液态培养基组合物的制造方法及用于该制造方法的制造装置制造方法及图纸

该制造方法是将含有特定化合物的第1液体A1和含有连接物质的第2液体B1混合从而制造液态培养基组合物的方法，所述制造方法使用该制造装置来实施。该制造装置具有在壁部设置有至少2个开口部2、3的容器1，前述的2个开口部通过容器外的管道4被相互连接，该管道具备具有可作为泵管被安装于蠕动泵5的形状和柔软性的部分。该制造方法中，使蠕动泵运转，使第1液体和第2液体循环而进行混合，在容器内形成目标液态培养基组合物。

Manufacturing method of liquid medium composition and manufacturing device for the manufacturing method

The manufacturing method is a method of mixing the first liquid A1 containing a specific compound with the second liquid B1 containing a connecting substance to produce a liquid medium composition, which is implemented using the manufacturing device. The manufacturing device has a container 1 with at least two openings 2 and 3 on the wall. The two openings mentioned above are connected with each other through a pipeline 4 outside the container. The pipeline has a shape and a flexible part which can be installed as a pump tube in the peristaltic pump 5. In the manufacturing method, the peristaltic pump is operated, the first liquid and the second liquid are circulated and mixed, and the target liquid culture medium composition is formed in the container.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】液态培养基组合物的制造方法及用于该制造方法的制造装置
本专利技术涉及液态培养基组合物的制造方法、及用于实施该制造方法的制造装置。更详细而言，本专利技术涉及下述制造方法及优选用于实施该制造方法的制造装置，所述制造方法中，将为了形成前述培养基组合物而应当混合的至少2种液体(含有特定的化合物的第1液体、及含有将该特定的化合物彼此结合而形成结构体的物质的第2液体)适当地混合，从而制造分散有前述结构体的培养基组合物。
技术介绍
近年来，用于使在动物、植物体内发挥不同作用的各种器官、组织及细胞在生物体外增殖或维持的技术不断进展。使这些器官、组织在生物体外增殖或维持分别被称为器官培养、组织培养，使从器官、组织分离的细胞在生物体外增殖、分化或维持被称为细胞培养。细胞培养是使分离的细胞在培养基中而在生物体外进行增殖、分化或维持的技术，其已成为对生物体内的各种器官、组织、细胞的功能及结构进行详细分析所不可缺少的技术。另外，利用该技术培养的细胞及/或组织已在化学物质、医药品等的药效及毒性评价、酶、细胞生长因子、抗体等有用物质的大量生产、再生医疗(其修补由于疾病、缺损而丧失的器官、组织、细胞)、植物的品种改良、基因重组作物的制成等各种领域中得到利用。作为用于培养细胞等(器官、组织、细胞)的培养基之一，可举出液体培养基，本申请的专利技术人已成功开发了能以悬浮状态培养细胞等的液态培养基组合物(专利文献1及2)。对于专利文献1中记载的液态培养基组合物而言，特定的化合物(尤其是具有阴离子性官能团的高分子化合物)介由2价金属阳离子等发生聚集而形成不定形的结构体，该结构体分散于液体培养基中而成为悬浮的状态。下文中，将具有阴离子性官能团的高分子化合物等之类的上述特定的化合物亦称为“特定化合物”，将使该特定化合物彼此结合的2价金属阳离子等物质亦称为“连接物质”。该培养基组合物成为能够在不伴有存在引起细胞等的受损、功能丧失的风险的操作(振荡、旋转等)的情况下以悬浮状态培养细胞等的理想液态培养基。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2014/017513号专利文献2：美国专利申请公开第2014/0106348A1号说明书
