动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液及制备方法技术

本发明专利技术属于生物组织、细胞的洗涤和培养相关的技术领域，公开了一种动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液及制备方法；在B级洁净区中放置一灭菌的1L玻璃瓶；称取羟乙基淀粉/130 40.0‑160.0g和氯化钠5.0‑14.0g至1L灭菌后玻璃瓶中，加入准确称取的泛影酸钠30.0‑52.0g，再加入其他成分，最后加入注射用水定容至1000mL；在B级背景下局部A级洁净区分别用0.45μm和0.22μm微孔滤膜过滤，500mL/瓶分装；用电子密度计测定密度为1.026‑1.032g/cm

Washing solution and preparation method of tissue and cell after digestion of animal and human pancreatic organs

The invention belongs to the technical field related to washing and culture of biological tissues and cells, and discloses a washing solution for tissues and cells after digestion of animal and human pancreatic organs and a preparation method thereof; a sterilized 1L glass bottle is placed in a B-grade clean area; hydroxyethyl starch/130 40.0 160.0 g and sodium chloride 5.0 14.0 g to 1L are weighed in the glass bottle after sterilization, and the accurately weighed sodium pantothenate 30 is added. 0 52.0g, add other ingredients, and finally add water for injection to 1000 mL. Under the background of B grade, local A grade clean area is filtered by 0.45 um and 0.22 um microporous membrane, separately packed in 500 mL/bottle. Density is 1.026 1.032g/cm determined by electronic densitometer.

