一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法技术

本发明专利技术提供了一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法，包括：取代表性芥子油样品，充分混匀，再经过提取、净化后，得到待测液；将待测液采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行分析检测，将超高效液相色谱‑串联质谱检测所获得分取比例及种菌唑的峰面积代入下式进行计算，以获得待测液中种菌唑的测定值：

【技术实现步骤摘要】
一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法
本专利技术具体涉及一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法。
技术介绍
芥菜籽为十字花科(Cruciferae)芸苔属植物的种子，其种类有黄芥籽和白芥籽、褐芥籽等三种。传统医学认为：芥菜籽性味辛温，入肺、胃经。功擅利气豁痰、温中散寒、通络止痛，常用于治疗痰饮咳喘、胸胁胀满疼痛、四肢麻木、关节疼痛、阴疽肿毒等病。《本草纲目》记载历代医家常用之治疗常见病及顽痰怪症。近年来研究发现，芥菜籽中含有异硫氰酸酯、芥酸、酚类物质、菲丁等多种化学成分，具有抗癌、抗菌等多种生理功能。芥菜籽榨出的油称芥子油，其辣味强烈，可刺激唾液和胃液的分泌，有开胃的作用，能增强食欲，另外还有解毒、美容养颜等功效，是非常受人们欢迎的调味品。菌唑类杀菌剂具有抗菌谱广及内吸性强等特性，在农药领域中已成为很重要的一类。种菌唑是由日本吴羽化学公司开发的新款唑类杀菌剂，可用于作物种子，防治许多种子病害；尤其对恶苗病、叶斑病和稻瘟病等特别有效，被称作作物种子杀菌剂的“种子选手”。种菌唑通用名为ipconazole,商品名为Techlead,代号KNF-317，化学名为(1RS,2SR,5RS；1RS,2SR,5SR)-2-(4-氯苄基)-5-异丙基-1-(1H-1、2、4-三唑-1-基甲基)环戊醇。在美国、加拿大、日本等发达国家，种菌唑作为种子处理杀菌剂，已广泛用于许多作物。由于其活性较高，且安全性相对较好，国内企业也陆续开始使用，使用范围和使用量将逐年增大。种菌唑对雄大鼠急性经口LD50为1,338mg/kg；对大鼠急性经皮LD50＞2,000mg/kg；对鲤鱼LC50(48h)为2.5mg/L。2018年6月28日，加拿大卫生部发布G/SPS/N/CAN/1162/Add.1通报，确定部分食品中种菌唑(Ipconazole)最大残留限量，涉及商品包括食用豆荚蔬菜(作物亚组6A)、多汁带壳豌豆和豆(作物亚组6B)、芥菜种子(调味品型)等，明确限量标准为0.01mg/kg。我国是芥子油生产、销售和出口大国，随着国际市场日益繁荣，如何提高产品质量，有效应对发达国家的技术壁垒，成为当前芥子油产品出口面临的重点难题。因此研究和制定芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法具有重要意义。目前，国内外且未见芥子油中种菌唑的检测方法报道。此外，经由ISO,ASTM,GB,SN等标准查新未见相关标准发布，经专利网查询也未见相关专利报道。因此急需开发准确、高效的芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测技术。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，在于提供一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法。本专利技术是这样实现的：一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法，包括以下步骤：步骤一：取代表性芥子油样品，充分混匀，经过提取、净化后，得到待测液；步骤二：将待测液采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，获得待测液中种菌唑的响应值，根据所述响应值选取相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中种菌唑的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置一空白对照；所述超高效液相色谱的条件为：色谱柱：ACQUITYUPLCBEH-C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱程序如下：步骤三：将超高效液相色谱-串联质谱检测所获得的分取比例及种菌唑的峰面积代入下式进行计算，以获得待测液中种菌唑的测定值；其中：X—试样中种菌唑残留含量，μg/kg；A—待测液中种菌唑的峰面积；As—标准工作溶液中种菌唑的峰面积；c—标准工作溶液中种菌唑浓度，μg/L；V—待测液最终定容体积，mL；m—试样的质量，g；R—分取比例。进一步地，步骤一中所述净化采用凝胶渗透色谱，条件为：凝胶渗透色谱净化柱：S-X3Bio-Beads(粒径38-75μm，填料22g)；流动相：环已烷-乙酸乙酯(1:1，V:V)；等度洗脱；流速：5mL/min；净化程序：0-9min弃去洗脱液，9-15min收集洗脱液。进一步地，步骤二所述串联质谱的条件：离子源：电喷雾ESI，正离子；扫描方式：多反应监测MRM；雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；监测离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气体能量、碰撞池出口电压如下：进一步地，所述步骤一的具体操作方法如下：(1)样品制备：取代表性芥子油样品，充分混匀，装入洁净容器密封，0℃-4℃避光保存，获得制备样；(2)样品提取：从制备样中称取试样5.0g，精确至0.01g，于具塞离心管中，加入10mL提取剂1，再加入5.0g提取剂2，漩涡混匀1min，5000r/min离心5min，取上清液；(3)样品净化：取上述上清液5mL,用凝胶渗透色谱仪进行分离净化，收集净化后溶液于45℃浓缩至近干，用2.5mL乙腈溶解，再加入0.3g吸附剂，漩涡混匀1min，过0.22μm滤膜，得到待测液。更进一步地，所述(2)中提取剂1为体积比1:1的环已烷-乙酸乙酯混合液；提取剂2为质量比2:3的氯化钠和硫酸镁混合试剂。更进一步地，所述(3)中的吸附剂为质量比1:2的十八烷基三甲氧基硅烷粉和N-丙基乙二胺粉混合试剂。本专利技术的优点在于：填补了我国在芥子油中种菌唑杀菌剂定量检测技术上的空白，且具有易于操作及检测准确性高的优点。【具体实施方式】一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法，包括以下步骤：步骤一：取代表性芥子油样品，充分混匀，再经过提取、凝胶渗透色谱净化后，得到待测液；具体地：(1)样品制备：取代表性芥子油样品，充分混匀，装入洁净容器密封并做好标识(操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化)，0℃-4℃避光保存；(2)样品提取：从制备样中称取试样5.0g(精确至0.01g)于50mL具塞离心管中，加入10mL提取剂1，再加入5.0g提取剂2，漩涡混匀1min，5000r/min离心5min，取上清液待净化；所述提取剂1为体积比1:1的环已烷-乙酸乙酯混合液；提取剂2为质量比2:3的氯化钠和硫酸镁混合试剂。(3)样品净化：取上述溶液5mL,用凝胶渗透色谱仪进行分离净化，收集9-15min的组分于鸡心瓶中45℃浓缩至近干，用2.5mL乙腈溶解，加入0.3g吸附剂，漩涡混匀1min，过0.22μm有机滤膜，备用。所述凝胶渗透色谱的条件为：净化柱：S-X3Bio-Beads(粒径38-75μm，填料22g)；流动相：环已烷-乙酸乙酯(1:1，V:V)；等度洗脱；流速：5mL/min；净化程序：0-9min弃去洗脱液，9-15min收集洗脱液。所述吸附剂为质量比1:2的十八烷基三甲氧基硅烷粉和N-丙基乙二胺粉混合试剂。步骤二：将待测液采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，获得待测液中种菌唑的响应值，根据所述响应值选取相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中种菌唑的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置一空白对照；所述超高效液相色谱-串联质谱的条件为：A.超高效液相色谱：色谱柱：BEH-C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：取代表性芥子油样品，充分混匀，经过提取、净化后，得到待测液；步骤二：将待测液采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行分析检测，获得待测液中种菌唑的响应值，根据所述响应值选取相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中种菌唑的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置一空白对照；所述超高效液相色谱的条件为：色谱柱：ACQUITYUPLCBEH‑C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱程序如下：

