一种基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器及基于该传感器所建立的电化学免疫传感方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器及基于该传感器所建立的电化学免疫传感方法和应用，所述电化学免疫传感器是由基底电极为玻碳电极，其表面依次修饰壳聚糖‑普鲁士蓝纳米复合物、金纳米粒子和肿瘤标志物捕获抗体组成；将该电化学免疫传感器与脲酶功能化硅纳米探针结合即可测定样品中肿瘤标志物的含量；本发明专利技术具有制备工艺简单、可控、稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、成本低等优良分析性能，在临床肿瘤标志物检测领域中具有很好的实用前景。

An electrochemical immunosensor based on Prussian blue and its application

The invention discloses an electrochemical immunosensor based on Prussian blue and an electrochemical immunosensor method and application based on the sensor. The electrochemical immunosensor is composed of a base electrode as a glassy carbon electrode, whose surface is sequentially modified with chitosan-Prussian blue nanocomposite, gold nanoparticles and antibodies captured by tumor markers. The sensor can be combined with urease functionalized silicon nanoprobe to determine the content of tumor markers in samples; the method has excellent analytical properties such as simple preparation process, controllable, stable, high sensitivity, wide linear range and low cost, and has good practical prospects in the field of clinical tumor marker detection.

【技术实现步骤摘要】
一种基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器及基于该传感器所建立的电化学免疫传感方法和应用
本专利技术涉及电化学生物传感
，具体是一种基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器及基于该传感器所建立的电化学免疫传感方法和应用。
技术介绍
肿瘤标志物的准确测定对于癌症早期筛查和临床诊断具有十分重要的意义。与其它方法相比，将高特异性免疫识别反应与各种光、电传感技术相结合发展起来的免疫传感器，由于具有选择性高、样品消耗量小、操作简单、分析速度快等独特优点，近年来在肿瘤标志物检测中得到人们广泛研究和应用。其中，基于电分析化学方法发展起来的电化学免疫传感器由于不需要昂贵的大型仪器，且灵敏度较高，因而在临床诊断领域具有很好的实用前景。传统电化学免疫传感器的制备一般需要十分繁琐的电极界面修饰过程，因而对传感器的重复性造成较大影响。此外，为了满足癌症早期诊断中低丰度肿瘤标志物准确检测的需要，人们通常利用可负载高含量酶标记物的纳米探针对传感器的信号转导及放大作用来提高其分析灵敏度。其中，具有优良催化能力和较低成本的辣根过氧化酶的应用最为普遍。然而，这类纳米探针在电化学信号转导中通常面临着溶解氧电化学还原信号的干扰问题。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器，其特征在于：所述电化学免疫传感器是由基底电极为玻碳电极，其表面依次修饰壳聚糖‑普鲁士蓝纳米复合物、金纳米粒子和肿瘤标志物捕获抗体组成。

【技术特征摘要】
1.一种基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器，其特征在于：所述电化学免疫传感器是由基底电极为玻碳电极，其表面依次修饰壳聚糖-普鲁士蓝纳米复合物、金纳米粒子和肿瘤标志物捕获抗体组成。2.如权利要求1所述的一种基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）壳聚糖-普鲁士蓝纳米复合物的制备向5mL5mg/mL壳聚糖的质量分数为1%醋酸溶液中加入2mL含有50mMFeCl3、50mMK3Fe(CN)6和1.0MKCl的质量分数为0.1%醋酸溶液，混合均匀后升温至95℃，搅拌下反应12h；所得产物经10000rpm离心25min，弃去上清液，再使用质量分数为1%醋酸溶液洗涤后重新分散于5.0mL质量分数为1%醋酸溶液中，即可得到CS-PB纳米复合物；（2）电化学免疫传感器的制备向玻碳电极上滴加5µLCS-PB纳米复合物，室温晾干之后向其表面滴加8µL平均粒径为13nm的金纳米粒子，室温组装8h；用超纯水洗净后，继续滴加3µL0.5mg/mLCEA捕获抗体，4℃静置反应过夜；用pH=6.9的PBS缓冲溶液洗净后，继续滴加8µL含有质量分数为2%BSA的pH=6.9PBS缓冲溶液，室温封闭60min；最后将所得电极用含有质量分数为0.05%吐温-20的pH=6.9PBS缓冲溶液及pH=6.9PBS缓冲溶液交替洗净、晾干，即得。3.一种基于如权利要求1所述的基于普鲁士蓝的电化学免疫传感器所建立的电化学免疫传感方法，其特征在于包括以下步骤：（1）电化学免疫传感器的制备向5mL5mg/mL壳聚糖的质量分数为1%醋酸溶液中加入2mL含有50mMFeCl3、50mMK3Fe(CN)6和1.0MKCl的质量分数为0.1%醋酸溶液，混合均匀后升温至95℃，搅拌下反应12h；所得产物经10000rpm离心25min，弃去上清液，再使用质量分数为1%醋酸溶液洗涤后重新分散于5.0mL质量分数为1%醋酸溶液中，即可得到CS-PB纳米复合物；向玻碳电极上滴加5µLCS-PB纳米复合物，室温晾干之后向其表面滴加8µL平均粒径为13nm的金纳米粒子，室温组装8h；用超纯水洗净后，继续滴加3µL0.5mg/mLCEA捕获抗体，4℃静置反应过夜；用pH=6.9的PBS缓冲溶液洗净后，继续滴加8µL含有质量分数为2%BSA的pH=6.9PBS缓冲溶液，室温封闭60min；最后将所得电极用含有质量分数...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖国松，郭鹏，
申请(专利权)人：湖北师范大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42