A culture method and medium for inducing adventitious shoot regeneration from Apple dwarfing rootstock leaves in vitro was introduced. Leaves used to induce adventitious shoots were obtained from test-tube seedlings on MS-based subculture medium. Adventitious shoots were obtained from leaves on NM and NAA-based adventitious shoot induction medium. Seedlings were obtained from adventitious shoots proliferation and rooting culture. The adventitious shoots of Apple Dwarfing Rootstocks can be obtained by culturing in vitro leaves of rootstocks, so the adventitious shoots of Apple Dwarfing Rootstocks can be regenerated in vitro.
【技术实现步骤摘要】
诱导苹果矮化砧木离体叶片高效再生不定梢的培养方法和培养基
本专利技术涉及一种培养方法和培养基，尤其是一种诱导苹果矮化砧木离体叶片高效再生不定梢的培养方法和培养基。
技术介绍
植物叶片的离体培养，是指在无菌和人工控制环境条件下，以叶片为外植体，采用适当的培养方法诱导叶片产生不芽或不定胚的技术，离体叶片再生不定芽技术是在细胞水平进行诱变育种、体细胞变异筛选、嵌合体分离的基础，是利用基因工程技术进行外源基因遗传转化操作的基础，是在植物材料较少时实现植物快速克隆的基础，因此植物叶片的离体培养是具有重要实用价值的高新技术，在植物的种质创新、新品种选育、种苗快速繁殖育苗方面得到了广泛应用。生物技术育种为多年生果树的遗传改良提供了一条有效途径，但生物技术的离体诱变和外源基因遗传转化应用的前提是离体叶片高效不定梢再生的成功，植物叶片培养已在很多物种上获得了再生不定芽或不定胚的成功，由于不同物种基因型及遗传背景的复杂性，研究者们还不能实现对所有植物种的叶片培养再生，由于不同类型和不同品种其基因型的差异，其再生的难易和所需的培养基条件存在较大差异，尤其是多年生木本的一些果树品种其离体...
【技术保护点】
1.一种诱导苹果矮化砧木离体叶片高效再生不定梢的培养方法，其特征是：其步骤是：把试管苗在以MS为主要成份的继代增殖培养基上培养得到用于诱导产生不定梢的叶片，把叶片在以NM和NAA的不定梢诱导培养基上培养得到不定梢，对不定梢进行增殖和生根培养得到幼苗。
【技术特征摘要】
1.一种诱导苹果矮化砧木离体叶片高效再生不定梢的培养方法，其特征是：其步骤是：把试管苗在以MS为主要成份的继代增殖培养基上培养得到用于诱导产生不定梢的叶片，把叶片在以NM和NAA的不定梢诱导培养基上培养得到不定梢，对不定梢进行增殖和生根培养得到幼苗。2.根据权利要求1所述的诱导苹果矮化砧木离体叶片高效再生不定梢的培养方法，其特征是：其步骤是：所有培养基在灭菌前调pH值到5.8，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20分钟，培养室培养温度为25±2℃，光培养的光照周期为16小时/天，一、试管苗的增殖培养：试管苗在继代增殖培养基上进行试管苗增殖培养，继代增殖培养基设置为MS+0.5-1.0mg/LBA+0.01-0.5mg/LIBA+30g/L蔗糖，试管苗表现增殖良好且苗绿苗壮，叶片伸展，易于叶片培养操作，其技术目的在于：获得足够量的健壮生长的、可用做叶片培养的试管绿苗材料；二、叶片培养诱导产生不定梢：试管苗在继代增殖培养基上培养4-5周时，切取健壮绿苗顶端刚展开幼嫩叶片，用无菌手术刀片垂直于叶片中脉横切伤，根据叶片大小切3-6刀，把切好的叶片接种于不定梢诱导培养基上，得到不定梢的绿梢，不定梢诱导培养基设置为NM+0.1-4mg/LTDZ+0.1-0.5mg/LNAA+10g/L-50g/L山梨糖醇，其技术目的在于：调控植物生长和发育，促进细胞分裂、扩大、伸长、诱导芽的分化，得到不定梢的绿梢；三、不定梢的生根：叶片培养诱导产生的不定梢移到继代增殖培养基上进行继代增殖二十五至三十五天并，选取生长高度在1.5cm以上的健壮的绿梢转移到生根培养基，对不定梢的绿梢进行生根诱导，得到不定梢的生根小植，叶片培养诱导产生的不定梢的生根培养基设置为1/2MS+0.1-2mg/LIBA+20g/L蔗糖，其技术目的在于：获得试管绿苗的生根小植株，再把这些生根小植株从瓶内移栽到瓶外，获得育种的新材料或无性繁殖的试管苗；四、幼苗的获取：把不定梢的生根小植从培植瓶内移栽到培植瓶外，得到试管培养的幼苗，其技术目的在于：获得无性繁殖的自根苹果矮化幼苗。3.根据权利要求1所述的诱导苹果矮化砧木离体叶片高效再生不定梢的培养方法，其特征是：不定梢诱导培养基包括基本培养基、植物生长调节剂和碳水化合物，基本培养基主要包括大量营养元素和微量营养元素无机营养物质和有机添加物，碳水化合物通常是蔗糖或其他糖类物质，碳水化合物的作用主要是作为培养基内的碳源和能源，并对维持培养基的渗透压起重要作用，植物生长调节剂主要包括细胞分裂素类物质和生长素类物质。4.一种诱导苹果矮化砧木离体叶片高效再生不定梢的培养基，其特征是：包含有继代增殖培养基、不定梢诱导培养基和叶片培养诱导产生的不定梢转移到继代增殖培养基和转移...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙清荣，关秋竹，李林光，王海波，陶吉寒，孙洪雁，
申请(专利权)人：山东省果树研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。