技术实现思路
专利技术所要解决的课题上述专利文献1中记载的液态培养基组合物的原本期待的理想状态为下述状态：通过特定化合物彼此介由2价金属阳离子等连接物质连接而形成的结构体均匀分散于液体培养基中。然而，本申请的专利技术人对该液态培养基组合物的实际的制作工序进行了详细研究，结果发现，为了得到这样的理想状态，必须注意混合方法、混合条件，以使得结构体不会在培养基组合物中的局部集中地形成。例如，特定化合物为脱酰基结冷胶的情况下，在该脱酰基结冷胶与液体培养基混合时，介由液体培养基中的连接物质(例如，钙离子)而形成不定形的结构体，其成为用于使细胞等悬浮的载体。然而，在一边对包含连接物质的液体培养基进行搅拌、一边向其中注入包含特定化合物的液体这样的混合方法中，两种液体与外界气体接触，因此，有可能发生外界气体中的细菌混入至培养基中这样的问题。另外发现，在将包含连接物质的液体培养基收容至容器内、向其中注入包含高浓度的特定化合物的液体这样的混合方法中，在两种液体合流的瞬间，特定化合物与连接物质接触而形成结构体，因此，该结构体在混合液中较长地连接成带状而成为悬浮的状态(或带状的结构体缠结成团块状的状态)，有时无法成为原本期待的均匀的分散状态。另外还发现，即使以较高速度进行搅拌，也会产生这样的状态。并且还发现，一旦在液体培养基中形成这样的带状的结构体，从分子链所形成的双螺旋彼此介由连接物质(例如，钙离子)形成牢固的三维网络这样的该结构体的性质考虑，不容易将其细碎地切断而分散于母材中。因此，为了得到目标结构体良好分散的混合液，需要能高速地使两种液体接触的那样的特殊搅拌装置，但也已知在很多情况下，这样的特殊搅拌装置的搅拌作用通常仅限于对3L(L表示升)以下程度的少量的液体有效，而不适于大量(例如，20L以上等)制造上述的结构体良好分散的混合液。本专利技术的目的在于解决上述的问题，提供一种制造方法及优选用于实施该制造方法的制造装置，所述制造方法能将包含2价金属阳离子等连接物质的任意液体、和包含特定化合物的液体无菌地混合，能大量地得到分散有微细的结构体的液态培养基组合物。用于解决课题的手段能达成前述目的的本专利技术的主要构成如下所述。〔1〕液态培养基组合物的制造方法，所述方法中，将含有下述特定化合物(i)的第1液体、和含有下述连接物质(ii)的第2液体混合，从而制造液态培养基组合物，其特征在于，使用在壁部设置有至少2个开口部的容器，其中，前述至少2个开口部通过容器外的管道(tube)被相互连接，该管道具备具有可作为泵管(pumpingtube)被安装于蠕动泵的形状和柔软性的部分，将前述管道安装于前述蠕动泵，使该蠕动泵运转，使前述第1液体和第2液体在前述管道与前述容器之间循环而进行混合，从而在容器内形成分散有前述特定化合物介由前述连接物质结合而成的结构体的液态培养基组合物，特定化合物(i)，其是具有阴离子性的官能团的高分子化合物，其能够通过介由2价金属阳离子结合从而形成能使细胞或组织悬浮的结构体。连接物质(ii)，其是2价金属阳离子。〔2〕如前述〔1〕所述的液态培养基组合物的制造方法，其中，前述特定化合物(i)为脱酰基结冷胶，第1液体为含有该脱酰基结冷胶的水溶液，前述连接物质(ii)为钙离子及镁离子中的一方或两方，第2液体为含有钙离子及镁离子中的一方或两方的液体培养基的浓缩液。〔3〕如前述〔2〕所述的培养基组合物的制造方法，其中，前述液态培养基组合物中的脱酰基结冷胶的浓度为0.001％(w/v)～1.0％(w/v)。〔4〕如前述〔1〕～〔3〕中任一项所述的液态培养基组合物的制造方法，其中，第1液体与第2液体的体积混合比率为：相对于第1液体的体积100而言，第2液体的体积为50～200。〔5〕如前述〔1〕～〔4〕中任一项所述的制造方法，其中，前述开口部中的一个开口部被设置于构成前述容器的底面的壁部或构成侧面的壁部的底部作为出口，前述开口部中的另一个开口部被设置于构成前述容器的上面的壁部或构成侧面的壁部的上部作为入口，使前述蠕动泵运转，针对第1液体和第2液体而使这些液体在管道内沿从前述出口向前述入口的方向移动，由此，使容器内的第1液体和第2液体沿从上方向下方的方向移动。