测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域，具体涉及测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法。本发明专利技术的方法包括以下步骤：配制刺吸式口器昆虫的全人工饲料；将待测生物物质与全人工饲料混合，得到生物物质测定饲料；生物物质测定饲料置于昆虫饲养装置中，饲养刺吸式口器昆虫；从第0天开始记录刺吸式口器昆虫的生长繁育及死亡情况，直至刺吸式口器昆虫全部死亡。本发明专利技术的方法科学的、稳定的、完善可信，可以对刺吸式口器昆虫进行全人工饲料喂养的生物测定。

A Method for Determining the Effects of Biological Substances on the Insects of Puncture-suction Mouth Apparatus

The invention belongs to the field of agricultural biotechnology, in particular to a method for determining the influence of biological substances on puncture-suction mouthpiece insects. The method of the invention comprises the following steps: preparing the artificial feed for piercing-sucking mouthparts insects; mixing the tested biomass with the artificial feed to obtain the bio-material determination feed; placing the bio-material determination feed in the insect feeding device to feed piercing-sucking mouthparts insects; recording the growth, breeding and death of piercing-sucking mouthparts insects from day 0 until the piercing-sucking mouthparts. All the insects died. The method of the invention is scientific, stable, perfect and credible, and can be used for biological determination of puncture-suction mouthpiece insects fed with artificial diet.

