一种成骨基因干预功能材料及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种成骨基因干预功能材料，由靶向分子‑脂质体‑siRNA与煅烧骨复合而成，靶向分子‑脂质体‑siRNA由耦合有靶向分子的脂质体包裹siRNA而成；并且公开了成骨基因干预功能材料的制备方法。靶向分子‑脂质体‑siRNA与煅烧骨复合而成的成骨基因干预功能材料与成骨界面亲和，在减少siRNA扩散降解的同时使siRNA定向作用于临近成骨界面的成骨细胞和骨母细胞，进而调节成骨细胞和骨母细胞的功能，提高局部成骨活性，获得优越的骨修复质量。

A Functional Material for Osteogenic Gene Intervention and Its Preparation Method

The invention discloses an osteogenic gene intervention functional material, which is composed of a targeting molecule liposome siRNA and calcined bone, a targeting molecule liposome siRNA is composed of a liposome coupled with a targeting molecule encapsulating siRNA, and a preparation method of the osteogenic gene intervention functional material is disclosed. Targeting molecule Liposome siRNA and calcined bone compounded into osteogenic gene intervention functional materials are compatible with the osteogenic interface. While reducing the diffusion and degradation of siRNA, siRNA directionally acts on osteoblasts and osteoblasts adjacent to the osteogenic interface, thereby regulating the function of osteoblasts and osteoblasts, improving local osteogenic activity and obtaining superior quality of bone repair.

【技术实现步骤摘要】
一种成骨基因干预功能材料及其制备方法
本专利技术涉及医用材料领域，更具体的说是涉及一种成骨基因干预功能材料及其制备方法。
技术介绍
RNA干扰(RNAinterference，RNAi)现象是一种自然存在的基因调控现象，与靶基因转录产物mRNA存在同源互补序列的小分子双链RNA(siRNA)进入细胞后，能在Dicer酶的作用后，特异性地结合并降解该mRNA，从而产生相应的功能表型缺失。人们利用这一作用机制，通过精确设计siRNA实现基因转录后的调控可以最终引导和促进组织再生。骨替代材料在体内扮演着引导骨组织再生的角色，具有调控基因表达作用的siRNA可以赋予骨替代材料在体内对成骨细胞系特定基因的精确调控能力，进而构建成一种全新意义的基因功能材料。然而，由于体液内广泛存在RNA降解酶，可以在短时间内破坏siRNA的结构完整性，使其迅速灭活、彻底降解，因此，siRNA进入体内之后，通常难以保证汇聚在靶组织局部发挥治疗作用；siRNA表面的负电荷也会对其通过细胞膜结构造成影响；此外，siRNA所接触的组织细胞都将可能是它的靶细胞，在这种情况下没有相应的mRNA被沉默，siRNA只能被RNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种成骨基因干预功能材料，其特征在于，由靶向分子‑脂质体‑siRNA与煅烧骨复合而成；所述靶向分子‑脂质体‑siRNA由耦合有靶向分子的脂质体包裹siRNA而成；所述靶向分子氨基酸序列为DSSDSSDSSDSSDSSDSS，SEQ ID NO：1；C端修饰C5H8NO3S；所述siRNA正义链：5’‑GGACUUGGYAGCAAGGAAA‑3’，SEQ ID NO：2；5’端FAM荧光修饰，3’端修饰dTdT；所述siRNA反义链：5’‑UUUCCUUGCUACCAAGUCC‑3’，SEQ ID NO：3；5’端FAM荧光修饰，3’端修饰dTdT。

【技术特征摘要】
1.一种成骨基因干预功能材料，其特征在于，由靶向分子-脂质体-siRNA与煅烧骨复合而成；所述靶向分子-脂质体-siRNA由耦合有靶向分子的脂质体包裹siRNA而成；所述靶向分子氨基酸序列为DSSDSSDSSDSSDSSDSS，SEQIDNO：1；C端修饰C5H8NO3S；所述siRNA正义链：5’-GGACUUGGYAGCAAGGAAA-3’，SEQIDNO：2；5’端FAM荧光修饰，3’端修饰dTdT；所述siRNA反义链：5’-UUUCCUUGCUACCAAGUCC-3’，SEQIDNO：3；5’端FAM荧光修饰，3’端修饰dTdT。2.根据权利要求1所述的一种成骨基因干预功能材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备脂质体将DOTAP、DOPE、胆固醇、DSPE-mPEG2000和DSPE-PEG2000-MAL溶于氯仿，旋转蒸发仪中干燥成膜；添加PBS水化，过滤膜，得到脂质体；(2)脂质体耦合靶向分子靶向分子与脂质体耦合，冷冻干燥，得到冻干脂质体；(3)耦合有靶向分子的脂质体包裹siRNA冻干脂质体用DEPC水复溶后，添加siRNA进行孵育，滤膜过滤除菌，得到靶向分子-脂质体-siRNA；(4)成骨基因干预功能材料的复合煅烧骨与靶向分子-脂质体-siRNA复合过夜，冷冻干燥，得到冻干煅烧骨；将冻干煅烧骨与基质复合，压制，4℃保存备用。3.根据权利要求2所述的一种成骨基因干预功能材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中DOTAP、DOPE、胆固醇、DSPE-mPEG2000和DSPE-PEG2000-MAL按摩尔比42：15：38：3：2的比例溶于氯仿，旋转蒸发仪中干燥成膜；45-55℃水浴中添加0.01MpH7.4的PBS水化，形成多囊泡结构后，过0.45μm滤膜1次，过0.22μm滤膜2次，得到淡乳白色溶液即为脂质体。4.根据权利要求2所述的一种成骨基因干预功能材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中靶向分子...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵彦涛，衷鸿宾，侯树勋，韩丽伟，胡先同，白玉龙，张看，李利，张春丽，章亚东，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：北京,11