烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用，属于烟草产品加工提取技术领域。本发明专利技术通过对烟草原料进行预处理，并针对预处理后的烟草原料依次进行常温提取、高温提取、甲醇提取、丙酮提取、液相色谱分离等操作，且使用高极性溶剂纯化水、甲醇、丙酮作为提取溶剂，通过采用不同提取溶剂不同提取条件，可以实现将烟草原料中的烟草活性组分充分提取，提高烟草活性组分的提取含量。实验发现该目的组分具有抗肿瘤功能，可开发成为预防和治疗肿瘤的药物。

Extraction and Application of Anti-Tumor Active Components from Tobacco

The invention provides a method for extracting anti-tumor active components of tobacco and its application, which belongs to the technical field of processing and extracting tobacco products. By pretreatment of tobacco grassland material, and sequential operation of normal temperature extraction, high temperature extraction, methanol extraction, acetone extraction and liquid chromatography separation for the pretreated tobacco grassland material, and using high polar solvent to purify water, methanol and acetone as extraction solvent, the tobacco in tobacco grassland material can be realized by adopting different extraction solvents and different extraction conditions. Full extraction of active components can improve the extraction content of active components in tobacco. It was found that the target component had anti-tumor function and could be developed as a drug for the prevention and treatment of cancer.

【技术实现步骤摘要】
烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用
本专利技术涉及烟草产品加工提取
，具体涉及一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用。
技术介绍
烟草也称仙草，是一味传统的中药材，它的无机成分包括水、矿质元素；有机成分主要包括糖类、生物碱、杂环类、色素、酚类、萜类、有机酸类、脂质类、醇类、醛酮类等。其中，烟草中有机成分具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化活性、清除体内自由基等多种功能。目前，为了实现对烟草活性组分的提取，一般采用超临界提取、索氏提取、超声波提取方式。采用无水乙醇、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷作为提取溶剂。其中低极性溶剂如石油醚、正己烷，中极性溶剂丙酮、二氯甲烷，这些溶剂多为易挥发、易燃、有毒溶剂，对工业生产设备、人员等要求高，且得到的烟草活性组分的含量少，这就大大限制了烟草活性组分的进一步研究和应用。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用，以提高烟草活性组分的提取量。第一方面，本专利技术提供了一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法，该方法包括以下步骤：(1)预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行超微粉碎处理，得到烟草超微粉；(2)常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(2)中的提取溶剂为纯化水；(3)高温水提：在步骤(2)中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(3)中的提取溶剂为纯化水；(4)甲醇提取：在步骤(3)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理，得到甲醇提取上清浓缩浸膏(TMS)；步骤(4)中的提取溶剂为85-100％的甲醇；(5)丙酮提取：在步骤(4)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干/低温冷冻干燥处理，得到丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)；步骤(5)中的提取溶剂为85-100％的丙酮；(6)色谱分离及组分活性筛选：(a)取步骤(5)中得到的丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)用60％甲醇-水溶液进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为：5％甲醇-水溶液等度洗脱，15％甲醇-水溶液等度洗脱，20％甲醇-水溶液等度洗脱，30％甲醇-水溶液等度洗脱，40％甲醇-水溶液等度洗脱，50％甲醇-水溶液等度洗脱，55％甲醇-水溶液等度洗脱，65％甲醇-水溶液等度洗脱，100％甲醇等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分12进行旋蒸浓缩干燥；(b)取活性组分12用无水乙醇进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为100％正己烷等度洗脱，85％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，70％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，60％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分TA-150-12-4进行旋蒸浓缩干燥；(7)结构分析：取步骤(6)中得到活性组分TA-150-12-4进行质谱分析。色谱条件：5％-100％甲醇-水溶液10min；100％甲醇5min；质谱条件：正离子模式一级质谱；参比离子质荷比：121.050873和922.009798。其中，步骤(1)中的中的超微粉碎处理是将烘干处理后的烟草原料，使用50-80目筛网的粉碎机进行粉碎处理，并对粉碎处理后的烟草原料，使用超微粉碎机进行粉碎处理，得到所述烟草超微粉。其中，步骤(3)中的离心处理是指将降温处理后的所述浓缩提取液置于离心瓶中，离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpm/min。其中，步骤(4)中加入提取溶剂的质量是沉淀物的质量的1.5-2.5倍。其中，步骤(4)中的浸渍提取操作是指每隔0.5h搅拌一次，提取时间为12-24h。其中，步骤(4)中的浓缩烘干处理的温度为60-70℃。其中，步骤(6)(a)中制备液相使用的色谱柱填料为直径10μm的C18，大小为150mm×250mm，洗脱方式为：5％甲醇-水溶液等度洗脱10min，15％甲醇-水溶液等度洗脱5min，20％甲醇-水溶液等度洗脱5min，30％甲醇-水溶液等度洗脱5min，40％甲醇-水溶液等度洗脱5min，50％甲醇-水溶液等度洗脱5min，55％甲醇-水溶液等度洗脱5min，65％甲醇-水溶液等度洗脱5min，100％甲醇等度洗脱12min，检测波长为260nm，上样量为200mL，流速为600mL/min。其中，步骤(6)(b)中制备液相使用的色谱柱填料为直径10μm的硅胶，大小为150mm×250mm，洗脱方式为：洗脱方式为100％正己烷等度洗脱5min，85％正己烷-乙醇溶液等度洗脱15min，70％正己烷-乙醇溶液等度洗脱23min，60％正己烷-乙醇溶液等度洗脱12min，检测波长为260nm，上样量为80mL，流速为450mL/min。其中，步骤(6)、(a)、(b)中体外抗肿瘤活性筛选是指进行抑制人肺癌A549细胞生长试验和抑制人肝癌Hep-G2细胞生长试验。第二方面，本专利技术提供了一种根据所述烟草活性组分在制备抗癌药物中的应用。本专利技术具有如下的有益效果：1、本专利技术通过对烟草原料进行预处理，并针对预处理后的烟草原料依次进行常温提取、高温提取、甲醇提取三次操作，且使用高极性溶剂纯化水、甲醇作为提取溶剂，通过采用不同提取溶剂不同提取条件，可以保证将烟草原料中的烟草活性组分实现充分提取，提高烟草活性组分的提取含量；2、提取溶剂为水、乙醇等容积，成本低廉；3、本专利技术对烟草原料经过特殊方法提取的提取物可作为抗肿瘤药物开发，具有广阔的应用前景。同时，本专利技术的烟草提取物的制备方法简单，适合工业化生产。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例。附图说明图1所示的是本专利技术实施例1得到的烟草活性组分的流程图；图2所示的是本专利技术实施例1(6)(a)得到的烟草丙酮提取物色谱分离图；图3所示的是本专利技术实施例1(6)(b)得到的烟草活性组分12色谱分离图；图4所示的是本专利技术实施例1得到的烟草活性组分TA-150-12-4质谱检测离子图；图5所示的是本专利技术实施例1得到的烟草活性组分TA-150-12-4对人肺肿瘤A549细胞生长抑制示意图；图6所示的是本专利技术实施例1得到的烟草活性组分TA-150-12-4对人肝癌Hep-G2细胞生长抑制示意图；上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有说明，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行超微粉碎处理，得到烟草超微粉；(2)常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(2)中的提取溶剂为纯化水；(3)高温水提：在步骤(2)中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90‑100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(3)中的提取溶剂为纯化水；(4)甲醇提取：在步骤(3)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0‑4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理，得到甲醇提取上清浓缩浸膏(TMS)；步骤(4)中的提取溶剂为85‑100％的甲醇；(5)丙酮提取：在步骤(4)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0‑4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干/低温冷冻干燥处理，得到丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)；步骤(5)中的提取溶剂为85‑100％的丙酮；(6)色谱分离及组分活性筛选：(a)取步骤(5)中得到的丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)用60％甲醇‑水溶液进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为：5％甲醇‑水溶液等度洗脱，15％甲醇‑水溶液等度洗脱，20％甲醇‑水溶液等度洗脱，30％甲醇‑水溶液等度洗脱，40％甲醇‑水溶液等度洗脱，50％甲醇‑水溶液等度洗脱，55％甲醇‑水溶液等度洗脱，65％甲醇‑水溶液等度洗脱，100％甲醇等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分12进行旋蒸浓缩干燥；(b)取活性组分12用无水乙醇进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为100％正己烷等度洗脱，85％正己烷‑乙醇溶液等度洗脱，70％正己烷‑乙醇溶液等度洗脱，60％正己烷‑乙醇溶液等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分4(以下均称为TA‑150‑12‑4)进行旋蒸浓缩干燥；(7)结构分析：取步骤(6)中得到活性组分TA‑150‑12‑4进行质谱分析。色谱条件：5％‑100％甲醇‑水溶液10min；100％甲醇5min；质谱条件：正离子模式一级质谱；参比离子质荷比：121.050873和922.009798。...

