF2是Cholesterol途径的转录激活因子，过表达SREBF2能显著促进Cholesterol途径相关基因的表达，表明SETDB1调控胆固醇代谢途径，可作为胆固醇相关疾病的诊断和治疗靶点。

【技术实现步骤摘要】
SETDB1在调控胆固醇途径中的应用
本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及SETDB1在调控胆固醇途径中的应用。
技术介绍
神经母细胞瘤是儿童常见的颅外实体肿瘤之一，约占儿童肿瘤的6-10％，年发病率大约为1/10万，仅低于白血病和中枢神经系统肿瘤，占儿童癌症死亡的15％。神经母细胞瘤临床表现为恶性程度高、异质性高、易转移、易复发以及预后差等特点，因此其治疗比较困难，迫切需要新的途径和新方法来治疗。肿瘤细胞表观遗传学是当前研究热点之一，诸多实验证据证实组蛋白甲基化对肿瘤的发生发展有着十分重要的影响。表观遗传经常导致癌症中的肿瘤抑制基因的沉默，为癌症生物学中一个关键的调节作用。组蛋白修饰主要有甲基化，乙酰化，磷酸化等多种形式。组蛋白甲基化转移酶SETDB1,其功能是常染色质主要的H3K9三催化甲基化和二甲基化的甲基化转移酶，在多个生物过程中都具有重要的作用。选择性的改变新陈代谢以满足生物合成和细胞生长和增殖的能量需求是肿瘤细胞的显著特征，胆固醇合成途径是肿瘤维持生长增殖所必须，以胆固醇合成通路作为研究对象在肿瘤防治中具有重要的科学价值。胆固醇广泛分布于各种细胞与组织，在细胞的正常生命活动中发挥重要的生理生化功能。众所周知，肿瘤细胞代谢重编程不仅改变了细胞命运，还改变了细胞的代谢水平：如有氧糖酵解取代了正常的有氧呼吸和糖酵解途径，脂肪酸和胆固醇合成途径增强等，从而满足肿瘤细胞生长和增殖的合成代谢需要。胆固醇的摄取和合成大大增加的状况在多种肿瘤中被证实。因此以肿瘤胆固醇代谢为靶点研究具有重要的理论和现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种下调SETDB1表达或下调SETDB1表达的试剂在制备下调胆固醇含量的药物中的应用；本专利技术的目的之二在于提供下调SETDB1表达或下调SETDB1表达的试剂在制备降低胆固醇途径相关基因表达量的药物中的应用；本专利技术的目的之三在于提供上调SETDB1表达或上调SETDB1表达的试剂在制备增加神经母细胞瘤软琼脂克隆形成能力的药物中的应用；本专利技术的目的之四在于提供上调SETDB1表达或上调SETDB1表达的试剂在制备上调胆固醇途径相关基因表达量的药物中的应用；本专利技术的目的之五在于提供下调SREBF2表达或下调SREBF2表达的试剂在制备抑制胆固醇途径相关基因表达量的药物中的应用；本专利技术的目的之六在于提供活性炭/葡聚糖处理胎牛血清在作为神经母细胞瘤胆固醇诱导剂中的应用。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：1、下调SETDB1表达或下调SETDB1表达的试剂在下调胆固醇含量中的应用。2、下调SETDB1表达或下调SETDB1表达的试剂在降低胆固醇途径相关基因表达量中的应用。优选的，所述胆固醇途径相关基因为ACAT2、HMGCR、HMGCS1、SREBF2或SREBF1。3、上调SETDB1表达或上调SETDB1表达的试剂在增加神经母细胞瘤软琼脂克隆形成能力中的应用。4、上调SETDB1表达或上调SETDB1表达的试剂在上调胆固醇途径相关基因表达量中的应用，所述胆固醇途径相关基因为ACAT2、HMGCR、HMGCS1、SREBF2或SREBF1。5、下调SREBF2表达或下调SREBF2表达的试剂在抑制胆固醇途径相关基因表达量中的应用。优选的，所述胆固醇途径相关基因为ACAT2、HMGCR、HMGCS1、SREBF2或SREBF1。6、活性炭/葡聚糖处理胎牛血清在作为神经母细胞瘤胆固醇诱导剂中的应用。此外，SETDB1还可以诊断胆固醇含量的靶点，其通过检测SETDB1表达可以检测胆固醇的含量。本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次公开了SETDB1参与调控胆固醇途径，下调SETDB1表达可下调胆固醇含量和下调胆固醇途径相关基因的表达，过表达SETDB1可以增加神经母细胞瘤软琼脂克隆形成能力中的应用和胆固醇途径相关基因的表达，SREBF2是Cholesterol途径的转录激活因子，过表达SREBF2能显著促进Cholesterol途径相关基因的表达，因此可以通过调控或检测SETDB1调控胆固醇代谢途径或诊断胆固醇相关疾病。