猪多组学整合精准育种方法技术

猪多组学整合精准育种方法，本发明专利技术公开了一种鉴定或辅助鉴定猪产仔性状的方法，所述方法通过测定猪HSD17B1基因mRNA的表达量，判定猪产仔性状，具体地，通过获得猪卵巢组织细胞的总RNA，经反转录、定量PCR确定猪HSD17B1基因mRNA的表达量，mRNA的表达量低的猪，具有较高的产仔数和/或窝重。同时，利用上述鉴定方法和人工选择，可实施高产仔数的猪的育种。本发明专利技术鉴定方法及在育种中的应用，不依赖于基因组编辑手段，提高了广大群众的接受度，实现了种猪选育的新突破。

Integrated pig breeding method for precise breeding

The invention discloses a method for integrated and precise breeding of pig multi group. The invention discloses a method for identifying or assisting the identification of Pig Litter traits. The method determines Pig Litter traits by measuring the expression level of mRNA gene of pig HSD17B1, specifically by obtaining the total RNA of porcine ovarian tissue cells, and determining the expression level of HSD17B1 gene mRNA by reverse transcription and quantitative PCR, and the pig with low expression of mRNA. It has higher litter size and/or litter weight. At the same time, the above identification method and artificial selection can be applied to pig breeding with high yield. The identification method of the invention and its application in breeding do not depend on genome editing method, improve the acceptance of the masses, and realize a new breakthrough in pig breeding.

