CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体，所述重组载体含有CPR基因、小肽2A‑Sig序列和CYP9A12基因，所述CPR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述小肽2A‑Sig序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述CYP9A12基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；并提供了其制备方法和应用。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术提供的CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体及其制备方法和应用，是针对棉铃虫细胞色素P450 CPR‑CYP9A12微粒体酶在体外能够降解棉酚所提供的，能够将外源添加棉酚降解酶用于降低棉籽粕中棉酚含量，从而提高棉籽粕在饲料配方中的用量。

Recombinant vectors co-expressing CPR and CYP9A12 genes and their preparation and Application

The present invention discloses a recombinant vector co-expressing CPR and CYP9A12 genes. The recombinant vector contains CPR gene, small peptide 2A Sig sequence and CYP9A12 gene. The nucleotide sequence of the CPR gene is shown as SEQ ID NO:1, the nucleotide sequence of the small peptide 2A Sig sequence is shown as SEQ ID NO:2, and the nucleotide sequence of the CYP9A12 gene is shown as SEQ ID NO:3. Preparation method and application. The beneficial effects of the present invention are as follows: The CPR and CYP9A12 co-expression recombinant vectors and their preparation methods and applications are provided for cottonseed bollworm cytochrome P450 CPR CYP9A12 microsomal enzymes, which can degrade gossypol in vitro, and can use exogenous gossypol degrading enzymes to reduce gossypol content in cottonseed meal, thereby increasing the dosage of cottonseed meal in feed formulation.

【技术实现步骤摘要】
CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物基因工程
，具体涉及CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体及其制备方法和应用。
技术介绍
棉酚作为棉花的次生代谢物质，可以诱导棉铃虫P450基因的表达量发生变化。昆虫对外源有毒物质和植物次生代谢物如农药或棉酚等具有耐受性并发挥降解代谢作用主要依赖于细胞色素P450酶。与植物次生代谢物质相关的P450大多为CYP6与CYP9家族。Mao等(2007，2011)分别以可沉默CYP6AE14基因的转基因拟南芥和烟叶饲喂棉铃虫，发现棉铃虫对于棉酚的抵抗力减弱，生长发育受到了显著抑制；并且CYP6AE14在棉铃虫的中肠段高度表达并专一地被棉酚诱导。Zhou等(2010)研究发现棉酚能够诱导棉铃虫中肠和脂肪组织中CYP9A17和CYP9A12基因表达增加。Tao等(2012)的研究证实，在人工饲料中添加棉酚可以诱导棉铃虫中肠P450酶活性，棉铃虫中肠内脱酯酶和P450酶活性显著提高，且CYP6AE14和CYP9A14基因上调。前期研究表明，HPLC和UPLC-QTOF/MS检测结果表明添加棉酚降解酶CPR-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体，其特征在于，所述重组载体含有CPR基因、小肽2A‑Sig序列和CYP9A12基因，所述CPR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述小肽2A‑Sig序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述CYP9A12基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

【技术特征摘要】
1.CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体，其特征在于，所述重组载体含有CPR基因、小肽2A-Sig序列和CYP9A12基因，所述CPR基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，所述小肽2A-Sig序列的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示，所述CYP9A12基因的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。2.根据权利要求1所述的CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体，其特征在于，所述CPR基因的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示，所述小肽2A-Sig序列的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示，所述CYP9A12基因的氨基酸序列如SEQIDN0：6所示。3.根据权利要求1所述的CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体，其特征在于，所述载体为pPICZαA质粒载体；所述双基因共表达重组载体为pPICZαA-CPR-2A-αsignalfactor-CYP9A12重组载体。4.权利要求1所述的CPR和CYP9A12双基因共表达重组载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)利用NCBI数据库，获得棉铃虫CPR和CYP9A12基因的CDS编码区序列，标记其起始密码子编码序列ATG和终止密码子编码序列TGA；2)选取包含CDS区的一段碱基序列，利用NCBIPrimer-BLAST设计引物，所设计的引物为：CPRF：ATGTCAGACAGCGCACAGGAC；CPRR：ACTCCATACATCTGCTGAATAT；CYP9F：ATGATACTAGTCCTGGTCTGGGT...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文举，陈程，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65