The invention discloses a method for inducing the resistance of Vibrio parahaemolyticus to levofloxacin, including screening of sensitive strains, preliminary induction and continuous induction of sublethal antibiotic concentration, and preservation steps of resistant strains. The induced Vibrio parahaemolyticus has obtained the resistance of levofloxacin by experience, and its MIC values meet the resistance standard of CLSI, i.e. parahaemolytic arc. The MIC value of the bacteria is more than 8 mg/L, and the resistance can be inherited stably. The induction method of the present invention can quickly obtain the resistant strains with stable genetic characteristics, which provides a reliable tool for the study of the resistance mechanism of Vibrio parahaemolyticus to levofloxacin, and has good reference value and practical significance.
【技术实现步骤摘要】
一种诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法。
技术介绍
副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus，Vp)是一种常见的革兰氏阴性嗜盐菌，广泛分布于近海岸的海水、海底沉积物和海产品中，食用被该致病菌污染的海产品极易导致严重的急性肠胃炎和原发性败血症，并伴随有腹部绞痛、恶心、呕吐、头疼、低烧、寒战等临床症状，被视为全球范围内腹泻类疾病暴发的主要原因之一。根据我国食源性疾病监测网的数据显示，副溶血性弧菌污染是微生物引起的食源性疾病爆发事件中的重要因素，是一种非常重要的食源性致病菌，对水产品安全和公众健康造成了极大的威胁。抗生素作为一种良好的药剂，可以有效地治愈常见的食源性疾病。但随着抗生素的过度和不规范使用，导致细菌的耐药性不断增强。细菌耐药性的出现和蔓延给人和动物疾病的治疗带来了极大困难，引起了世界范围内的广泛关注。副溶血性弧菌作为常见的人畜共患病原菌，已频繁出现耐药和多重耐药现象，且具有耐药率高、耐药谱广的特点。而喹诺酮作为一类被广泛使用的广谱抗菌药物，对副溶血性...
【技术保护点】
1.一种诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备种子液：将副溶血性弧菌菌株从保存于‑80℃的甘油管中取出，划线接种于TCBS平板上，恒温培养活化；S2、敏感菌株筛选；S3、亚致死抗生素浓度下初步诱导；S4、亚致死抗生素浓度下连续诱导；S5、保藏耐药性副溶血性弧菌菌株；其中，步骤S1中，所述种子液的浓度为1×108～9×109CFU/mL；步骤S2中，所述筛选的敏感菌株为在1/2的MIC值中可以生长的左氧氟沙星敏感型副溶血性弧菌菌株，其中，所述MIC值为最低抑菌浓度；步骤S4中，所述亚致死抗生素浓度下连续诱导后的副溶血性弧菌MIC值≥8...
【技术特征摘要】
1.一种诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、制备种子液：将副溶血性弧菌菌株从保存于-80℃的甘油管中取出，划线接种于TCBS平板上，恒温培养活化；S2、敏感菌株筛选；S3、亚致死抗生素浓度下初步诱导；S4、亚致死抗生素浓度下连续诱导；S5、保藏耐药性副溶血性弧菌菌株；其中，步骤S1中，所述种子液的浓度为1×108～9×109CFU/mL；步骤S2中，所述筛选的敏感菌株为在1/2的MIC值中可以生长的左氧氟沙星敏感型副溶血性弧菌菌株，其中，所述MIC值为最低抑菌浓度；步骤S4中，所述亚致死抗生素浓度下连续诱导后的副溶血性弧菌MIC值≥8mg/L；步骤S5中，所述保藏的耐药性副溶血性弧菌菌株为经步骤S4中亚致死抗生素浓度下连续诱导后培养至9LogCFU/mL的突变菌株。2.一种如权利要求1所述诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法，其特征在于，步骤S2中，所述敏感菌株的筛选方法为：取步骤S1中所述种子液，调节OD600使其接种量为1.5×108CFU/mL，然后利用质量浓度为0.85％的NaCl将其调整为6LogCFU/mL，并接种于含有不同浓度的左氧氟沙星抗生素96孔板中，每孔100ul所述种子液，置于37℃恒温培养箱中培养16h后，用酶标仪测得上述每孔的OD值后确定最低抑菌浓度MIC，筛选1/2所述MIC值中可以生长的左氧氟沙星敏感型副溶血性弧菌菌株。3.一种如权利要求1所述诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法，其特征在于，步骤S3中初步诱导的方法为：吸取步骤S2中筛选的左氧氟沙星敏感型副溶血性弧菌菌液于10mL离心管中，用质量浓度为0.85％的NaCl将所述菌液浓度调至6LogCFU/mL，并接种于含有不同浓度的左氧氟沙星抗生素96孔板中，置于37℃恒温培养箱中培养16h。4.一种如权利要求1所述诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法，其特征在于，步骤S4中连续诱导的方法为：将步骤S3中初步诱导后的左氧氟沙星敏感型副溶血性弧菌菌株持续存在于所述亚致死抗生素浓度条件下继续生长12～30天，直至所述副溶血性弧菌的MIC值≥8mg/L。5.一种如权利要求2或3所述诱导副溶血性弧菌产生左氧氟沙星耐药性的方法，其特征在于，所述含有不同浓度的左氧氟沙星抗生素96孔板的制备过程如下：取1mL左氧氟沙星母...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵勇，李欢，王思琦，张昭寰，刘海泉，潘迎捷，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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