一种环介导等温扩增引物及鉴别中药材乌梢蛇真伪的方法技术

本发明专利技术公开了一种环介导等温扩增引物及鉴别中药材乌梢蛇真伪的方法，该引物包括cyt b‑4‑F3、cyt b‑4‑B3、cyt b‑4‑FIP和cyt b‑4‑BIP，其序列依次如SEQ.ID.NO.1‑SEQ.ID.NO.4所示；鉴别中药材乌梢蛇真伪的方法包括以下步骤：提取中药材的基因组DNA作为模板，加入权利要求1所述的引物，65℃温育40min进行LAMP反应，反应结束后，加入核酸染料，日光灯和紫外灯下肉眼观察扩增产物的颜色变化；如若扩增成功则显示绿色，扩增失败，则显示橙色；扩增成功的即为乌梢蛇正品。本方法操作简单、易于掌握、准确性高，可在1小时左右完成鉴别过程。

A Ring-mediated Isothermal Amplification Primer and a Method for Identifying the Truth and False of Chinese Medicine Zaocys dhumnades

The invention discloses a RING-mediated isothermal amplification primer and a method for identifying the authenticity of Chinese medicine Zaocys dhumnades. The primer includes cyt b_4_F3, cyt b_4_B3, cyt b_4_FIP and Cyt b_4_BIP, whose sequence is shown in sequence as SEQ.ID.NO.1_SEQ.ID.NO.4. The method for identifying the authenticity of Chinese medicine Zaocys includes the following steps: extracting the genome of Chinese medicine and adding DNA template The primers mentioned in claim 1 were incubated at 65 ~C for 40 minutes for LAMP reaction. After the reaction, nucleic acid dyes were added, and the color changes of the amplified products were observed by naked eyes under fluorescent and ultraviolet lamps. If the amplification was successful, the products would be green, and if the amplification failed, the products would be orange; if the amplification was successful, the products would be genuine. This method is simple to operate, easy to master, and has high accuracy. It can complete the identification process in about one hour.

【技术实现步骤摘要】
一种环介导等温扩增引物及鉴别中药材乌梢蛇真伪的方法
本专利技术属于中药材的鉴定鉴别领域，具体涉及分子鉴定，特别涉及一种环介导等温扩增引物及鉴别中药材乌梢蛇真伪的方法。
技术介绍
根据市场走访及文献调研可知，中药材乌梢蛇的伪品有灰鼠蛇(Ptyaskorros)、赤链蛇(Dinodonrufozonatum)、水蛇(Hurriarhynchops)、印度眼镜蛇(Najanaja)、孟加拉眼镜蛇(Najakaouthia)、闪鳞蛇(Xenopeltisunicolor)、渔游蛇(Xenochrophispiscator)、银环蛇(Bungarusmulticinctus)、马来环蛇(Bungaruscandidus)、蕲蛇(Agkistrodonacutus)等。目前的鉴别技术中，《中国药典》2015版主要采用性状特征和显微特征进行鉴别，依据为：表面黑褐色或绿黑色，密度菱形鳞片：背鳞行数成双，背中央2-4行鳞片强烈起棱，形成两条纵贯全体的黑线。头盘在中间，扁圆形，眼大而下凹陷，有光泽。上唇鳞8枚，第4、5枚入眶，颊鳞1枚，眼前下鳞1枚，较小，眼后鳞2枚。脊部高耸成屋脊状。腹部剖开边缘向内卷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组环介导等温扩增引物，其特征在于：是cyt b‑4‑F3、cyt b‑4‑B3、cyt b‑4‑FIP和cyt b‑4‑BIP，其序列依次如SEQ.ID.NO.1‑SEQ.ID.NO.4所示。

【技术特征摘要】
1.一组环介导等温扩增引物，其特征在于：是cytb-4-F3、cytb-4-B3、cytb-4-FIP和cytb-4-BIP，其序列依次如SEQ.ID.NO.1-SEQ.ID.NO.4所示。2.一种快速鉴别中药材乌梢蛇真伪的方法，其特征在于包括以下步骤：提取中药材的基因组DNA作为模板，加入权利要求1所述的引物，65℃温育40min进行LAMP反应，反应结束后，加入核酸染料，日光灯和紫外灯下肉眼观察扩增产物的颜色变化；如若扩增成功则显示绿色，扩增失败，则显示橙色；扩增成功的即为乌梢蛇正品。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的中药材包括乌梢蛇正品及其混伪品。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的混伪品是灰鼠蛇、赤链蛇、水蛇、印度眼镜蛇、孟加拉眼镜蛇、闪鳞蛇、渔游蛇、银环蛇、马来环蛇或蕲蛇中的一种以上。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述提取中药材的基因组DNA，是使用动物基因组DNA提取试剂盒DNAMiniKit，选取无霉变和虫蛀的药材样品30mg，用消毒过的剪刀剪成碎块，置于2mL离心管中；加入180μLBufferATL和20μLproteinaseK，振荡处理20s，56℃水浴至组织完全裂解；短暂离心，以去除离心管盖内沿液体；加入200μLBuf...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹晖，周娜娜，张英，吴孟华，何倾，马志国，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44