【技术实现步骤摘要】
猪多组学整合精准育种方法
本专利技术涉及猪多组学整合精准育种方法，具体涉及用以提高猪的繁殖效率的多组学整合精准育种方法。
技术介绍
我国养猪业历史悠久，猪种资源丰富，分布广泛，有着巨大的利用潜力和广阔的发展前景。种猪生产是养猪业生产的基础，只有通过科学地饲养管理，种猪才能繁殖出数量多、质量高的仔猪，才能提高养猪业的经济效益。随着我国经济持续快速的发展，人们的生活水平逐渐提高，对猪肉的需求量也越来越高，因此，人们也越来越关注如何提高猪的繁殖性能。繁殖性能是猪的重要经济性状，包括产仔数、初生重和初生窝重、断乳窝重、初产日龄和产仔间隔等。母猪繁殖力的选育对于提高养猪生产整体效益起到至关重要作用，给养猪业带来巨大经济效益，是影响养猪业生产效率的重要因素之一。一方面，目前获得高繁殖效率猪的方法主要集中在基因组编辑。在转基因技术和体细胞克隆技术的基础上发展起来的基因组编辑技术，可以通过对目标基因进行“编辑”，包括对特定DNA片段的敲除、特异突变引入和定点DNA片段转入等，从而实现对基因组的精确修饰。我国在基因组编辑猪相关方面研究进展迅速，并获得了一系列农用、医用工程猪。科研人员通过基因操作将有利基因引入特定的位点，从而提高外源基因的稳定性和效率，改变动物的遗传特定，如提高动物的生产性能，最终育成满足人们需要的高产、优质、抗病动物新品种。此外，也可以对于一些负调控动物生长的基因进行修饰或敲除，培育出高产的转基因动物。然而，人们在对猪肉产量要求提高的同时，越来越注重猪的培育方法对猪品质的作用，对人类健康的影响。由于科学界难以在短时间内证实转基因动物对人类的健康完全无副作用，以及广大群众对转基因动物的认知不足，人们对食用非转基因动物存在强烈的渴求，同时造成了非转基因食用动物价格高于转基因动物。另一方面，除去基因组编辑技术，其他育种理论的实现同样需要对猪基因组的了解。然而，目前对猪基因组的了解和认识远远不足，对影响猪繁殖效率(包括猪产仔数和平均胎重等)的基因掌握尚不全面，有必要进一步进行研究，满足猪培育方法的需求。因此，亟需建立一种全新的高繁殖效率猪的培育方法，以满足市场需求，提高经济效益，实现我国猪育种理论和技术水平的提升，实现我国猪种业的跨越式发展。
技术实现思路
本专利技术人进行了锐意研究，针对上述猪育种方法中存在的问题，通过在转录水平上对候选基因的定量，确定了HSD17B1基因对猪产仔性状的影响，进而提供了一种用以提高猪的繁殖效率的育种方法，该方法未采用基因组编辑手段，提高广大群众接受度，从而完成本专利技术。本专利技术的目的在于提供以下方面：(1)一种鉴定或辅助鉴定猪产仔性状的方法，其中，所述方法包括测定猪HSD17B1基因mRNA的表达量，判定猪产仔性状的步骤。在一种优选的实施方式中，猪HSD17B1基因mRNA的表达量与产仔性状之间的关系为：mRNA的表达量低的猪，具有较高的产仔数和/或窝重；mRNA的表达量高的猪，具有较低的产仔数和/或窝重。在一种优选的实施方式中，通过获得猪卵巢组织细胞的总RNA，经反转录、定量PCR确定猪HSD17B1基因mRNA的表达量，在定量PCR步骤中，包括用于扩增HSD17B1基因mRNA反转录产物的扩增引物，所述扩增引物P3和P4的核苷酸序列分别包括SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示序列。在另一种优选的实施方式中，所述方法中包括采用测定HSD17B1基因mRNA的表达量的试剂盒，所述试剂盒包括扩增引物P3和P4，所述扩增引物P3和P4的核苷酸序列分别包括SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示序列。在一种优选的实施方式中，所述待鉴定的猪为大白猪或梅山猪。(2)一种高产仔数的猪的育种方法，其中，包括选择HSD17B1基因mRNA的表达量低的猪作为亲本杂交的步骤。在一种优选的实施方式中，所述育种方法包括以下步骤：步骤1，选择HSD17B1基因mRNA的表达量低的猪作为亲本杂交，获得F1代仔猪；步骤2，对F1代仔猪进行mRNA定量分析，选育HSD17B1基因mRNA的表达量低的仔猪，成年后继续杂交得F2代仔猪；步骤3，对F2代仔猪进行mRNA定量分析，选育HSD17B1基因mRNA的表达量低的仔猪，成年后继续杂交得F3代仔猪。重复上述步骤2或3，最终得到HSD17B1低表达量、高遗传性、高产仔数和/或窝重的种猪。(3)一种用于测定HSD17B1基因mRNA的表达量的试剂盒，所述试剂盒包括扩增引物P3和P4，所述扩增引物P3和P4的核苷酸序列分别包括SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示序列。(4)上述(1)所述的HSD17B1基因在鉴定或辅助鉴定猪产仔性状方面的用途；和/或上述(1)中用以检测所述HSD17B1基因mRNA的表达量的扩增引物在鉴定或辅助鉴定猪产仔性状方面的用途；和/或上述(1)中用以检测所述HSD17B1基因mRNA的表达量的试剂盒在鉴定或辅助鉴定猪产仔性状方面的用途。(5)上述(1)所述的HSD17B1基因在高产仔猪育种方面的用途；和/或上述(1)中用以检测所述HSD17B1基因mRNA的表达量的扩增引物在高产仔猪育种方面的用途；和/或上述(1)中用以检测所述HSD17B1基因mRNA的表达量的试剂盒在高产仔猪育种方面的用途。根据本专利技术提供的猪多组学整合精准育种方法，具有以下有益效果：1、本专利技术发现的与猪产仔性状相关的HSD17B1基因，可用于促进高产仔数猪的育种选择，加快育种过程；2、本专利技术提供的HSD17B1基因上的SNP位点，相关扩增引物或延伸引物，可有效用于鉴定或辅助鉴定高产仔数/窝重的猪，加快高产仔数猪的遗传进展；3、本专利技术提供的基于HSD17B1基因和/或SNP位点的育种方法，在自然杂交的基础上进行人工选择，不依赖于基因组编辑，可更好满足市场对非转基因肉类的需求；同时将转录层面和基因层面与猪产仔性状相关的因素相结合，实现多组学整合精准育种。附图说明图1是实施例1中梅山猪与大白猪HSD17B1基因表达量结果图。具体实施方式下面通过对本专利技术进行详细说明，本专利技术的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其他实施例。由于目前对影响猪生产效率即产仔性状(包括猪产仔数和胎重等)的基因掌握尚不全面，本专利技术人进行了深入研究，以完善相关基因在产仔性状方面的功能，进而满足猪培育方法的需求。本专利技术人长期以来致力于种猪的培育，涉及重要功能基因的鉴定工作，取得了重要的进展。本专利技术发现，HSD17B1基因为影响猪产仔性状的候选基因。HSD17B1基因是HSD17B家族的一个成员，主要在雌激素生物合成的最后一步发挥作用，在动物生长、发育和生殖过程中具有重要的调控作用，能够将雌激素转化为更有生物活性的雌二醇。目前对HSD17B1与一些生殖疾病的发生、发展进行了关联，但尚未有明确的结论。有研究者在乳腺癌、子宫内膜癌中都检测到HSD17B1基因的表达；不同的研究者还分别对HSD17B1基因的多态性或者变异与乳腺癌、子宫内膜癌的相关性进行研究，然结果表明，HSD17B1基因的多态性或者变异都与研究的癌症无显著性相关。同时了解到，猪生产效率指标如产仔数、胎重和窝重等与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴定或辅助鉴定猪产仔性状的方法，其特征在于，所述方法包括测定猪HSD17B1基因mRNA的表达量，判定猪产仔性状的步骤。

【技术特征摘要】
1.一种鉴定或辅助鉴定猪产仔性状的方法，其特征在于，所述方法包括测定猪HSD17B1基因mRNA的表达量，判定猪产仔性状的步骤。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，猪HSD17B1基因mRNA的表达量与产仔性状之间的关系为：mRNA的表达量低的猪，具有较高的产仔数和/或窝重；mRNA的表达量高的猪，具有较低的产仔数和/或窝重。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过获得猪卵巢组织细胞的总RNA，经反转录、定量PCR确定猪HSD17B1基因mRNA的表达量，在定量PCR步骤中，包括用于扩增HSD17B1基因mRNA反转录产物的扩增引物P3和P4，所述扩增引物P3和P4的核苷酸序列分别包括SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示序列。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中包括采用测定HSD17B1基因mRNA的表达量的试剂盒，所述试剂盒包括扩增引物P3和P4，所述扩增引物P3和P4的核苷酸序列分别包括SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示序列。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待鉴定的猪为大白猪或梅山猪。6.一种高产仔数的猪的育种方法，其特征在于，包括选择HSD17B1基因mRNA的表达量低的猪作为亲本杂交的步骤。7.根据权利要求6所述的育种方法，其特征在于，所述育种方法包括以下步骤：步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：李奎，周荣，杨亚岚，唐中林，刘颖，李文通，敖红，牟玉莲，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11