口腔护理组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生活用品领域，提供一种口腔护理组合物及其应用。一种口腔护理组合物，包含蛋白酶变体，所述蛋白酶变体为亲本蛋白酶的变体，所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的氨基酸位置。本发明专利技术还提供一种口腔护理组合物的应用。

【技术实现步骤摘要】
口腔护理组合物及其应用
本专利技术涉及生活用品领域，尤其涉及一种口腔护理组合物及其应用。
技术介绍
在人的口腔内，对牙齿不利的蛋白物质大量存在。大量蛋白物质存在于人口腔内的食物残渣内，各种功能性蛋白质支持口腔菌群的生存和生长，唾液蛋白形成牙齿表的获得性膜，这层膜的褐化是导致牙齿变黄的重要原因。由于蛋白酶是一种能够水解蛋白质的生物酶，因此在口腔护理产品中应用蛋白酶来去除食物残渣、抑制口腔菌群和美白牙齿的方法已经有所应用。遗憾的是，由于蛋白酶本身也是一种蛋白质，在牙膏、漱口水和口腔喷剂等含水较多的口腔护理产品中，蛋白酶因为倾向于自我降解而表现出无法在有效使用期间稳定存在。同时，天然蛋白酶受温度和pH值等条件影响较大，尽管当前添加蛋白酶的口腔护理组合物已经针对性地做出相应优化，但是仍然难以达到预期效果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种口腔护理组合物及其应用。为解决上述技术问题，专利技术采用如下所述的技术方案。一种口腔护理组合物，包含蛋白酶变体，所述蛋白酶变体为亲本蛋白酶的变体，所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQIDNO:1的多肽的氨基酸位置。优选地，所述蛋白酶变体还包含置换L124M。优选地，所述蛋白酶变体还包含选自以下的一种或多种改变：Q12K、S101R、A151G、N184G、A194P、N218S、N155*、A161R。优选地，所述蛋白酶变体至少包括3个位点的置换。优选地，所述亲本蛋白酶与SEQIDNO：2具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。优选地，所述蛋白酶变体与SEQIDNO:3具有至少96.6％的序列同一性的氨基酸序列。优选地，所述蛋白酶变体具有由SEQIDNO:3表示的氨基酸序列。优选地，所述口腔护理组合物还包含过氧化氢酶、脂肪酶、蛋白酶、漆酶、右旋糖酐酶、溶菌酶中的一种或几种。一种口腔护理组合物的应用，将上述的口腔护理组合物用于牙膏或液体口腔护理组合物。本专利技术的有益效果在于：本专利技术所提供的口腔护理组合物中含有的蛋白酶变体与亲本枯草杆菌酶相比具有改良的稳定性或美白牙齿的性能，因此更适用于牙膏和液体口腔护理组合物。。附图说明图1为枯草杆菌蛋白酶BPN’(SEQID：1)与枯草杆菌蛋白酶309(SEQID：2)及枯草杆菌酶变体(SEQID：3)的氨基酸序列的比对。具体实施方式为使本领域的普通技术人员更加清楚地理解专利技术的目的、技术方案和优点，以下结合附图和实施例对专利技术做进一步的阐述。定义液体口腔护理组合物为该组合物在环境温度(例如25℃)下为液体。术语“改善的性质”指与本文所定义的蛋白酶变体相关的与亲本蛋白酶相比改善的特征。这样的改善的性质包括但不限于改善的牙齿美白性能、蛋白酶活性、改善的热稳定性、改善的pH活性特征、提高的pH稳定性、提高的稳定性、贮存条件下改善的稳定性和化学稳定性。“改善的稳定性”或“提高的稳定性”在本文中定义为当在相同的条件下测试时，相对于包含亲本蛋白酶的组合物的稳定性，包含变体蛋白酶的口腔护理组合物老化后蛋白酶活性的相对提高。蛋白酶稳定性通过比较在包含感兴趣的蛋白酶的液体口腔护理组合物中于特定的温度下温育特定的时间段后测得的残余蛋白酶活性来确定。可使用如在实施例5所描述的测定来对蛋白酶稳定性进行测量。术语“牙齿美白性能”用作口腔护理组合物使在例如刷牙和漱口时去除牙齿有色物质的能力。牙齿美白性能可如实施例4中所示方法进行测量。术语“改进的牙齿美白性能”在此被定义为根据本专利技术的蛋白酶变体相对于亲本蛋白酶的牙齿美白性能，若果在两种或更多种感兴趣的口腔护理组合物之间没有显著或有意义的差异，则牙齿美白性能在本文中以“同等”表示。术语“残留活性”或“残余活性”在此文中意指存储后，特别是在牙膏或液体口腔护理组合物中存储后留下的或剩余的蛋白酶活性。在将蛋白酶添加至口腔护理组合物中之后，当测量残留活性时，在t1测量该蛋白酶的活性。然后在存储一定量的时间之后，典型的数分钟或数周后，在t2测量残留活性。术语“蛋白酶”在本文中理解为具有蛋白酶活性的酶。