一种杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌BtYJ2及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌BtYJ2及其应用，该苏云金芽孢杆菌的分类命名为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)BtYJ2，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2018801，保藏日期为2018年11月19日，保藏地址为中国武汉武汉大学。本申请用发酵液饲喂法对美国白蛾3龄幼虫进行了生物测定，结果显示，8小时致死率达80％，24小时致死率达100％，表明该菌具有较好的杀虫活性，为该菌进一步的生物防治应用打下了坚实的基础，具有很好的实用性。

【技术实现步骤摘要】
一种杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌BtYJ2及其应用
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌BtYJ2及其应用。
技术介绍
农林业病虫害严重损害林木作物的健康生长，是威胁林木和农作物安全的重要因素之一。目前应对农林业病虫害的主要方法为化学防治，但长期使用化学农药会使害虫产生抗药性使其更加难以杀灭，并且化学药剂会对环境造成很大危害。生物防治是指利用生物物种之间的相互关系，以一种或者一类生物抑制另一种或另一类生物的方法，目前生物防治大致可以分为捕食性天敌防治、寄生性天敌防治和微生物防治三大类。利用生物防治病虫害，能有效地避免这些问题，因而生物防治具有广阔的发展前途。美国白蛾(Hyphantriacunea)是世界性检疫害虫。主要危害果树行道树观赏树木，尤以阔叶树危害严重，对农作物林木果树等造成了严重的危害，目前已被列入我国首批外来入侵物种。其食性较杂，对300多种植物都有危害。最严重的一次灾情发生在1984年陕西杨凌的一个飞机修理厂。近400亩厂区所有法国梧桐和杨树的树叶都被吃光，虫子还跑到职工家里，窗体底端天花板、墙角、炉灶、床，无所不在。1995年，美国白蛾虫灾在天津塘沽再次暴发。当时市民出行必须打伞，以防止幼虫掉进脖子里。天津市政府的一份报告说，虫灾发生的地区有6成的叶子被吃光，原本翠绿的街道变成了灰色。近年来，美国白蛾又呈现出爆发的势态，2017年，江苏省涟水县美国白蛾疫情扩散范围大、灾情重；平均有虫株率达52.3％，部分调查样地有虫株率高达100％，远远高于美国白蛾成灾标准数倍；在部分危害重的乡镇地面随处可见美国白蛾老熟幼虫，有的甚至爬到居民家中，给百姓生活带来了极大困扰。芽孢杆菌是一种能形成芽孢的杆菌或者球菌，包括芽孢杆菌属、芽孢乳杆菌属、梭菌属、苏云金芽孢杆菌属等。芽孢杆菌由于产生内生孢子，对于外界环境具有较强的抵抗力，对于其所生存环境中的干燥。紫外线辐射伤害和热具有抵抗力并且能让自己免受影响，这样的生物学特征使芽孢杆菌具有非常良好的应用前景，例如使用活菌制剂的生物制品，很多生物农药是利用芽孢杆菌制成的，尤其是苏云金芽孢杆菌，苏云金杆菌生产的伴胞晶体在农林业上是有效的生物杀虫剂，目前已成为世界上使用量最大的生物农药。目前已知的苏云金芽孢杆菌亚种有以色列亚种，库斯塔柯亚种，科莫尔亚种，加拿大亚种等九个亚种。苏云金芽孢杆菌的母细胞会在形成芽孢的同时伴随着形成晶体蛋白，称之为伴胞晶体，伴胞晶体呈现立方体、球形、菱形、镶嵌形、无定形，是具有杀伤活力的杀虫晶体蛋白。它的伴孢晶体由一种或多种对昆虫具有专一毒性的蛋白质即δ内毒素组成。因为苏云金芽孢杆菌具有良好的特异性杀虫活性，效果好还不污染环境，苏云金芽孢杆菌已经成为目前最有效的生物杀虫剂。目前已知苏云金芽孢杆菌对鳞翅目、鞘翅目等九个目的昆虫和螨虫、植物线虫、原生动物、扁形动物等有特异性杀虫活性。苏云金芽孢杆菌对危害农林业的害虫有很强的杀虫活性。1999年姚江、徐兴权对苏云金芽孢杆菌Ly30的室内毒力测定结果表明，Ly30菌株对赤松毛虫、柏毛虫、菜青虫和玉米螟有明显的致病力。Ly30菌悬液感染的供试虫表现为食量小、排粪少、死虫较多且倒挂于枝叶上；对照菌株H7型标准菌株感染的供试虫表现为食量较大、排粪多、虫活跃，发育正常。此外，Ly30菌悬液喂毒菜青虫时最早在16h即有虫死亡，28h时其死亡率达96.17％；而对照菌株鲇泽亚种标准株感染时最早在24h有虫死亡，48h时其死亡率为73％。这证明Ly30对赤毛虫具有特异性的高毒力，Ly30会在林业防虫上有大规模的应用。国内美国白蛾的危害非常严重，是我国首批外来入侵物种，广泛分布于我国云南、广西、广东、江西、浙江、湖南、贵州、湖北和四川等地，美国白蛾幼虫喜欢群集在树叶上并吐丝网巢，并喜欢在网内食用叶片，网巢稀松不规则，1～2龄幼虫只食用叶肉，有时会将整片叶子上的叶肉全部吃光，只留下叶脉，会使叶片呈现为纱网状，4龄的白蛾幼虫开始食量大增，5龄后则进入暴食期造成严重的危害。