【技术特征摘要】
1.一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：取代表性芥子油样品，充分混匀，经过提取、净化后，得到待测液；步骤二：将待测液采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，获得待测液中种菌唑的响应值，根据所述响应值选取相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中种菌唑的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置一空白对照；所述超高效液相色谱的条件为：色谱柱：ACQUITYUPLCBEH-C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱程序如下：步骤三：将超高效液相色谱-串联质谱检测所获得的分取比例及种菌唑的峰面积代入下式进行计算，以获得待测液中种菌唑的测定值；其中：X—试样中种菌唑残留含量，μg/kg；A—待测液中种菌唑的峰面积；As—标准工作液中种菌唑的峰面积；c—标准工作液中种菌唑浓度，μg/L；V—待测液最终定容体积，mL；m—试样的质量，g；R—分取比例。2.如权利要求1所述的一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量检测方法，其特征在于：步骤一中所述净化采用凝胶渗透色谱，条件为：凝胶渗透色谱净化柱：填料为S-X3Bio-Beads；流动相：环已烷-乙酸乙酯，体积比1:1；等度洗脱；流速：5mL/min；净化程序：0-9min弃去洗脱液，9-15min收集洗脱液。3.如权利要求2所述的一种芥子油中种菌唑杀菌剂的定量...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云，陈俊玉，陈峰，
申请(专利权)人：张云，
类型：发明
国别省市：福建,35