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：图1为下调SETDB1抑制神经母细胞瘤的Cholesterol途径基因表达情况(A：BE2-C细胞下调SETDB1表达后Cholesterol途径相关基因表达；B：KCNR细胞下调SETDB1表达后Cholesterol途径相关基因表达；C：SHEP1细胞下调SETDB1表达后Cholesterol途径相关基因表达；D：FilipinIII阳性标记检测下调SETDB1对胆固醇的影响)。图2为上调SETDB1激活神经母细胞瘤的增殖、软琼脂克隆形成能力和Cholesterol途径基因表达情况(A：上调SETDB1神经母细胞瘤的增殖结果；B：上调SETDB1软琼脂克隆形成能力；C：上调SETDB1表达Cholesterol途径基因表达情况)。图3为SETDB1对神经母细胞瘤相应CharcoalStrippedFBS的作用(A：BE2-C和KCNR细胞中固醇途径相关基因显著上调；B：BE2-C和KCNR细胞中SETDB1表达；C：KCNR细胞下调SETDB1之后再进行CharcoalStrippedFBS处理固醇途径相关基因表达情况)。图4为下调SETDB1对SREBF2调控神经母细胞瘤Cholesterol途径有显著的抑制作用(A-B:过表达SREBF2能显著增加Cholesterol途径ACAT2、HMGCR、HMGCS1、SREBF2、SREBF1等基因的表达；C-D：下调SETDB1能显著抵制SREBF2引起的Cholesterol途径的激活)。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。本专利技术实施例中SETDB1shRNA载体构建方法如下：根据RNA干扰序列设计原则，针对目的基因的靶序列，利用Sigma在线设计4条RNA干扰靶序列，由华大基因合成干扰序列DNAOligio,退火后形成两端含有酶切位点AgeI和EcoRI的粘性末端，和AgeI和EcoRI双酶切的慢病毒载体pLKO.1-puro连接过夜，转化大肠杆菌感受态细胞，挑选抗性菌落并进行用NcoI和EcoRI酶切鉴定，将酶切验证后的重组子测序并进行序列比对。具体步骤如下：(1)在http://www.sigmaaldrich.com/china-mainland/zh/life-science/functional-genomics-and-rnai/shrna/individual-genes.html网站输入SETDB1(GeneID:9869)，查找相应的靶序列，利用addgene上pLKO.1的protocol设计合成DNA序列。基本原则是：正向寡核苷酸：5’CCGG-21个碱基(靶序列)-CTCGAG(loop)-21个反向互补碱基序列-TTTTTG3’；反向寡核苷酸(Reverseoligo)：5’AATTCAAAAA-21个碱基(靶序列)-CTCGAG(loop)-21个反向互补碱基序列3’本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.下调SETDB1表达或下调SETDB1表达的试剂在制备下调胆固醇含量的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.下调SETDB1表达或下调SETDB1表达的试剂在制备下调胆固醇含量的药物中的应用。2.下调SETDB1表达或下调SETDB1表达的试剂在制备降低胆固醇途径相关基因表达量的药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述胆固醇途径相关基因为ACAT2、HMGCR、HMGCS1、SREBF2或SREBF1。4.上调SETDB1表达或上调SETDB1表达的试剂在制备增加神经母细胞瘤软琼脂克隆形成能力的药物中的应用。5.上调SETDB1表达或上调SETD...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔红娟，祝顺琴，丁寒飞，何荫良，
申请(专利权)人：西南大学，富恩生物技术成都有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50