【技术特征摘要】
1.一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行超微粉碎处理，得到烟草超微粉；(2)常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(2)中的提取溶剂为纯化水；(3)高温水提：在步骤(2)中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(3)中的提取溶剂为纯化水；(4)甲醇提取：在步骤(3)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理，得到甲醇提取上清浓缩浸膏(TMS)；步骤(4)中的提取溶剂为85-100％的甲醇；(5)丙酮提取：在步骤(4)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干/低温冷冻干燥处理，得到丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)；步骤(5)中的提取溶剂为85-100％的丙酮；(6)色谱分离及组分活性筛选：(a)取步骤(5)中得到的丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)用60％甲醇-水溶液进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为：5％甲醇-水溶液等度洗脱，15％甲醇-水溶液等度洗脱，20％甲醇-水溶液等度洗脱，30％甲醇-水溶液等度洗脱，40％甲醇-水溶液等度洗脱，50％甲醇-水溶液等度洗脱，55％甲醇-水溶液等度洗脱，65％甲醇-水溶液等度洗脱，100％甲醇等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分12进行旋蒸浓缩干燥；(b)取活性组分12用无水乙醇进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为100％正己烷等度洗脱，85％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，70％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，60％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分4(以下均称为TA-150-12-4)进行旋蒸浓缩干燥；(7)结构分析：取步骤(6)中得到活性组分TA-150-12-4进行质谱分析。色谱条件：5％-100％甲醇-水溶液10min；100％甲醇5min；质谱条件：正离子模式一级质谱；参比离子质荷比：...

【专利技术属性】
技术研发人员：张耀洲，张时山，张武华，陈玉皎，聂开美，周泽润，牛亚茹，王丰，耿召良，苏贤坤，
申请(专利权)人：贵州贵安精准医学研究院股份有限公司，贵州省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：贵州,52