一种靶向复合外泌体及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种靶向复合外泌体及其制备方法，属于医药技术领域。所述方法包括如下步骤：1)采用靶向多肽对外泌体进行靶向修饰，得到膜修饰有靶向多肽的外泌体；2)将膜修饰有靶向多肽的外泌体、药物、纳米四氧化三铁水溶液和电穿孔缓冲液混合，在2～6℃下进行电穿孔处理后，在35～40℃下孵育25～35min，得到靶向复合外泌体。本发明专利技术制备得到的外泌体具有较高的主动靶向能力。

A Targeted Composite Exosome and Its Preparation Method

The invention provides a targeting compound exosome and a preparation method thereof, which belongs to the technical field of medicine. The method includes the following steps: 1) Targeted polypeptide is used to modify the secretion of the target polypeptide to obtain the secretion of the membrane modified with the target polypeptide; 2) Targeted compound exosome is obtained by mixing the membrane modified with the secretion of the target polypeptide, drug, Nano-ferric tetroxide aqueous solution and electroporation buffer solution, after electroporation treatment at 2-6 (?) and incubation at 35-40 (?) C for 25-35 min. \u3002 The exosome prepared by the invention has high active targeting ability.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向复合外泌体及其制备方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种靶向复合外泌体及其制备方法。
技术介绍
外泌体是由细胞的质膜经两次向内凹陷形成多泡体，再与细胞内膜融合，以胞吐的方式释放出来的直径在30-150nm的微囊泡。已被证明几乎所有的人体细胞均可分泌不同性质的外泌体，且广泛分布于各种体液。外泌体作为载体可携带治疗药物或生物活性物质到达病灶，发挥治疗作用。外泌体作为药物载体与传统的人工纳米载体相比，其优势在于：(1)免疫原性低，几乎不会引起免疫反应，更加安全；(2)体积很小，纳米级别的粒径，包载能力强，可以逃过网状内皮系统的捕捉，有效保护承载的药物；(3)具有较强的组织渗透性和穿透生理屏障的能力，能穿过血脑屏障。通过与目标细胞膜融合的方式，将药物释放到细胞质中。(4)外泌体负载药物后可以绕开P-糖蛋白，会显著降低药物进入细胞后的外排作用。外泌体作为载体虽然有很多优点，但也有限制其应用的不足之处，比如：外泌体缺乏对肿瘤细胞或炎细胞的主动靶向能力，虽然纳米级的载体可以利用异常细胞的高通透性和滞留效应到达病灶部位，但是大多数载体需要通过主动靶向来提高病灶部位的摄取。
技术实现思路
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【技术保护点】
1.一种靶向复合外泌体的制备方法，包括如下步骤：1)采用靶向多肽对外泌体进行靶向修饰，得到膜修饰有靶向多肽的外泌体；2)将所述步骤1)的膜修饰有靶向多肽的外泌体、药物、纳米四氧化三铁水溶液和电穿孔缓冲液混合，在2～6℃下进行电穿孔处理后，将得到的靶向复合外泌体初体在35～40℃下孵育25～35min，得到靶向复合外泌体。

【技术特征摘要】
1.一种靶向复合外泌体的制备方法，包括如下步骤：1)采用靶向多肽对外泌体进行靶向修饰，得到膜修饰有靶向多肽的外泌体；2)将所述步骤1)的膜修饰有靶向多肽的外泌体、药物、纳米四氧化三铁水溶液和电穿孔缓冲液混合，在2～6℃下进行电穿孔处理后，将得到的靶向复合外泌体初体在35～40℃下孵育25～35min，得到靶向复合外泌体。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中靶向修饰的方法包括以下步骤：a、将PBS、NHS和4-戊炔酸混合后，调整pH至7.2～7.5，在2～6℃下震荡50～70min，得到第一反应体系；所述PBS、NHS和4-戊炔酸的质量体积比为1mL:35mg:29mg；b、将所述步骤a的第一反应体系与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐混合，在2～6℃下震荡50～70min，得到第二反应体系；所述第二反应体系中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的终浓度为0.3mol/L；c、将所述步骤b的第二反应体系与含有外泌体的PBS溶液混合后，依次进行震荡、超滤，得到膜连接炔键的外泌体；所述第二反应体系与含有外泌体的PBS溶液的体积比为2：75；d、在所述步骤c的膜连接炔键的外泌体中依次加入PBS溶液、无水硫酸铜溶液、L-抗坏血酸溶液、二水合红菲绕啉溶液和含叠氮的多肽，在20～25℃充氮振荡2.5～3.5h，得到膜修饰有靶向多肽的外泌体。3.根据权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡春梅，唐秋莎，贾刚，安艳丽，黄莉莉，
申请(专利权)人：南京市第二医院江苏省传染病医院，南京市公共卫生医疗中心，
类型：发明
国别省市：江苏,32