本发明专利技术公开了柴胡多糖在柴胡多糖在用于制备治疗心肌损伤药物中的应用。心肌损伤时，ROS/P53/S100‑A9可以形成一个微妙的正反馈通路，在心肌损伤期间与C3起作用,激活下游补体蛋白的表达，激活补体系统从而加剧心肌损伤。本发明专利技术创新点是从上述机制出发，将补体抑制活性柴胡多糖应用到心肌损伤的治疗中，通过抑制正反馈通路激活的补体系统，减轻心肌损伤。这为临床上心肌损伤提供新的治疗方法。
Application of Bupleurum Bupleurum Polysaccharide in the Treatment of Myocardial Injury
The invention discloses the application of Bupleurum polysaccharide in the preparation of medicines for treating myocardial injury. During myocardial injury, ROS/P53/S100_A9 can form a subtle positive feedback pathway, which acts with C3 during myocardial injury, activates the expression of downstream complement proteins, and activates the complement system to aggravate myocardial injury. The innovation of the invention is to apply the complement inhibitory active Bupleurum polysaccharide to the treatment of myocardial injury based on the above mechanism, and to reduce the myocardial injury by inhibiting the complement system activated by the positive feedback pathway. This provides a new treatment for myocardial injury in clinic.
【技术实现步骤摘要】
柴胡多糖在用于治疗心肌损伤药物中的应用
本专利技术属于中药应用
，涉及柴胡多糖用于临床治疗心肌损伤药物中的应用。
技术介绍
异丙肾上腺素(isoproterenol，ISO)是一种合成的非选择性β肾上腺素受体激动剂，可以兴奋心脏，增加心肌收缩力，加快心率，舒张血管、支气管等。目前已广泛用于诱导建立心肌损伤模型,为临床研究心血管疾病的发病机制提供了基础。活性氧(ROS)是具有氧化还原潜能的氧衍生物，其促氧化能力超过抗氧化能力，表现为氧化应激。P53蛋白是ROS诱导的细胞凋亡的重要下游调节蛋白，与DNA损伤和修复、细胞周期抑制及凋亡的关系。补体系统是人体重要的免疫防御系统，参与多种疾病的病理过程。蛋白质组学是一种用于研究特定组织，体液或细胞中表达的完整蛋白质的组学技术，分析细胞蛋白质的动态变化和蛋白质之间的相互作用等，从而有助于全面了解疾病发生和细胞代谢的过程。蛋白质组学被广泛用于阐明疾病发展机制和发现治疗靶点。TMT或iTRAQ标记的定量蛋白质组分析，具有灵敏度高、适用范围广、高通量的优势，对于药物作用进程，以及蛋白质效应靶点的筛选都具有重要意义。柴胡是伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狭叶柴胡)BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根，其药性辛、苦、微寒，有和解表里，疏肝解郁，升阳之功效。柴胡多糖是柴胡主要有效成分之一，有研究表明柴胡多糖具有抗辐射、增强免疫功能、抗病毒和抑制补体过度激活等作用，对肝炎和系统性红斑狼疮、肾炎、类风湿关节炎等自身免疫性疾病具有重要的临床价值。柴胡多糖用于心肌损伤的治疗目前尚未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术公开了一种柴胡多糖在用于制备治疗心肌损伤药物中的应用。特别是柴胡多糖在有效抑制补体系统从而减轻心肌损伤药物中的应用。本专利技术发现ROS/P53/S100-A9可以形成一个微妙的正反馈通路，在心肌损伤期间与C3起作用,激活下游补体蛋白的表达，激活补体系统从而加剧心肌损伤。抑制过度激活的补体系统可以有效的减轻心肌损伤的程度。柴胡多糖可以抑制补体系统从而减轻心肌损伤，这可以为临床上心肌损伤提供新的治疗方法。本专利技术更加详细的描述如下：（1）阐释异丙肾上腺素通过正反馈循环激活补体系统进而加重心肌损伤的机制，具体机制是活性氧（ROS）、P53、S100-A9可以形成一个微妙的正反馈环，激活下游补体蛋白的表达，并激活补体系统，从而加重心肌损伤。该结果可以为儿茶酚胺的用途和毒性机制提供了研究基础。实验还证明了抑制P53，S100-A9和ROS的表达，抑制补体系统的激活，细胞凋亡率降低，从而减轻ISO诱导的心肌损伤，这可以为心肌损伤的临床治疗提供潜在的靶点。