一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列及其检测方法，具有如序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；该检测方法包括：取血液样本于离心管，加细胞裂解液，室温孵育离心；弃清上清，加入核裂解液，向裂解物中加入蛋白沉淀液，室温离心，取上清；加入异丙醇溶液，使DNA沉淀出现，离心，弃上清；加入乙醇洗涤沉淀，离心，弃去乙醇，自然挥干，加无核酶水溶解沉淀，吸取DNA样品用于DNA定量。本发明专利技术由20个IBD炎症细胞和配对的15个正常组织标本，取得标本后存冻于液氮罐中，集齐后采用T‑UCR芯片检测筛选出两条在IBD炎症细胞中高表达的UCR。

A highly expressed NCAPD2/NCAPD3 sequence in IBD inflammatory bowel disease and its detection method

The invention discloses an NCAPD2/NCAPD3 sequence highly expressed in IBD inflammatory bowel disease and its detection method, which has a nucleotide sequence as shown in SEQ ID NO.1 in the sequence table; the detection method includes: taking blood samples in a centrifugal tube, adding cell lysate, incubating and centrifuging at room temperature; discarding supernatant, adding nuclear lysate, adding protein precipitate to lysate, and centrifuging at room temperature. Take the supernatant; add isopropanol solution, make DNA precipitation appear, centrifuge, discard the supernatant; add ethanol washing precipitation, centrifuge, discard ethanol, natural drying, add ribozyme-free water to dissolve precipitation, absorb DNA samples for DNA quantitative analysis. The present invention consists of 20 IBD inflammatory cells and 15 paired normal tissue specimens. The specimens are obtained and frozen in liquid nitrogen tank. After collection, two UCRs with high expression in IBD inflammatory cells are screened by T_UCR chip detection.

【技术实现步骤摘要】
一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列及其检测方法
本专利技术涉及一种NCAPD2/NCAPD3序列及其检测方法，特别是涉及一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列及其检测方法，属于细胞分子生物学

