甲基营养型芽孢杆菌BMF 04与发酵方法及用途技术

本发明专利技术是一种甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BMF 04，其保藏号为CCTCC NO：2017375。本发明专利技术还公开了甲基营养型芽孢杆菌BMF 04对植物病原真菌的抑制用途、菌株的无菌发酵液对植物病原真菌的抑制用途、菌株的无菌发酵液为有效成份制成抑细菌药物的用途、对黄瓜幼苗促生长用途；同时公开了甲基营养型芽孢杆菌BMF 04的无菌发酵液的制备方法和产抑菌物质发酵培养方法；还公开了甲基营养型芽孢杆菌BMF 04产芽孢固态发酵培养方法。本发明专利技术针对农作物中常见的病原菌，筛选出新的具有广谱抗性的的海洋细菌菌株，并采用菌株形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析确定了优良抗性菌株的种属关系。同时还研究了其抗菌用途，为菌株的应用提供了方向。

Methyl Nutritional Bacillus BMF 04 and Fermentation Method and Application

The invention relates to a Methyltrophic Bacillus BMF 04, whose storage number is CCTCC NO: 2017375. The invention also discloses the inhibiting use of methyl-trophic Bacillus BMF 04 to plant pathogenic fungi, the inhibiting use of the sterile fermentation broth of the strain to plant pathogenic fungi, the use of the sterile fermentation broth of the strain as an effective ingredient to make bacteriostatic drugs and the use of promoting the growth of cucumber seedlings, and the preparation method of the sterile fermentation broth of methyl-trophic Bacillus BMF 04 and the The fermentation method for producing bacteriostatic substances and the solid-state fermentation method for producing spores by methyl-trophic Bacillus BMF 04 are also disclosed. The invention screens new marine bacterial strains with broad-spectrum resistance against common pathogenic bacteria in crops, and determines the species relationship of excellent resistant strains by morphological observation, physiological and biochemical tests and 16S rDNA sequence analysis. At the same time, its antimicrobial use was also studied, which provided a direction for the application of strains.