术语“蛋白酶活性”意指能够通过蛋白酶降解蛋白为氨基酸，其为通过水解在多肽链中将氨基酸连接在一起形成蛋白的肽键而进行的蛋白分解代谢。术语“野生型蛋白酶”意指由天然存在的野生型生物体如自然界中存在的细菌、古生菌、酵母、真菌、植物或动物表达的蛋白酶。野生型蛋白酶的实例为枯草杆菌蛋白酶309，即SEQIDNO：2的氨基酸1至269。术语“亲本”或“亲本蛋白酶”意指对其加以改变以产生本文定义的变体的蛋白酶，即用来描述对其进行突变来获得本文定义的蛋白酶变体的起始蛋白酶。术语“成熟多肽”在本文中定义为具有蛋白酶变体活性的多肽，其为经翻译和任何翻译后修饰，如N-端加工、C-端截短、糖基化、磷酸化、自身催化活化等之后形成的最终形式多肽。“蛋白酶变体”在本文中理解为与其亲本相比在一个或多个(几个)特定位置包含改变或修饰，如取代、插入和/或缺失一个或多个(几个)氨基酸残基的多肽。蛋白酶变体可通过在适于包含编码所述蛋白酶变体的基因的微生物表达所述基因的条件下培养所述微生物而获得。编码蛋白酶变体的基因可经过人为干预通过修饰编码野生型蛋白酶的基因序列而获得。置换：对于氨基酸置换，使用如下命名法：原始氨基酸、位置、置换的氨基酸。相应地，在12位用赖氨酸取代谷氨酰胺命名为“Q123K”或“Asn123Lys”。多重突变可用加号(“+”)分开，例如，“Q123K+L234M”或“Asn123Lys+Leu234Met”，分别代表在123位及234位用赖氨酸(K)取代谷氨酰胺(Q)，及用甲硫氨酸(M)取代亮氨酸(L)。缺失：对于氨基酸缺失，使用一下命名法：原始氨基酸、位置、*。因此，位置155处天冬酰胺的缺失命名为“Asn155*”或“N155*”。多个缺失可如上述对于取代那样用(“+”)分开。插入：对于氨基酸插入，使用了如下命名法：初始氨基酸、位置、初始氨基酸、新插入的氨基酸。例如，在195位甘氨酸之后插入赖氨酸命名为“G195GK”。当插入多于一个氨基酸残基时，例如在G195之后插入Lys和Ala时，表示为：Gly195GlyLysAla或G195GKA。在其中置换和插入发生在同一位置处的情况下，可表示为S99SD+S99A或简写为S99AD。不同改变：当可在某个位置处引入不同的改变时，所述不同的改变由逗号分开，例如，“Asn184Asp,Gly,Ser”表示位置184处的天冬酰胺被天冬氨酸或甘氨酸或丝氨酸置换。或者，不同的改变或任选的置换可在括号中指示，例如，Asn184[Asp,Gly,Ser]或Asn184{Asp,Gly,Ser}或者简写为N184[D,G,S]或N184{D,G,S}。两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列一致性”描述。出于本专利技术的目的，使用尼德尔曼-翁施算法(尼德尔曼(Needleman)和翁施(Wunsch)，1970，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)48:443-453)确定两个氨基酸序列之间的序列一致性，如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS：TheEuro本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种口腔护理组合物，其特征在于：包含蛋白酶变体，所述蛋白酶变体为亲本蛋白酶的变体，所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的多肽的氨基酸位置。

【技术特征摘要】
1.一种口腔护理组合物，其特征在于：包含蛋白酶变体，所述蛋白酶变体为亲本蛋白酶的变体，所述亲本蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶，所述蛋白酶变体至少包含以下氨基酸置换：G97D+A98R+S99N，其中所述位置对应于SEQIDNO:1的多肽的氨基酸位置。2.如权利要求1所述的口腔护理组合物，其特征在于：所述蛋白酶变体还包含置换L124M。3.如权利要求1所述的口腔护理组合物，其特征在于：所述蛋白酶变体还包含选自以下的一种或多种改变：Q12K、S101R、A151G、N184G、A194P、N218S、N155*、A161R。4.如权利要求3所述的口腔护理组合物，其特征在于：所述蛋白酶变体至少包括3个位点的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊，安群，冯甲，周雨叶，孙飞野，
申请(专利权)人：广州立白企业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44