技术介绍
炎症性肠病IBD是一种病因尚不明确的慢性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎UC和克罗恩病CD，IBD病程迁延反复，治疗手段虽多，效果均不理想且预后不佳，严重影响患者生活质量，耗费大量卫生资源且是导致肠道肿瘤的癌前病变之一，研究表明，IBD在既往高发病率的西方国家趋于稳定，而在亚洲国家呈逐渐增加的趋势。中国IBD诊断存在的最大一个问题是与感染性肠道疾病的鉴别诊断，而最难的是与肠结核的鉴别诊断；近年来有很多报道提出血清学标志物对于IBD的鉴别诊断具有较大价值；欧美国家多数研究表明抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA、人抗酿酒酵母抗体ASCA约诊断敏感度达60％，特异度达70％；但国际上关于血清标志物诊断的价值在不同种族疾病人群中存在差异，且其他血清标志物(如抗胰腺腺泡抗体PAB)尚未应用于我国临床中，其临床价值还有待进一步探讨；因此，寻找并研制能够准确诊断IBD、监测IBD疾病进展状况的临床试剂盒对提高我国IBD患者的临床治疗具有重要意义和价值。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的主要目的是为了提供一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列及其检测方法。本专利技术的目的可以通过采用如下技术方案达到：一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列，该NCAPD2/NCAPD3序列具有如序列表中SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列的检测方法，包括根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的长链非编码RNA设计并合成出特异性用于LAMP检测的特异性引物。进一步的，特异性引物包括内引物FIP和内引物BIP和一对外引物F3和B3，其分别为：内引物FIP为Pair1上游引物：SEQIDNO.2；内引物BIP为Pair1下游引物：SEQIDNO.3；外引物F3为Pair2上游引物：SEQIDNO.4；外引物B3为Pair2下游引物：SEQIDNO.5。进一步的，包括如下步骤：步骤1：取血液样本于离心管中，加入细胞裂解液，混匀，室温孵育离心；步骤2：弃清上清，加入核裂解液，混匀，向裂解物中加入蛋白沉淀液，室温离心，取上清；步骤3：加入异丙醇溶液，使DNA沉淀出现，离心，弃上清；步骤4：加入等体积的乙醇洗涤沉淀，离心，弃去乙醇，自然挥干，加无核酶水溶解沉淀，吸取DNA样品用于DNA定量。进一步的，步骤1中，取300ul血液样本于1.5mL离心管中，加入900uL细胞裂解液，上下颠倒离心管5-6次混匀，室温孵育10min，13000g室温离心30s。进一步的，步骤2中，加入300uL核裂解液，充分混匀，以裂解细胞，向裂解物中加入蛋白沉淀液100uL，剧烈震荡10-20s，13000g，室温离心3min，取上清。进一步的，步骤3中，加入300uL异丙醇溶液，来回颠倒2-3次，DNA沉淀出现，13000g离心2min，弃上清。进一步的，步骤4中，加入等体积的70％室温乙醇洗涤沉淀，13000g离心2min，弃去乙醇，置超净台中自然挥干，加100uL无核酶水溶解沉淀，吸取DNA样品1uL用于DNA定量。进一步的，反应体系级条件如下：内引物FIP：0.8mM；内引物BIP：0.8mM；外引物F3：0.2mM；外引物B3：0.2mM；dNTPs：1.6mM；betaine：1M；反应缓冲液：20mMTris-HCl(pH8.8)；10mMKCl；10mM(NH4)2SO4；4mMMgSO4；0.1％TritonX-100；BstDNApolymeraselargefragment：8UI；模板DNA1ug。进一步的，模板DNA在恒温扩增前95℃反应5min，加入体系后65℃反应60min，形成循环扩增始发物及循环延伸。本专利技术的有益技术效果：本专利技术提供的在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列及其检测方法，为了系统研究与IBD炎症性肠病发生密切相关的NCAPD2/NCAPD3序列，由20个IBD炎症细胞和配对的15个正常组织标本，取得新鲜的标本后存冻于液氮罐中，集齐后采用T-UCR芯片检测筛选出两条在IBD炎症细胞中高表达的UCR，其中NCAPD2/NCAPD3显著表达高，其基因序列如SEQIDNO.1所示。附图说明图1为专利技术的NCAPD2UC与正常样本比较实验图；图2为专利技术的NCAPD2UC与正常样本比较实验图；图3为专利技术的NCAPD2UC与正常样本比较组统计量；图4为专利技术的NCAPD2UC与正常样本比较独立样本检验表；图5为专利技术的NCAPD3UC与正常样本比较实验图；图6为专利技术的NCAPD3UC与正常样本比较实验图；图7为专利技术的NCAPD3UC与正常样本比较组统计量；图8为专利技术的NCAPD3UC与正常样本比较独立样本检验表；图9为专利技术的NCAPD2UC与NC、CRC比较实验图；图10为专利技术的NCAPD2UC与NC、CRC比较实验图；图11为专利技术的NCAPD2UC与NC、CRC比较组统计量；图12为专利技术的NCAPD2UC与NC、CRC比较独立样本检验表；图13为专利技术的NCAPD3UC与NC、CRC比较实验图；图14为专利技术的NCAPD3UC与NC、CRC比较实验图；图15为专利技术的NCAPD3UC与NC、CRC比较组统计量；图16为专利技术的NCAPD3UC与NC、CRC比较独立样本检验表。具体实施方式为使本领域技术人员更加清楚和明确本专利技术的技术方案，下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1：在本实施例中，本实施例提供的在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列，该NCAPD2/NCAPD3序列具有如序列表中SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。在本实施例中，本实施例提供的在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列的检测方法，包括根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的长链非编码RNA设计并合成出特异性用于LAMP检测的特异性引物，特异性引物包括内引物FIP和内引物BIP和一对外引物F3和B3，其分别为：内引物FIP为Pair1上游引物：SEQIDNO.2；内引物BIP为Pair1下游引物：SEQIDNO.3；外引物F3为Pair2上游引物：SEQIDNO.4；外引物B3为Pair2下游引物：SEQIDNO.5。引物序列如下表1所示：表1引物序列在本实施例中，本实施例提供的在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列的检测方法，包括如下步骤：步骤1：取300ul血液样本于1.5mL离心管中，加入900uL细胞裂解液，上下颠倒离心管5-6次混匀，室温孵育10min，13000g室温离心30s；步骤2：弃清上清，加入300uL核裂解液，充分混匀，以裂解细胞，向裂解物中加入蛋白沉淀液100uL，剧烈震荡10-20s，13000g，室温离心3min，取上清；步骤3：加入300uL异丙醇溶液，来回颠倒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列，其特征在于，该NCAPD2/NCAPD3序列具有如序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列，其特征在于，该NCAPD2/NCAPD3序列具有如序列表中SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。2.一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列的检测方法，其特征在于，包括根据核苷酸序列为SEQIDNO.1的长链非编码RNA设计并合成出特异性用于LAMP检测的特异性引物。3.如权利要求2所述的一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列的检测方法，其特征在于，特异性引物包括内引物FIP和内引物BIP和一对外引物F3和B3，其分别为：内引物FIP为Pair1上游引物：SEQIDNO.2；内引物BIP为Pair1下游引物：SEQIDNO.3；外引物F3为Pair2上游引物：SEQIDNO.4；外引物B3为Pair2下游引物：SEQIDNO.5。4.如权利要求2所述的一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：取血液样本于离心管中，加入细胞裂解液，混匀，室温孵育离心；步骤2：弃清上清，加入核裂解液，混匀，向裂解物中加入蛋白沉淀液，室温离心，取上清；步骤3：加入异丙醇溶液，使DNA沉淀出现，离心，弃上清；步骤4：加入等体积的乙醇洗涤沉淀，离心，弃去乙醇，自然挥干，加无核酶水溶解沉淀，吸取DNA样品用于DNA定量。5.如权利要求2所述的一种在IBD炎症性肠病中高表达的NCAPD2/NCAPD3序列的检测方法，其特征在于，步骤1中，取300ul血液样本于1.5mL离心管中，加入900uL细胞裂解液，上下颠倒离心管5-6次混匀，室温孵育10min，13000g室温离心30s。6.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨柏霖，刘平，袁昌文，徐治中，沈伟，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32