三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途制造技术

本发明专利技术涉及分子技术领域，具体涉及三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途，人参皂苷Rb1与位点SSR35，SSR2‑57有关联。本发明专利技术对SSR标记与人参皂苷Rb1的关联性研究，有利于高含量皂苷Rb1三七品种的选育的开展。

Application of SSR marker of Panax notoginseng in determination of ginsenoside Rb1 content

The present invention relates to the field of molecular technology, in particular to the application of SSR markers of Panax notoginseng in the determination of ginsenoside Rb1 content, and ginsenoside Rb1 is associated with site SSR35 and SSR2 57. The study on the correlation between SSR marker and ginsenoside Rb1 is beneficial to the breeding of high content ginsenoside Rb1 notoginseng varieties.

【技术实现步骤摘要】
三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途
本专利技术涉及分子
，具体涉及SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途。
技术介绍
三七(Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen)是五加科(Araliaceae)人参属(PanaxLinn.)多年生草本植物，分布于中国西南地区。三七的主要成分有三七总皂苷(PNS)、三七素(三七氨酸)、黄酮、挥发油、氨基酸、糖类等，具有止血、保护心肌细胞、保护脑组织、降血脂、抗血栓、增强免疫力、抗炎、抗纤维化、抗肿瘤、消除氧自由基、抗氧化等药理作用。三七的纺锤根是著名的跌打损伤特效药，止血散瘀、定痛消肿的功效良好，叶、果及根状茎也可入药，是“云南白药”和“片仔癀”的有效成分之一。三七主要分布于我国北回归线附近的云南、广西的高海拔地区。云南东南部的文山及其周边地区是三七主产区和道地产区，种质面积和产量占全国98％。到目前三七已有400多年的栽培历史，但三七种质混杂现象仍然存在。加之三七生态适应能力弱、地理分布区域狭窄、生长周漫长、繁殖系数低、种子寿命短以及种植过程中，频繁的使用农药和化肥导致三七产生连作障碍，可种植三七的土地面积逐渐减少，原因主要是由于目前对三七遗传多样性了解还不够，遗传资源的利用缺乏理论指导；对形态类型的遗传背景不清楚，不能有针对的进行新品种选育。开发分子标记将为三七种质资源的利用和遗传改良提供依据。三七分子标记研究：目前国内外对三七的研究主要集中在化学成分、皂苷含量变、药理药效、三七对重金属敏感性以及连作体系中土壤细菌和真菌群落动态与三七死亡率的相关性。随着DNA分子标记技术快速发展，SNP、RAPD、AFLP及EST等标记相继用于人参属植物中。HongmeiLuo等利用二代测序技术从三七的根部获得大量EST数据，找到与三萜皂苷生物合成相关酶编码序列的SSR标记。董林林等对三七抗病群体的SNP位点进行检测，发现record_519688位点与三七抗病性相关，并对三七群体潜在的抗病性进行系统选育，选育了首个三七抗病新品种“苗乡抗七1号”；李翠婷等通过对野三七转录组数据进行分析，发现野三七的转录组中存在大量SSR位点，为野三七的遗传多样性分析、遗传图谱构建提供了丰富的候选分子标记；杨云等利用ISSR、SRAP两种分子标记，对集团选择四代后的3个改良群体和自然群进行一致性、稳定性和特异性鉴定与评价，结果表明，集团选择的3个群体一致性均大于自然群体；刘丽等利用RAPD技术对人参、西洋参以及三七的亲缘关系进行评价，结果表明人参和西洋参亲缘关系较近，和三七的亲缘关系相对较远；张金渝等利用EST-SSR标记，以4个不同栽培居群通过3代集团选育的17份外观形状基本一致的选育品系为材料，以屏边三七为对照分析群体间遗传多样性，结果显示，17份选育品系材料和屏边三七被划分为4大类群，其中17份三七选育品系被分为3个类群，屏边三七单独聚为1个类群。三七遗传多样性分析：遗传多样性是指生物所携带的遗传信息的总和。广义上是指种内或种间在分子、细胞、个体水平上的遗传变异；狭义上指种内不同群体以及同一群体不同个体间的遗传多态性程度。