鉴定皂荚性别的基因组合、SSR引物组合、鉴定方法和应用技术

本发明专利技术提供了鉴定皂荚性别的基因组合、SSR引物组合、鉴定方法和应用，涉及分子生物学DNA分子标记检测，所述基因组合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；所述G1～5基因依次具有SEQ ID No.1～5所示的核苷酸序列。采用本发明专利技术提供的基因组合能够鉴定皂荚的性别，准确率为100％。

Gender Assemblage, SSR Primer Assemblage, Identification Method and Application of Gleditsia sinensis

The present invention provides gene combinations, SSR primer combinations, identification methods and applications for identifying sex of Gleditsia sinensis, involving DNA molecular marker detection in molecular biology. The genome combinations include G1 gene, G2 gene, G3 gene, G4 gene and G5 gene, and the G1-5 gene in turn has the nucleotide sequence shown in SEQ ID No.1-5. The genomic combination provided by the present invention can identify the sex of Gleditsia sinensis, and the accuracy is 100%.

【技术实现步骤摘要】
鉴定皂荚性别的基因组合、SSR引物组合、鉴定方法和应用
本专利技术涉及分子生物学DNA分子标记检测
，具体涉及鉴定皂荚性别的基因组合、SSR引物组合、鉴定方法和应用。
技术介绍
皂荚GleditsiasinensisLam.系豆科苏木亚科皂荚属植物(2n＝28)，为我国重要的乡土树种之一。皂荚可以用于环境防护、园林绿化，还能作为经济树种和木料使用。不仅如此，皂荚具有很高的药用价值，中国药典收录皂角(大皂荚与猪牙皂)与皂角刺为皂荚药用部位；皂角刺所含黄酮类、甾类等药用成分在治疗肿瘤方面发挥着重要作用；大皂角中所含的皂甙除了抗癌、抗病毒等功效还具有有去污和发泡的能力，已经成为天然的化妆和洗涤用品的制作原料，具有很高的经济价值。SSR(SimpleSequenceRepeats)标记是近年来发展起来的一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术，也称为微卫星DNA(MicrosatelliteDNA)，是一类由几个核苷酸(一般为1～6个)为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。每个SSR两侧的序列一般是相对保守的单拷贝序列。与其它分子标记相比，SSR标记具有以下优点：(1)数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高；(2)具有多等位基因的特性，提供的信息量高；(3)以孟德尔方式遗传，呈共显性；(4)每个位点由设计的引物顺序决定，便于不同的实验室相互交流合作开发引物。SSR分子标记电泳结果分辨率高，稳定性妤，易于测序，被广泛使用于遗传多样性分析等分子生物学领域，但现有技术并未有关于SSR分子标记应用于植物性别鉴别研究的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供鉴定皂荚性别的基因组合、SSR引物组合、鉴定方法和应用，采用本专利技术提供的基因组合能够鉴定皂荚的性别。本专利技术提供了鉴定皂荚性别的基因组合，所述基因组合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；所述G1～5基因依次具有SEQIDNo.1～5所示的核苷酸序列。本专利技术还提供了扩增上述技术方案所述基因组合的SSR引物组合，所述SSR标记引物组合包括：GS-SSR-F1引物、GS-SSR-R1引物、GS-SSR-F2引物、GS-SSR-R2引物、GS-SSR-F3引物、GS-SSR-R3引物、GS-SSR-F4引物、GS-SSR-R4引物、GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物；所述GS-SSR-F1引物具有SEQIDNo.6所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R1引物具有SEQIDNo.7所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F1引物和GS-SSR-R1引物扩增G1基因；所述GS-SSR-F2引物具有SEQIDNo.8所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R2引物具有SEQIDNo.9所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F2引物和GS-SSR-R2引物扩增G2基因；所述GS-SSR-F3引物具有SEQIDNo.10所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R3引物具有SEQIDNo.11所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F3引物和GS-SSR-R3引物扩增G3基因；所述GS-SSR-F4引物具有SEQIDNo.12所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R4引物具有SEQIDNo.13所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F4引物和GS-SSR-R4引物扩增G4基因；所述GS-SSR-F5引物具有SEQIDNo.14所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R5引物具有SEQIDNo.15所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物扩增G5基因。