【技术实现步骤摘要】
甲基营养型芽孢杆菌BMF04与发酵方法及用途
本专利技术涉及一种海洋细菌，特别是一种甲基营养型芽孢杆菌BMF04，本专利技术还涉及其用途与发酵方法。
技术介绍
生物防治具有不污染环境、对人和其他生物安全、防治作用持久、产品无残留等优点，能够弥补化学农药带来的不足，筛选更多的抑菌作用强、促进作物生长的优良菌株显得尤为重要。现有用于开发微生物农药的微生物菌株主要来源于陆源环境，源自海洋的微生物菌株的开发研究起步较晚，海洋细菌生长繁殖快、代谢产物丰富，是筛选抗性菌株的重要种质资源。不同学者从海洋中分离得到多个具有强抗菌作用的海洋细菌优良菌株。朱晓飞等筛选出菌株YB-3，其对水稻纹枯病菌具有强烈抗菌作用，通过形态学观察、生理生化试验、Biolog鉴定技术及16SrDNA序列分析鉴定其为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)；蒋学兵等利用8种增菌液，11种培养基，自中国4大海域水样中分离到72株细菌与411株真菌，分别为革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性球菌、真菌和弧菌，其中弧菌为其优势菌。利用VITEK全自动微生物鉴定仪、API微生物鉴定系统和BIOMIC检测仪和微量生化反应管对弧菌进行鉴定，结果表明弧菌主要为霍利斯弧菌、溶藻弧菌、麦氏弧菌、河流弧菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌等；骆祝华等从不同海域中分离到480株海洋细菌，包括107株粪大肠杆菌和150株芽孢细菌，其中117株海洋细菌具有抑菌活性，且来自不同区域不同样品的菌株，其抑菌活性有很大差别，红树林区域的生物样品的抗菌率很高，其有望成为筛选优良抑菌菌株的来源地；Yoo等分离了一株海洋细菌菌株PT-1，经16SrRNA序列测定、进化树分析和脂肪酸分析表明菌株PT-1为海洋单胞菌属(Marinomonasarctica)的新菌种，可产生蛋白酶。目前关于海洋细菌的研究主要处于实验室筛选阶段，对于菌株的发酵及其应用较少。因此，从海洋细菌中筛选新的抗性菌株并加以利用具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对目前应用化学农药防治植物病害所出现的农药残留、环境污染、有害生物产生抗药性等问题，生物农药能够弥补化学农药的不足，但市场上生物农药种类少不能满足生产需要等现有技术的不足，提供一种有较强抗菌作用具有生物农药和肥料开发应用前景的新的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)BMF04。本专利技术所要解决的另一技术问题是针对生产过程中需节约成本、提高发酵效率的现状提供了前述甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)BMF04的低成本、高效的发酵方法。本专利技术所要解决的再一技术问题是提供了前述甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)BMF04的用途。本专利技术是一种甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)BMF04，其特点是：其保藏号为CCTCCNO：2017375。本专利技术涉及的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)BMF04菌株(以下简称BMF04菌株或者BMF04)已由申请人于2017年6月26日保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号为CCTCCNO：M2017375。保藏单位地址为：中国武汉市武汉大学，邮编430072，电话027－68754052。本专利技术所述的甲基营养型芽孢杆菌BMF04具备以下的用途：所述的用途为BMF04菌株对植物病原真菌的抑制用途，所述的植物病原真菌选自：所述的植物病原真菌选自：苹果腐烂病菌(Valsamali)、葡萄白腐病菌(Conielladiplodiella)、芒果炭疽病菌(Colletotrichumgloesporioides)、小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、棉花立枯病菌(Rhizoctoniasolani)、黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、菠菜早疫病菌(Alternariasolani)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)、稻瘟病病菌(Magnaporthegrisea)、小麦根腐病菌(Bipolarissorokiniana)、斑点落叶病菌(Alternariaalternate)、甘蓝枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、苹果炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、小麦雪腐镰刀菌(Fusariumnivale)、草莓灰霉病菌(Botrytiscinerea)、水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)、玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvularialunata)、蓝莓早疫病菌(Alternariasolani)、小麦纹枯病菌(Rhizoctoniacerealis)、大豆菌核病菌(Sclerotinasclerotiorum)、玉米叶枯病菌(AlternariatenuisNees)、玉米小斑病菌(Bipolarismaydis)。本专利技术所述的甲基营养型芽孢杆菌BMF04具备以下的用途：所述的用途为BMF04菌株的无菌发酵液对植物病原真菌的抑制用途，所述的植物病原真菌选自：苹果腐烂病菌(Valsamali)、葡萄白腐病菌(Conielladiplodiella)、黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、菠菜早疫病菌(Alternariasolani)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)、棉花立枯病菌(Rhizoctoniasolani)、小麦根腐病菌(Bipolarissorokiniana)、斑点落叶病菌(Alternariaalternate)、甘蓝枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、芒果炭疽病菌(Colletotrichumgloesporioides)、苹果炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、小麦雪腐镰刀菌(Fusariumnivale)、小麦纹枯病菌(Rhizoctoniacerealis)、大豆菌核病菌(Sclerotinasclerotiorum)、水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)、玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvularialunata)、蓝莓早疫病菌(Alternariasolani)、玉米叶枯病菌(AlternariatenuisNees)、玉米小斑病菌(Bipolarismaydis)。本专利技术所述的甲基营养型芽孢杆菌BMF04具备以下的用途：所述的用途为以BMF04菌株的无菌发酵液为有效成份制成抑细菌药物的用途，所述的细菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)。本专利技术还公开了所述的甲基营养型芽孢杆菌BMF04的无菌发酵液的制备方法，其特点是：将种子液按6％的接种量接种至盛有60mL发酵培养基的250mL三角瓶中，28℃、180r/min振荡培养48h，即为菌株发酵液；将发酵液在4℃、9000r/min条件下离心20min，收集上清液，经直径为0.22μm的滤膜过滤，即得无菌发酵液。本专利技术还公开了所述的甲基营养型芽孢杆菌BMF04产抑菌物质发酵培养方法，其特点是：发酵培养基配方为：蔗糖2.5％、蛋白胨2.5％、NaC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BMF 04，其特征在于：其保藏号为CCTCC NO：2017375。

【技术特征摘要】
1.一种甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)BMF04，其特征在于：其保藏号为CCTCCNO：2017375。2.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌BMF04的用途，其特征在于：所述的用途为BMF04菌株对植物病原真菌的抑制用途，所述的植物病原真菌选自：苹果腐烂病菌(Valsamali)、葡萄白腐病菌(Conielladiplodiella)、芒果炭疽病菌(Colletotrichumgloesporioides)、小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)、棉花立枯病菌(Rhizoctoniasolani)、黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、菠菜早疫病菌(Alternariasolani)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)、稻瘟病病菌(Magnaporthegrisea)、小麦根腐病菌(Bipolarissorokiniana)、斑点落叶病菌(Alternariaalternate)、甘蓝枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、苹果炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、小麦雪腐镰刀菌(Fusariumnivale)、草莓灰霉病菌(Botrytiscinerea)、水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)、玉米弯孢霉叶斑病菌(Curvularialunata)、蓝莓早疫病菌(Alternariasolani)、小麦纹枯病菌(Rhizoctoniacerealis)、大豆菌核病菌(Sclerotinasclerotiorum)、玉米叶枯病菌(AlternariatenuisNees)、玉米小斑病菌(Bipolarismaydis)。3.权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌BMF04的用途，其特征在于：所述的用途为BMF04菌株的无菌发酵液对植物病原真菌的抑制用途，所述的植物病原真菌选自：苹果腐烂病菌(Valsamali)、葡萄白腐病菌(Conielladiplodiella)、黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、菠菜早疫病菌(Alternariasolani)、番茄早疫病菌(Alternariasolani)、棉花立枯病菌(Rhizoctoniasolani)...

【专利技术属性】
技术研发人员：马桂珍，陈新元，吴海霞，万丹丹，李欢，曹雪梅，暴增海，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32