一种小型鱼类DNA无损伤提取方法及DNA提取液技术

本发明专利技术公开一种小型鱼类DNA无损伤提取方法及DNA提取液，该提取方法包括：1）用棉签从鱼体一侧的腮盖后缘向尾部刮取鱼体表粘液；2）将棉签浸没于DNA提取液中，涡旋、静置；3）将棉签拧干，加入异丙醇，混匀后‑80℃过夜处理或以液氮处理10min；4）样品自然解冻，离心，弃上清，加入乙醇，再次离心，取沉淀干燥，即提取获得基因组DNA；所述DNA提取液包括：20mL 1M Tris、5mL 0.5M EDTA、12.5mL 2M NaCl、57.5mL ddH2O、5mL质量分数为10%的SDS；本发明专利技术可应用于小型鱼类DNA的无损伤提取，操作简便，检测准确性高，对鱼类产生的应激反应低，宜于推广应用。

A Non-destructive DNA Extraction Method and DNA Extraction Solution for Small Fish

The invention discloses a non-destructive DNA extraction method and DNA extraction solution for small fish. The extraction method includes: 1) scraping fish surface mucus from the back edge of the gill cover on one side of the fish body to the tail with a cotton swab; 2) immersing the cotton swab in the DNA extraction solution, whirling and stationary; 3) screwing the cotton swab dry, adding isopropanol, evening at 80 C overnight or treating the sample with liquid nitrogen for 10 minutes; The DNA extract includes: 20mL 1M Tris, 5mL 0.5M EDTA, 12.5mL 2M NaCl, 57.5mL ddH 2, 5mL SDS with 10% mass fraction; the present invention can be applied to the non-damage extraction of DNA from small fish with simple operation, high detection accuracy and stress to fish. It has low reaction and is suitable for popularization and application.

【技术实现步骤摘要】
一种小型鱼类DNA无损伤提取方法及DNA提取液
本专利技术涉及一种基因组DNA提取方法，特别是一种小型鱼类DNA无损伤提取方法及DNA提取液。
技术介绍
随着环境污染的日趋严重，造成鱼类的生存空间和繁殖都遇到了巨大的问题，对鱼类种植资源的遗传选育已提上日程。对鱼类进行人工遗传选育是保持鱼类种质资源的重要手段和途径，分子遗传育种通常要涉及到到鱼类的非致命性取样，目前通常采用麻醉剪尾鳍的方法。这种方法对鱼类虽然不损害鱼的生命，但是对鱼类还是会造成一定的伤害，不利于鱼类的生存。鳑鲏是杂食性鱼类，栖息在缓慢流动或静止的水域，依靠淡水河蚌（无齿蚌属：Anodonta）繁殖，活动范围小，寿命短。广泛分布于东亚、东南亚和欧洲。鳑鲏类鱼有着极高的观赏价值和药用价值，因此被许多鱼类饲养爱好者和医药学家的青睐。但随着环境栖息地的破坏，对其种质资源的保护已提上日程。文献“一种鱼类DNA的非损伤检测方法”（宋君等，四川动物，2013）公开了一种利用鲫鱼体表粘液提取基因组DNA的方法，但该方法仅适用于体表粘液丰富的大型鱼类，其采用任何工具都可以提取到体表粘液；中国专利申请201310122540.2公开了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小型鱼类DNA无损伤提取方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）取棉签沿鱼体的侧面刮取粘液；（2）将步骤（1）获得的棉签浸没于装有DNA提取液的离心管中，涡旋10‑15s, 室温静置15min;（3）将棉签在管壁上拧干，加入‑20℃预冷后的异丙醇，手动混匀3‑5次，然后将该样品置于‑80℃温度下中过夜或以液氮处理10min；（4）取出样品自然解冻，13000g/min离心10min；弃上清，加入质量分数为70%的乙醇，13000g/min离心2min；取沉淀自然干燥，即获得小型鱼类体表粘液基因组DNA；所述DNA提取液包括：20mL 1M Tris、5mL 0.5M EDTA、12.5m...

【技术特征摘要】
2018.03.23 CN 20181024486271.一种小型鱼类DNA无损伤提取方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）取棉签沿鱼体的侧面刮取粘液；（2）将步骤（1）获得的棉签浸没于装有DNA提取液的离心管中，涡旋10-15s,室温静置15min;（3）将棉签在管壁上拧干，加入-20℃预冷后的异丙醇，手动混匀3-5次，然后将该样品置于-80℃温度下中过夜或以液氮处理10min；（4）取出样品自然解冻，13000g/min离心10min；弃上清，加入质量分数为70%的乙醇，13000g/min离心2min；取沉淀自然干燥，即获得小型鱼类体表粘液基因组DNA；所述DNA提取液包括：20...

【专利技术属性】
技术研发人员：封琦，唐晟凯，韩晓磊，顾伟，于正兴，陈建宁，王建国，王权，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32