本专利技术还提供了利用上述技术方案所述的SSR引物组合鉴定皂苷性别的方法，包括：以皂荚基因组DNA为模版，用所述SSR引物分别进行PCR扩增，分别得到扩增产物；当所述扩增产物的分子量同时分别为186bp、305bp、266bp、150bp和260bp时，皂荚为雌性，否则为雄性。优选的，所述皂荚为皂荚叶。优选的，所述PCR扩增的体系每25μL包括：浓度为150ng/μL的基因组DNA1μL，dNTP2μL，浓度为10μM/L的GS-SSR-F1μL，浓度为10μM/L的GS-SSR-R1μL，10×buffer2.5μL，Taq酶0.5μL，浓度为2.5mM/mL的氯化镁溶液1.5μL和ddH2O15.5μL。优选的，所述PCR扩增的程序包括：95℃5min；95℃30s，52℃30s，72℃30s，35个循环；72℃7min。本专利技术还提供了上述技术方案所述的基因组合在鉴定皂荚性别中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述的SSR引物组合在鉴定皂荚性别中的应用。本专利技术提供了鉴定皂荚性别的基因组合，采用本专利技术提供的基因组合能够鉴定皂荚的性别。本专利技术实施例的结果显示：采用本专利技术提供的基因组合能够鉴定皂荚的性别，准确率为100％。附图说明图1为成功引物扩增雌雄样品琼脂糖电泳胶图，其中，M为makerDL200(TAKARA)，27代表34995_1引物(G1基因)，34代表64130_1引物(G2基因)，36代表78763_1引物(G3基因)，39代表147508_1引物(G4基因)，41代表1467_1引物(G5基因)，ZC1-ZC5代表雌株；ZX1-XZ5代表雄株；图2为已知性别皂荚琼脂糖电泳图，其中，M为makerDL200(TAKARA)，27代表34995_1引物(G1基因)，34代表64130_1引物(G2基因)，36代表78763_1引物(G3基因)，39代表147508_1引物(G4基因)，41代表1467_1引物(G5基因)，CZ代表雌株；XZ代表雄株。具体实施方式本专利技术提供了鉴定皂荚性别的基因组合，其特征在于，所述基因组合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；所述G1～5基因依次具有SEQIDNo.1～5所示的核苷酸序列。在本专利技术中，所述基因组合能够鉴定皂荚的性别。在本专利技术中，所述G1基因具有SEQIDNo.1所示的核苷酸序列，具体序列如下：CTCCTTGTTTAGTGTGCAGCTTTTAGAAAATACTGAAGAATAGGAGCATGCATCACACACATGAAGACTGTATGTCGCTTGTATCAATTTTATGCAAATGTATACGCGTACGTAAGCGAGCGAGGAGCAGCAGCACAGGTCGTCCGAGGACACGTAACTTAGCTACGGAGCTGTCCAATGTATGCATGCAAGTATGGCTATTCAACAAATCCATTTTCCTGGCTACTCGACTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCCCTCTGTCTTTTCTACTGGTAAACTGCTCTGCTTCTACGGCAATATCCACTGACTTCTCACCTTCTGCCGCGTTGGCTATTCGAACTTTGCTAACAAAATTTGAATCTTTCTCACGAGTTTGACCTTGTCTGCTTTGGTACGTTAGAATGACGAGTGATGGTTATTTATAATGATTTGTGCAAGTGCTTAATTTCTCATAAAAATTAATTTTATGGTTTTATTACGACAACGTAC。在本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鉴定皂荚性别的基因组合，其特征在于，所述基因组合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；所述G1～5基因依次具有SEQ ID No.1～5所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.鉴定皂荚性别的基因组合，其特征在于，所述基因组合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；所述G1～5基因依次具有SEQIDNo.1～5所示的核苷酸序列。2.扩增权利要求1所述基因组合的SSR引物组合，其特征在于，所述SSR标记引物组合包括：GS-SSR-F1引物、GS-SSR-R1引物、GS-SSR-F2引物、GS-SSR-R2引物、GS-SSR-F3引物、GS-SSR-R3引物、GS-SSR-F4引物、GS-SSR-R4引物、GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物；所述GS-SSR-F1引物具有SEQIDNo.6所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R1引物具有SEQIDNo.7所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F1引物和GS-SSR-R1引物扩增G1基因；所述GS-SSR-F2引物具有SEQIDNo.8所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R2引物具有SEQIDNo.9所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F2引物和GS-SSR-R2引物扩增G2基因；所述GS-SSR-F3引物具有SEQIDNo.10所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R3引物具有SEQIDNo.11所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F3引物和GS-SSR-R3引物扩增G3基因；所述GS-SSR-F4引物具有SEQIDNo.12所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R4引物具有SEQIDNo.13所示的核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建军，叶承霖，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：河南,41