从1987年云南省文山州三七研究所建立屏边三七、姜状三七、竹节参、人参、西洋参、峨眉三七、狭叶竹节参等人参属植物种质资源圃以来，三七在栽培育种、生物学、化学成分、病虫害防治以及GAP种植等方面已经进行了细致研究，但对其遗传结构和遗传多样性的研究还不够，没有进行系统全面的分析。遗传变异检测最古老、最简单易形的方法利用形态学或者表型性状，表型性状主要包括符合孟德尔遗传规律的单基因性状和由多基因决定的数量性状。肖慧等对文山州四个地区的10个三七栽培群体33个表型性状进行观测、统计和分析，结果表明三七居群间和居群内多形性明显，表型变异丰富，具有丰富的遗传多样性；张金渝等对文山四个地区10个不同栽培居群的表型性状进行统计分析，结果表明有关质量性状(包括植株鲜重和干重、主根鲜重和干重、剪口鲜重和干重)的变异系数和幅度在所有性状均较大，表明三七栽培居群质量变异丰富。根据表型多样性指数分析显示，数量性状的遗传多样性较丰富。通过遗传标记中的分子标记找到控制表型性状的基因，以及基因组所处的位置，来实现标记辅助选择育种。DongWang等用荧光AFLP对来自文山4个县栽培三七群体的92个植株的遗传多样性进行分析，发现样品之间不仅形态特征变异较大，分子变异分析也显示种群内的遗传多样性高达93.5％；肖慧等通过同工酶标记对三七及其近缘种屏边三七的遗传多样性进行研究，结果显示，遗传变异主要存在于居群间，居群内遗传分化较小；张金渝通过EST-SSR对文山6个居群三七和珠子参以及屏边三七的遗传多样性进行分析，结果显示三七居群内遗传多样性丰富，三七和珠子参有较近的遗传关系，和屏边三七遗传距离较远。以上研究均表明三七在群体内部和群体之间都存在丰富的遗传变异。三七新品种的选育成效很大程度上取决于品种的遗传多样性。通过研究三七的遗传多样性，不仅有利于建立三七品种收集保存的理论依据，还能锁定和改良某些性状，为三七品种改良提供理想的种质资源。SSR作为一种分子标记，和EST-SSR相比较，SSR能够揭示比EST-SSR更高的多态性和遗传信息，同时基因组SSR分布贯穿生物基因组，EST-SSR只是表达基因的一部分。ChoYG等在水稻中发现，基因组SSR多态性为83.80％高于EST-SSR的多态性(54.00％)，EUjayI对硬粒小麦的基因组SSR和EST-SSR进行比较发现，EST-SSR产生高质量的标记，但是揭示的多态性(25％)比基因组SSR低(53.00％)。前人对三七及其野生近缘种遗传多样性的研究包括同工酶标记、ISSR、RAPD和EST-SSR。但是对于三七新品种选育和遗传改良的分子标记还很少，通过EST开发的SSR标记，只对基因组序列的一小部分进行分析，因此对三七全基因组SSR标记的分布特点研究较少。
技术实现思路
针对以上技术问题，本专利技术提供了三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的应用。本专利技术的技术方案：三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途。进一步的，人参皂苷Rb1与位点SSR35有关联。进一步的，人参皂苷Rb1与位点SSR2-57有关联。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：对SSR标记与皂苷Rb1的关联性研究，有利于高含量皂苷Rb1三七育种的开展。附图说明图1为引物PSQ63部分扩增产物毛线管电泳峰图，图中横坐标是扩增产物大小，纵坐标是信号强度，双峰表示二倍体杂合体植株，A、B、C分别代表对照、紫茎和绿茎三七；图2为三七群体结构分析LnP(D)值随K值的变化规律；图3为三七群体结构分析ΔK值随K值的变化规律；图4为基于SSR标记的248份三七不同栽培居群遗传结构图，红色表示群体1，绿色表示群体2，图中编号1-28代表ZY群体、29-57代表AG群体、58-80代表U6群体、81-92代表LJ群体、93-121代表DQHY群体、122-147代表KQ群体、148-175代表BQ1群体、176-203代表BQ2群体、204-231代表ZHY群体，232-248代表MXYH群体；图5为三七群体皂苷含量HPLC色图谱，a代表AG，b代表KQ，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途。

【技术特征摘要】
1.三七SSR标记在人参皂苷Rb1含量确定上的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：人参皂苷Rb1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张广辉，杨生超，刘冠泽，卢迎春，赵艳，范伟，掲应碧，李莹，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：云南,53