【技术实现步骤摘要】
动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液及制备方法
本专利技术属于生物组织、细胞洗涤相关的
，尤其涉及一种动物和人胰腺消化后的组织、细胞洗涤溶液及制备方法。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：组织和细胞治疗将引领未来的医学革命，包括肿瘤细胞的免疫治疗、干细胞治疗、原代组织和细胞的移植治疗等。组织、细胞治疗是指将正常的或生物工程改造过的来源于自体或其他动物体的组织或细胞移植或输入患者体内，新输入的组织或细胞可以替代原受损的组织或细胞、或者具有更强的免疫杀伤功能，从而达到治疗疾病的目的。组织、细胞移植在治疗癌症、血液病、心血管病、糖尿病、老年痴呆症等方面显示出越来越高的应用价值。与大器官移植等治疗方式相比较，往往治疗效果无差异，但手术操作更简单，副作用更小。胰岛移植是指提取和分离供体胰腺中的胰岛细胞团，并将其培养或不培养后，移植至患者体内，可补充患者缺失的胰岛素分泌细胞，协助患者维持血糖平衡。该技术目前也已在国际上多个国家纳入了医保。而在中国，胰岛移植起步较早，但技术一直落后于国外，导致临床结果不好。自2000年加拿大埃德蒙顿方案公布以来，我国的胰岛移植工作也紧跟国际行业发展步伐，目前国内也已有几家医疗机构在进行胰岛移植的临床应用。胰岛移植包括胰岛分离和移植两个过程，其中分离的胰岛质量的好差、数量的多少，直接关系到后续移植的成败。胰岛分离的过程非常复杂，耗时较长。胰腺器官到达胰岛分离实验室后，分离胰岛的过程主要包括以下几方面：(1)胰腺器官的修剪。主要为去除胰腺表面多余的脂肪组织、被膜、结缔组织和血管等；(2)器官消化。主要为将消化酶(一般为胶原酶)通过胰管灌注至胰腺中，再剪碎后放至消化罐中，将胰腺组织中的胰岛细胞团与外分泌腺组织分离；(3)组织洗涤。将消化后的组织中的胶原酶去除，同时尽量减少对消化后组织的损伤，需在低温下用专门的洗涤液，将胰腺外分泌组织和游离的胰岛细胞团进行清洗；(4)胰岛纯化。采用COBE2991机进行连续或非连续密度梯度纯化，将组织中的胰岛细胞团进行富集和收集。纯化后的胰岛组织可直接移植，或者培养后移植。其中消化后组织的洗涤是胰岛分离过程中重要的一环，需要有一特殊的洗涤液，保证细胞尽量不水肿，并能维持组织和细胞的活性。综上所述，现有技术存在的问题是：目前市场还没有一种专门用于胰腺消化后组织、细胞专用的洗涤溶液，尤其是针对大动物猪、狗或人的胰腺组织消化后的胰腺组织的洗涤液。人用的胰腺组织消化后洗涤液一般由两种溶液组成，其中一种溶液为含羟乙基淀粉的生理盐水溶液，另一种溶液成分未明。两种溶液经一定的配比混合后，作为消化后胰腺组织的洗涤液，或者直接采用RPMI1640溶液、Hanks溶液或者HBSS溶液进行消化后组织的清洗。这些溶液的缺陷在于(1)临时配制，增加溶液被细菌污染的机会；(2)配制方法复杂，增加胰岛分离过程中时间的消耗；(3)两种溶液的保存条件不同，增加存放试剂的负担；(4)市场上现有的一些细胞洗涤试剂成分比较少，比如HBSS等，不利于缓解消化后组织、细胞的损伤。解决上述技术问题的难度和意义：为解决上述问题，本专利技术设计了一种动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液，主要用于实验用小鼠、大鼠、家兔、犬、猪、猴等动物和捐献人的胰腺器官在胰腺消化后和纯化提取胰岛细胞团前，洗涤这些消化后组织。所述动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液由泛影酸钠30.0-52.0g、L-精氨酸250mg、L-门冬酰胺62.5mg、L-门冬氨酸25mg、L-胱氨酸二盐酸盐81.4375mg、L-谷氨酸25mg、甘氨酸12.5mg、L-组氨酸18.75mg、L-羟脯氨酸25mg、L-异亮氨酸62.5mg、L-亮氨酸62.5mg、L-赖氨酸盐酸盐50mg、L-甲硫氨酸18.75mg、L-苯丙氨酸18.75mg、L-脯氨酸25mg、L-丝氨酸37.5mg、L-苏氨酸25mg、L-色氨酸6.25mg、L-酪氨酸28.9875mg、L-缬氨酸25mg、对氨基苯甲酸1.25mg、硝酸钙125mg、无水硫酸镁61.05mg、磷酸氢二钠845.1625mg、氯化钾5587.5mg、氯化钠10200-20400mg、还原谷胱甘肽1.25mg、生物素0.25mg、D-泛酸钙0.3125mg、叶酸1.25mg、i-肌醇43.75mg、烟酰胺1.25mg、氯化胆碱3.75mg、盐酸吡哆醇1.25mg、核黄素0.25mg、盐酸硫胺素1.25mg、维生素B120.00625mg、L-谷氨酰胺375mg和羟乙基淀粉/13040.0-160.0g组成，注射用水定容至1000mL。该溶液配方以细胞培养基RPMI1640溶液配方为基础，结合血容量维持成分羟乙基淀粉/130和密度调节成分泛影酸钠构成。配方中RPMI1640的基础液中富含多种细胞营养所需的成分，提供了细胞良好的营养保证；羟乙基淀粉/130是现在临床上广泛使用的人工合成的胶体溶液，同时也是一种天然多糖，成分毒性小；其与氯化钠一起配制的羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，是一种无色或淡黄色略带粘性的澄明液体，在临床上广泛用于静脉输注，治疗和预防血容量不足，急性等容血液稀释；也是器官保存液UW液中的主要成分之一。泛影酸钠为临床常用的含碘苯甲酸盐类造影剂，主要用于泌尿系造影，亦用于心血管、脑血管、周围血管、胆管等造影及各种注入法造影，如关节腔，子宫输卵管及瘘管等造影，毒性小；也常添加于密度梯度液中作为辅助成分，保证溶液有一定的密度，可用于后续密度梯度分离液的配制和保证细胞分离效果。该洗涤溶液配方成分有助于维持细胞的渗透压和张力，消除组织消化液中的胶原酶、细胞破碎释放的细胞因子、炎性因子等成分，并能维持细胞良好的营养环境。综上所述，现有的胰腺消化后组织、细胞洗涤液还存在较多缺陷。本产品经过本专利技术人团队几年的共同努力，反复试用，逐步完善了洗涤液的配方和配制工艺，使胰腺组织消化后的胰岛组织、细胞洗涤过程变得简单，并有利于保护组织和细胞的活性，为后续胰岛细胞团的进一步纯化奠定了基础。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液及制备方法。本专利技术是这样实现的，一种动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液，主要用于实验用小鼠、大鼠、家兔、犬、猪、猴等动物和捐献人的胰腺器官在胰腺消化后和纯化提取胰岛细胞团前，洗涤这些消化后组织。所述动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液由泛影酸钠30.0-52.0g、L-精氨酸250mg、L-门冬酰胺62.5mg、L-门冬氨酸25mg、L-胱氨酸二盐酸盐81.4375mg、L-谷氨酸25mg、甘氨酸12.5mg、L-组氨酸18.75mg、L-羟脯氨酸25mg、L-异亮氨酸62.5mg、L-亮氨酸62.5mg、L-赖氨酸盐酸盐50mg、L-甲硫氨酸18.75mg、L-苯丙氨酸18.75mg、L-脯氨酸25mg、L-丝氨酸37.5mg、L-苏氨酸25mg、L-色氨酸6.25mg、L-酪氨酸28.9875mg、L-缬氨酸25mg、对氨基苯甲酸1.25mg、硝酸钙125mg、无水硫酸镁61.05mg、磷酸氢二钠845.1625mg、氯化钾5587.5mg、氯化钠10200-20400mg、还原谷胱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液，其特征在于，所述动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液由泛影酸钠30.0‑52.0g、L‑精氨酸250mg、L‑门冬酰胺62.5mg、L‑门冬氨酸25mg、L‑胱氨酸二盐酸盐81.4375mg、L‑谷氨酸25mg、甘氨酸12.5mg、L‑组氨酸18.75mg、L‑羟脯氨酸25mg、L‑异亮氨酸62.5mg、L‑亮氨酸62.5mg、L‑赖氨酸盐酸盐50mg、L‑甲硫氨酸18.75mg、L‑苯丙氨酸18.75mg、L‑脯氨酸25mg、L‑丝氨酸37.5mg、L‑苏氨酸25mg、L‑色氨酸6.25mg、L‑酪氨酸28.9875mg、L‑缬氨酸25mg、对氨基苯甲酸1.25mg、硝酸钙125mg、无水硫酸镁61.05mg、磷酸氢二钠845.1625mg、氯化钾5587.5mg、氯化钠10200‑20400mg、还原谷胱甘肽1.25mg、生物素0.25mg、D‑泛酸钙0.3125mg、叶酸1.25mg、i‑肌醇43.75mg、烟酰胺1.25mg、氯化胆碱3.75mg、盐酸吡哆醇1.25mg、核黄素0.25mg、盐酸硫胺素1.25mg、维生素B120.00625mg、L‑谷氨酰胺375mg和羟乙基淀粉/13040.0‑160.0g组成，注射用水定容至1000mL。...