幼年期的美国白蛾食量大，造成植物长势衰弱，抗逆性低下，果实品质降低，部分枝条甚至整株死亡。严重受害的果树，果实产量大减，被虫害的植物抗寒抗病能力下降，容易受到细菌真菌的侵袭。目前美国白蛾主要通过化学方法来进行防治，但长期使用化学药剂会对环境造成很大危害，寻找其他可代替的防治方法是有必要的。苏云金芽孢杆菌具有出色的杀虫活性，但是对美国白蛾具有有效的杀虫特异性的苏云金芽孢杆菌还未见有人报导。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一株杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌，满足使用需求。本专利技术的另一目的是提供一种上述一株杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌的应用。技术方案：为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：一株杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌，其分类命名为苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)BtYJ2，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2018801，保藏日期为2018年11月19日，保藏地址为中国武汉武汉大学。所述的苏云金芽孢杆菌BtYJ2在杀美国白蛾中的应用。所述的苏云金芽孢杆菌BtYJ2的培养物在杀美国白蛾中的应用。所述的苏云金芽孢杆菌BtYJ2在制备杀美国白蛾制剂中的应用。有益效果：与现有技术相比，本申请从连云港海域筛选到的BtYJ2菌株对美国白蛾2龄幼虫具有很好的活性，杀虫活性显示BtYJ2菌的杀虫效果明显，8h相对致死率即达到80％以上，24h达到100％，说明杀虫活性很强，比姚江等使用的Ly30还要活性高，是一株生防潜力极强的菌，具有很好的实用性。附图说明图1是BtYJ2号菌的菌落形态图；图2是光学显微镜下BtYJ2号菌的形态观察结果图；图3是光学显微镜下的BtYJ2芽孢和伴胞晶体形态结果图；图4是BtYJ2菌杀虫活性测试结果图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。以下实施例中所使用的培养基和试剂：液体培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，1000mLH2O，pH调整到7～8之间，121℃高温高压灭菌20min。固体培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂20g，1000mLH2O，pH值调整到7～8之间，121℃高温高压灭菌20min。实施例1从连云港海岸分离出的一株2号菌。将2号菌进行数次的分离提纯并放在25℃的温箱中固体培养，如图1所示，在固体平板上，菌落为乳白色，呈现沙质，干燥状。分离提纯2号菌的单菌落，培养一段时间后，进一步观察：取一张洁净的载玻片，在其中央滴一滴清水，用接种环刮取一小块2号菌，将其放置在载玻片上的清水中，自然晾干，草酸铵结晶紫染色1分钟。自来水冲洗，碘液染色约1分钟。水洗，用吸水纸吸去水分。滴加95％酒精进行脱色，蕃红染色1分钟，自来水冲洗。干燥，镜检。如图2所示，菌株革兰氏染色呈阳性，营养体细胞为杆状，两端钝圆。液体培养72h左右营养体细胞分解，只剩下芽孢和伴胞晶体(图3)，2号菌的伴胞晶体种类较多，其中大多数为球形，少数为菱形、不规则形。2)基因组的提取将分离纯化后的2号菌液体过夜培养(12h左右)，OD600值在0.9左右。使用捷瑞公司DNA提取试剂盒提取DNA。采用通用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌，其分类命名为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)BtYJ2，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2018801，保藏日期为2018年11月19日，保藏地址为中国武汉武汉大学。

【技术特征摘要】
1.一株杀美国白蛾的苏云金芽孢杆菌，其分类命名为苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)BtYJ2，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2018801，保藏日期为2018年11月19日，保藏地...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵银娟，祁广凡，孙宇航，郝德君，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32