〔6〕如前述〔1〕～〔5〕中任一项所述的制造方法，其中，前述2个开口部作为出口和入口而成为1对，在前述容器上设置有多对前述2个开口部，各对中的2个开口部分别通过管道连接，前述第2工序中，将各管道安装于分别独立的蠕动泵，使该蠕动泵运转，使前述第1液体和第2液体从各管道通过而进行循环。〔7〕如前述〔1〕～〔6〕中任一项所述的制造方法，其中，前述容器由柔软的材料形成、以使得该容器的容积能根据被收容在该容器内部的液体的体积而改变，由此，能在确保该容器内的密闭性的同时，向该容器内注入液体并且向该容器外排出液体。〔8〕如前述〔1〕～〔7〕中任一项所述的液态培养基组合物的制造方法，其中，在前述容器上设置有用于进行液体向该容器内的进入和从该容器内的排出的出入口用的开口部，预先将第1液体及第2液体中的任一种液体装入前述容器中，一边本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.液态培养基组合物的制造方法，所述方法中，将含有下述特定化合物(i)的第1液体、和含有下述连接物质(ii)的第2液体混合，从而制造液态培养基组合物，其特征在于，使用在壁部设置有至少2个开口部的容器，其中，所述至少2个开口部通过容器外的管道被相互连接，所述管道具备具有可作为泵管被安装于蠕动泵的形状和柔软性的部分，将所述管道安装于所述蠕动泵，使所述蠕动泵运转，使所述第1液体和第2液体在所述管道与所述容器之间循环而进行混合，从而在容器内形成分散有所述特定化合物介由所述连接物质结合而成的结构体的液态培养基组合物，特定化合物(i)，其是具有阴离子性的官能团的高分子化合物，其能够通过介由2价金属阳离子结合从而形成能使细胞或组织悬浮的结构体，连接物质(ii)，其是2价金属阳离子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.07.22 JP 2016-1449291.液态培养基组合物的制造方法，所述方法中，将含有下述特定化合物(i)的第1液体、和含有下述连接物质(ii)的第2液体混合，从而制造液态培养基组合物，其特征在于，使用在壁部设置有至少2个开口部的容器，其中，所述至少2个开口部通过容器外的管道被相互连接，所述管道具备具有可作为泵管被安装于蠕动泵的形状和柔软性的部分，将所述管道安装于所述蠕动泵，使所述蠕动泵运转，使所述第1液体和第2液体在所述管道与所述容器之间循环而进行混合，从而在容器内形成分散有所述特定化合物介由所述连接物质结合而成的结构体的液态培养基组合物，特定化合物(i)，其是具有阴离子性的官能团的高分子化合物，其能够通过介由2价金属阳离子结合从而形成能使细胞或组织悬浮的结构体，连接物质(ii)，其是2价金属阳离子。2.如权利要求1所述的液态培养基组合物的制造方法，其中，所述特定化合物(i)为脱酰基结冷胶，第1液体为含有所述脱酰基结冷胶的水溶液，所述连接物质(ii)为钙离子及镁离子中的一方或两方，第2液体为含有钙离子及镁离子中的一方或两方的液体培养基的浓缩液。3.如权利要求2所述的培养基组合物的制造方法，其中，所述液态培养基组合物中的脱酰基结冷胶的浓度为0.001％(w/v)～1.0％(w/v)。4.如权利要求1～3中任一项所述的液态培养基组合物的制造方法，其中，第1液体与第2液体的体积混合比率为：相对于第1液体的体积100而言，第2液体的体积为50～200。5.如权利要求1～4中任一项所述的制造方法，其中，所述开口部中的一个开口部被设置于构成所述容器的底面的壁部或构成侧面的壁部的底部作为出口，所述开口部中的另一个开口部被设置于构成所述容器的上面的壁部或构成侧面的壁部的上部作为入口，使所述蠕动泵运转，针对第1液体和第2液体而使这些液体在管道内沿从所述出口向所述入口的方向移动，由此，使容器内的第1液体和第2液体沿从上方向下方的方向移动。6.如权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，所述2个开口部作为出口和入口而成为1对，在所述容器上设置有多对所述2个开口部，各对中的2个开口部分别通过管道连接，所述第2工序中，将各管道安装于分别独立的蠕动泵，使所述蠕动泵运转，使所述第1液体和第2液体从各管道通过而进行循环。7.如权利要求1～6中任一项所述的制造方法，其中，所述容器由柔...

【专利技术属性】
技术研发人员：竹内好男，金木达朗，猿桥康一郎，
申请(专利权)人：日产化学株式会社，孝仁生物株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP