一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用，包括如下步骤：（1）称取壳聚糖，溶于乙酸溶液，调节pH值至4~5之间；（2）按照摩尔比1：0.8~1.2加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35~45℃，反应2~4 h，冷却至室温，静置，得悬浊液；（3）按摩尔比1：1.2~2.0称取三甲基氯化铵，溶于乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤（2）所得悬浊液，60~80℃反应5~8h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50~70℃真空干燥，即得；得到的改性壳聚糖作为异育银鲫免疫增强剂的应用。本发明专利技术所得改性壳聚糖能明显促进异育银鲫的生长，显著提高异育银鲫的免疫力和抗病力。

Preparation and Application of Modified Chitosan for Immune Enhancement of Heterogeneous Silver Crucian Carp

The invention discloses a preparation method and application of modified chitosan for immune enhancement of allogynogenic silver crucian carp, including the following steps: (1) weighing chitosan, dissolving in acetic acid solution, adjusting pH value to 4-5; (2) adding cysteine according to molar ratio 1:0.8-1.2, stirring evenly, heating up to 35-45 degrees C, reaction 2-4 hours, cooling to room temperature, stationary, obtaining suspension; (3) according to the molar ratio 1:0.8-1.2, adding cysteine, stirring evenly, heating up to Trimethylammonium chloride was weighed at molar ratio of 1:1.2-2.0, dissolved in a mixture of ethanol and acetic acid, stirred evenly, and the suspension obtained by adding step (2) was reacted at 60-80 ~C for 5-8 H. After the reaction, the suspension was cooled to room temperature, filtered, washed and dried in vacuum at 50-70 ~C. The obtained modified chitosan was used as an immunopotentiator for crucian carp. The modified chitosan obtained by the invention can obviously promote the growth of the heterotrophic silver crucian carp, and significantly improve the immunity and disease resistance of the heterotrophic silver crucian carp.

【技术实现步骤摘要】
一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用
本专利技术属于水产养殖
，具体涉及一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用。
技术介绍
异育银鲫是利用天然雌核发育的方正银鲫为母本，以兴国红鲤为父本，经人工授精繁育的子代，具有良好的杂种优势，增产效果明显，且肉质细嫩，营养丰富，并且离水存活时间长，食性广，容易饲养，适应性强，成活率高，是我们长江中下游地区淡水养殖中主要养殖或混养的经济鱼类。但近年来，随着塘养殖周期的增加以及异育银鲫品种的退化，异育银鲫频繁爆发锚头鳋、孢子虫、烂鳃病等疾病，给养殖业带来较大的经济损失。为提高异育银鲫免疫活性，养殖业通常会将免疫增强剂添加到饲料中复配使用。免疫增强剂时指具有促进或诱发宿主防御反应，增强生物体抗病能力的一类物质，主要作用于水生无脊椎动物的非特异性免疫系统，激活机体自身的免疫机能从而达到防御效果，增强其抗病力。与抗生素和疫苗相比，免疫增强剂具有安全，无残留，作用范围广和使用方便等优点。酵母多糖是水产养殖中常用的免疫增强剂，但也存在对异育银鲫免疫力和抗病力提高不显著等缺点。壳聚糖又称几丁聚糖，是迄今所发现的唯一天然碱性多糖。壳聚糖对生物体是相对安全的，且可生物降解，具有生物相容性。现有技术中已见到壳聚糖在水产养殖领域的应用，但有很多仍处于实验室阶段，这便要求研究者继续利用各种方法和技术对壳聚糖进行改进和拓展。
技术实现思路
针对现有问题的不足，本专利技术的第一个目的是提供一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法，所得改性壳聚糖能明显促进异育银鲫的生长，显著提高异育银鲫的免疫力和抗病力。第二个目的是提供一种用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的应用。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是：一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，包括如下具体步骤：(1)称取壳聚糖，溶于乙酸溶液，调节pH值至4～5之间；(2)按照摩尔比1：0.8～1.2加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35～45℃，反应2～4h，冷却至室温，静置，得悬浊液；(3)按摩尔比1：1.2～2.0称取三甲基氯化铵，溶于乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤(2)所得悬浊液，60～80℃反应5～8h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50～70℃真空干燥，即得。作为本申请的优选技术方案，所述步骤(1)中，乙酸的浓度为0.01mol/L。作为本申请的优选技术方案，所述步骤(2)中，静置的时间为8～12h。作为本申请的优选技术方案，所述步骤(3)中乙醇和乙醇的体积比为3：4。作为本申请的优选技术方案，所述步骤(3)中，洗涤采用的有机溶剂和去离子水交叉洗涤的方式。作为本申请的优选技术方案，所述步骤(3)中洗涤采用的有机溶剂为乙醇、甲醇或者丙酮中的一种或多种。上述异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法制备得到的改性壳聚糖。上述异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法制备得到的改性壳聚糖作为异育银鲫免疫增强剂的应用。改性壳聚糖作为异育银鲫免疫增强剂，可以单独使用，也可以与其他免疫增强剂复配使用。作为本申请的优选技术方案，改性壳聚糖添加量为异育银鲫饲料添加量的0.3～0.6％。作为本申请的优选技术方案，所述异育银鲫饲料的主要成分和对应质量份如下：鱼粉10～15份，豆粕20～25份，菜粕20～23份，酶解鸡粉10～15份，肉骨粉5～10份，麸皮5～10份，花生油3～6份，磷酸二氢钙1～3份，预混料0.5～2份。作为本申请的优选技术方案，所述所述异育银鲫饲料的主要成分和对应质量份如下：鱼粉15份，豆粕20份，菜粕20，酶解鸡粉15份，肉骨粉5份，麸皮8份，花生油3份，磷酸二氢钙2％，预混料1份。其中，预混料为多维、多矿的混合物，采用现有技术即可。有益效果本专利技术提供的用于异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法及应用，与现有技术相比，具有以下有益效果：(1)采用改性壳聚糖作为异育银鲫的免疫增强剂，能明显促进异育银鲫的生长，显著提高异育银鲫的免疫力和抗病力，效果明显高于未改性壳聚糖；(2)减少了抗生物等药物的使用，为环境友好型免疫增强剂；(3)本专利技术的原料来源广泛且价格便宜，制备方法简单，成本低廉，适合工业化生产。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。所用试剂或者仪器设备未注明生产厂商的，均视为可以通过市场购买的常规产品。实施例1：一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，包括如下具体步骤：(1)称取壳聚糖，溶于0.01mol/L乙酸溶液中，调节pH值至4；(2)按照摩尔比1：0.8加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35℃，反应2h，冷却至室温，静置8h，得悬浊液；(3)按摩尔比1：1.2称取三甲基氯化铵，溶于体积比3：4的乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤(2)所得悬浊液，60℃反应5h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50℃真空干燥，即得。实施例2一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，包括如下具体步骤：(1)称取壳聚糖，溶于0.01mol/L乙酸溶液中，调节pH值至4～5之间；(2)按照摩尔比1：1加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至40℃，反应3h，冷却至室温，静置10h，得悬浊液；(3)按摩尔比1：1.4称取三甲基氯化铵，溶于体积比3：4的乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤(2)所得悬浊液，70℃反应6h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，70℃真空干燥，即得。实施例3一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，包括如下具体步骤：(1)称取壳聚糖，溶于0.01mol/L的乙酸溶液，调节pH值至5之间；(2)按照摩尔比1：0.8～1.2加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35～45℃，反应2～4h，冷却至室温，静置12h，得悬浊液；(3)按摩尔比1：1.2～2.0称取三甲基氯化铵，溶于乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤(2)所得悬浊液，60～80℃反应5～8h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50～70℃真空干燥，即得。实施例4一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，包括如下具体步骤：(1)称取壳聚糖，溶于0.01mol/L的乙酸溶液，调节pH值至4.5之间；(2)按照摩尔比1：1加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35～45℃，反应2～4h，冷却至室温，静置12h，得悬浊液；(3)按摩尔比1：2.0称取三甲基氯化铵，溶于体积比乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤(2)所得悬浊液，80℃反应5～h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50℃真空干燥，即得。实施例5在饲料中添加0.3％实施例1制备得到的改性壳聚糖，其中异育银鲫饲料的配方为：鱼粉15份，豆粕20份，菜粕20，酶解鸡粉15份，肉骨粉5份，麸皮8份，花生油3份，磷酸二氢钙2份，预混料1份；方法如下：试验异育银鲫为同一批异育银鲫鱼种，饲养在盐城工学院沿海养殖鱼类饲料工程技术研究中心实验室进行，试验异育银鲫用3％的食盐水消毒后在水族箱中驯养一周后，选用90尾体重在98.2±1.2g体质健壮异育银鲫随机分箱，在300L玻璃钢水族箱中试验，每组饲料3个重复，每个重复30尾鱼。每天投喂4次，自然光照，试验周期60天，结束后对样品进行分析。实施例6在饲料中添加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，其特征在于，包括如下具体步骤：（1）称取壳聚糖，溶于乙酸溶液，调节pH值至4~5之间；（2）按照摩尔比1：0.8~1.2加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35~45 ℃，反应2~4 h，冷却至室温，静置，得悬浊液；（3）按摩尔比1：1.2~2.0称取三甲基氯化铵，溶于乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤（2）所得悬浊液，60~80 ℃反应5~8 h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50~70 ℃真空干燥，即得。

【技术特征摘要】
1.一种用于异育银鲫免疫活性增强的改性壳聚糖的制备方法，其特征在于，包括如下具体步骤：（1）称取壳聚糖，溶于乙酸溶液，调节pH值至4~5之间；（2）按照摩尔比1：0.8~1.2加入半胱氨酸，搅拌均匀，升温至35~45℃，反应2~4h，冷却至室温，静置，得悬浊液；（3）按摩尔比1：1.2~2.0称取三甲基氯化铵，溶于乙醇和乙酸的混合溶液中，搅拌均匀，加入步骤（2）所得悬浊液，60~80℃反应5~8h，反应结束后冷却至室温，过滤，洗涤干净，50~70℃真空干燥，即得。2.根据权利要求1所述的异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，乙酸的浓度为0.01mol/L。3.根据权利要求1所述的异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，静置的时间为8~12h。4.根据权利要求1所述的异育银鲫免疫增强的改性壳聚糖的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：於叶兵，王爱民，刘飞，杨文平，田红艳，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32