（2）进一步公开蛋白质组学阐明机制的方法。本专利技术通过定量蛋白质组学技术鉴定差异表达的蛋白质，并进行生物信息学分析。然后整合组学数据，通过回顾文献和分析KEGG数据库，发现关键信号通路，获得异丙肾上腺素造成心脏损伤的可能的作用机制。进一步以H9C2细胞为对象进行体外研究确证了这一机制。MTT技术检测ISO对H9c2心肌细胞活力的影响。以Westernblot技术对关键信号通路蛋白表达量进行检测。并进一步采用ShRNA干扰技术验证关键信号通路蛋白的作用，最终确证组学分析所获得的结果。（3）利用蛋白质组学分析，得到的数据使用KEGG通路富集分析显示补体系统和凝血级联被显著激活。在动物水平验证心肌损伤后大鼠中差异靶蛋白的表达水平，在给予大鼠低、中、高剂量的ISO后，蛋白质印迹技术检查心肌组织中P53，P-P53，S100-A9，C3，C5和Caspase-3的表达水平，每种蛋白质的表达水平与ISO的剂量正相关。在H9c2心肌细胞损伤模型中进行功能验证，随着ISO剂量的增加，H9c2细胞中相关蛋白的表达水平增加，将每种蛋白质与氧化激活的补体系统联系起来，表明ISO可能通过ROS/P53/S100-A9形成的正反馈环激活C3，进一步激活补体系统并加重心肌损伤。随后通过ShRNA干扰技术，分别清除ROS，抑制P53、S100-A9来证明了我们的假设，即ROS/P53/S100-A9可以形成一个微妙的正反馈通路，在ISO诱导的心肌损伤期间与C3起作用，激活补体系统，从而加重心肌损伤。（4）我们给予大鼠一定量的ISO，HE染色结果和血清心肌酶谱结果显示大鼠产生心肌损伤，给药组动物注射ISO后又给予一定量的柴胡多糖，结果显示给予柴胡多糖，补体相关蛋白C3、C5、Caspase-3表达降低，心肌损伤程度减轻，说明柴胡多糖可以减轻心肌损伤。本专利技术主要考察了调控激活的补体系统在心肌损伤治疗中的应用，重点解决了心肌损伤治疗中的应用，本专利技术创新点是将柴胡多糖应用到心肌损伤的防治中，通过抑制ROS/P53/S100-A9通路激活的补体系统，减轻心肌损伤。这为临床心肌损伤的治疗提供新策略。本专利技术的试验效果如下：目前，研究表明体内交感神经过度激活，儿茶酚胺类物质持续激动肾上腺素受体可以引起心血管疾病。异丙肾上腺素非选择性激动β肾上腺素受体，已广泛用于诱导建立心肌损伤模型,研究表明ISO诱导心肌损伤的机制与炎症、氧化应激、细胞凋亡有关。本专利技术从ROS/P53/S100-A9正反馈激活补体系统从而加剧心肌损伤的机制出发，发现抑制补体系统过度激活的柴胡多糖在心肌损伤中的应用。结论：本专利技术发现ROS/P53/S100-A9可以形成一个微妙的正反馈通路，在心肌损伤期间与C3起作用,激活下游补体蛋白的表达，激活补体系统从而加剧心肌损伤。抑制过度激活的补体系统可以有效的减轻心肌损伤的程度。柴胡多糖可以抑制补体系统从而减轻心肌损伤，这可以为临床上心肌损伤提供新的治疗方法。附图说明图1：MTT试验检测ISO对H9c2心肌细胞活力和凋亡的影响；a：ISO+NAC/PFT-α细胞增殖抑制率b：ISO+shRNA-S100-A9细胞增殖抑制率；图2：不同剂量ISO下相关靶蛋白影响带图；图3：不同剂量ISO处理H9c2细胞后相关蛋白的表达及ISO引起心肌损伤机制假设图；a：相关靶蛋白表达谱图b：ISO持续βAR氧化激活补体系统引起心肌损伤机制假设图；图4：自由基清除剂NAC对相关靶蛋白表达的影响带图；图5：P53抑制剂PFT-α对相关靶蛋白表达的影响带图；图6：shRNA-S100-A9对相关靶蛋白表达的影响条带图。具体实施方式下面通过具体的实施方案叙述本专利技术。除非特别说明，本专利技术中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本专利技术的范围，本专利技术的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本专利技术实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本专利技术的保护范围。本专利技术所用原料及试剂均有市售。实施例11、动物实验：24只清洁级雄性Wistar大鼠（200±20g），随机分成两组，每组12只，空白组：给药生理盐水(1mL/只)连续腹腔内注射3天，异丙肾上腺素组：给药ISO(5mg/kg)连续腹腔内注射3天。2、生化指标测定：在给予各组大鼠相应的药物后，从腹主动脉取血样。将1毫升全血以3500rpm离心10分钟并储存在-80℃下用于分析生化指标。通本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.柴胡多糖在用于制备治疗心肌损伤药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.柴胡多糖在用于制备治疗心肌损伤药物中的应用。2.柴胡...
【专利技术属性】
技术研发人员：李遇伯，范思邈，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津,12
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