【技术特征摘要】
1.一种动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液，其特征在于，所述动物和人胰腺器官消化后组织、细胞洗涤溶液由泛影酸钠30.0-52.0g、L-精氨酸250mg、L-门冬酰胺62.5mg、L-门冬氨酸25mg、L-胱氨酸二盐酸盐81.4375mg、L-谷氨酸25mg、甘氨酸12.5mg、L-组氨酸18.75mg、L-羟脯氨酸25mg、L-异亮氨酸62.5mg、L-亮氨酸62.5mg、L-赖氨酸盐酸盐50mg、L-甲硫氨酸18.75mg、L-苯丙氨酸18.75mg、L-脯氨酸25mg、L-丝氨酸37.5mg、L-苏氨酸25mg、L-色氨酸6.25mg、L-酪氨酸28.9875mg、L-缬氨酸25mg、对氨基苯甲酸1.25mg、硝酸钙125mg、无水硫酸镁61.05mg、磷酸氢二钠845.1625mg、氯化钾5587.5mg、氯化钠10200-20400mg、还原谷胱甘肽1.25mg、生物素0.25mg、D-泛酸钙0.3125mg、叶酸1.25mg、i-肌醇43.75mg、烟酰胺1.25mg、氯化胆碱3.75mg、盐酸吡哆醇1.25mg、核黄素0.25mg、盐酸硫胺素1.25mg、维生素B120.00625mg、L-谷氨酰胺375mg和羟乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅红兴，刘成洋，赵应征，蒋煊，余泳华，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33