【技术实现步骤摘要】
测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法
本专利技术属于农业生物
，具体涉及测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法。
技术介绍
玉米蚜属于刺吸式口器昆虫，其对玉米、水稻及多种禾本科植物造成直接损害，妨碍植株生长，同时还传播多种禾本科谷类病毒。Bt蛋白可以通过昆虫的口器进入昆虫体内，从而有效的杀灭相应的昆虫。近年来，我国开始商业化种植转Bt基因棉，由于作物布局、气候条件的变化以及玉米品种的更替等因素，非靶标昆虫的危害日渐加重。因此，针对非靶标的生物安全性评价体系的测定技术的建立具有重要的经济意义。传统的刺吸式口器昆虫生物测定方法是在室外大田里利用昆虫的主要寄主进行，由于寄主植物的种植季节、种植面积、自身体积以及大田环境等因素的限制，刺吸式口器昆虫的生物安全性评价受到严重制约。现有技术中存在采用半人工饲料体系进行生物测定的方法，但是由于批次间载体的差异性，无法保证连续饲喂过程中体系的稳定性。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的存在室外大田不利于生物安全性评价、半人工饲料体系的不稳定性问题，本专利技术提供一种测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，其具有测定效率高、准确率高的特点。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，包括以下步骤：(1)配制刺吸式口器昆虫的全人工饲料，将所述全人工饲料灭菌；(2)将待测生物物质与步骤(1)得到的全人工饲料混合，得到生物物质测定饲料；(3)将步骤(3)所得的生物物质测定饲料置于昆虫饲养装置中，饲养刺吸式口器昆虫；(4)从第0天开始记录刺吸式口器昆虫的生长繁育及死亡情况，直至刺吸式口器昆虫全部死亡；其中，步骤(3)中的昆虫饲养装置包括饲养壳体，所述饲养壳体的上部具有上开口，所述饲养壳体的下部具有下开口，所述上开口与所述下开口连通形成贯通的通道，所述下开口上覆盖有纱网，所述上开口上覆盖有第一泊拉膜，所述第一泊拉膜上覆盖有第二泊拉膜，所述第一泊拉膜和所述第二泊拉膜之间填充有所述生物物质测定饲料。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述生物物质为生物蛋白Cry1Ab、Cry1Ah或Cry1Ab-Ma。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述全人工饲料中包含以下重量份的原料：丙氨酸50份、精氨酸200份、天冬酰胺150份、天冬氨酸50份、半胱氨酸25份、胱氨酸2.5份、谷氨酸100份、谷氨酰胺300份、甘氨酸10份、组氨酸100份、DL-高丝氨酸400份、丁酸10份、异亮氨酸100份、亮氨酸100份、盐酸赖氨酸100份、蛋氨酸50份、苯丙氨酸50份、脯氨酸50份、丝氨酸50份、苏氨酸100份、色氨酸50份、酪氨酸10份、缬氨酸100份。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述全人工饲料中还包括抗坏血酸10份、生物素0.2份、泛酸钙2.5份、氯化胆碱20份、叶酸0.5份、肌醇25份、烟酸5份、对氨基苯甲酸5份、盐酸吡哆醇1.5份、核磺酸2.5份、盐酸硫胺素1.5份、B120.2份。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述全人工饲料中还包括DL-左旋肉碱10份、硫辛酸2份、K3PO462份、MgCl2·6H2O25份、蔗糖20000份。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述饲养壳体的形状为圆柱形。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述饲养壳体的高度为3.4cm，所述饲养壳体的内径为2.3cm，所述饲养壳体的外径为2.6cm。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述昆虫饲养装置还包括固定环，所述固定环的底面上沿所述固定环的周向设置有插楔；所述饲养壳体的顶面上沿所述饲养壳体的周向开设有插槽，所述插楔与所述插缝相配合。根据本专利技术具体实施方式的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，所述插槽的深度为2～5mm。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了全人工饲料饲养刺吸式口器昆虫过程中检测化学物质对昆虫的影响的方法，能够准确测定具有胃毒、内吸作用的药剂及溶于全人工饲料的化学物质，其适用范围广，测定方法简单、高效，解决了包括玉米蚜在内的刺吸式口器昆虫难于直接接触不同浓度生物物质的问题，能够测定生物物质对玉米蚜的影响。本专利技术提供了一种饲养刺吸式口器昆虫的装置，其结构简单实用，可重复性高，设置紧密、避免所饲养昆虫的逃逸。可以采用不锈钢纱网，材料透气性好，利于昆虫生长取食；饲养壳体可采用透明玻璃材质，透光性好，便于试验操作、观察昆虫的生长情况，同时，保证光周期等昆虫发育必须条件，易于昆虫存活，利于人工饲养繁殖。本专利技术的固定环与饲养壳体配合紧密，能够使第一泊拉膜、第二泊拉膜始终维持一定的张力，便于昆虫取食，同时，还可避免膜的张力过大损伤昆虫的口器；每次固定时，均能保持一定的张力范围，能够维持较好的系统稳定性。附图说明图1为专利技术昆虫饲养装置的结构示意图；图2为本专利技术昆虫饲养装置配置固定环的剖面图；图3显示进行不同实验处理对玉米蚜存活数量的影响情况；其中，1-饲养壳体；2-纱网；3-第一泊拉膜；4-第二泊拉膜；6-生物物质测定饲料；5-固定环；51-插楔；11-插槽。具体实施方式实施例1本专利技术的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，包括以下步骤：(1)配制刺吸式口器昆虫的全人工饲料，将所述全人工饲料灭菌，其中，全人工饲料的配比，如表1所示：表1全人工饲料的100mL水中的成分及配比按照一定顺序，将全人工饲料的成分逐步添加入超纯水中溶解，灭菌后分别添加不同实验组生物物质，然后分装后冻存。(2)将待测生物物质与步骤(1)得到的全人工饲料混合，利用超声溶解生物物质，得到生物物质测定饲料；(3)将步骤(3)所得的生物物质测定饲料置于昆虫饲养装置中，饲养刺吸式口器昆虫；(4)从第0天开始记录刺吸式口器昆虫的生长繁育及死亡情况，直至刺吸式口器昆虫全部死亡。步骤(3)中的昆虫饲养装置，如图1所示，其包括饲养壳体1，所述饲养壳体1的形状为圆柱形。所述饲养壳体高为3.4cm，所述饲养壳体的内径为2.3cm，所述饲养壳体的外径为2.6cm。为了更好的观察和透光，饲养壳体可采用透明的材料。所述饲养壳体具有上开口和下开口，所述上开口与所述下开口连通形成贯通的通道。所述下开口上覆盖有纱网2，所述上开口上覆盖有第一泊拉膜3，所述第一泊拉膜上覆盖有第二泊拉膜4。玉米蚜等昆虫可以在泊拉膜与纱网之间的饲养壳体中自由的活动，且不易逃逸。所述第一泊拉膜和所述第二泊拉膜之间填充有生物物质测定饲料6。用本专利技术的装置进行全人工饲养时，要保证批次之间的重现性需做到第一泊拉膜和第二泊拉膜的张力维持在一定范围内，使昆虫顺利取食而不损伤其口器。因此，第一泊拉膜和第一泊拉膜的厚度为127μm。如图2所示，本专利技术还包括固定环5，所述固定环的底面上沿所述固定环的周向设置有插楔51；所述饲养壳体1的顶面上沿所述饲养壳体的周向开设有插槽11，所述插槽11的深度为2～5mm，所述插楔51与所述插缝11相配合，即插楔51插入到插槽11内，同时利用插楔51将第一泊拉膜3、第二泊拉膜4固定。操作时，将第一泊拉膜、第二泊拉膜覆在饲养壳体上后，将固定环对准饲养壳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)配制刺吸式口器昆虫的全人工饲料，所述全人工饲料灭菌；(2)将待测的生物物质与步骤(1)得到的全人工饲料混合，得到生物物质测定饲料；(3)将步骤(3)所得的生物物质测定饲料置于昆虫饲养装置中，饲养刺吸式口器昆虫；(4)从第0天开始记录刺吸式口器昆虫的生长繁育及死亡情况，直至刺吸式口器昆虫全部死亡；其中，步骤(3)中的昆虫饲养装置包括饲养壳体，所述饲养壳体的上部具有上开口，所述饲养壳体的下部具有下开口，所述上开口与所述下开口连通形成贯通的通道，所述下开口上覆盖有纱网，所述上开口上覆盖有第一泊拉膜，所述第一泊拉膜上覆盖有第二泊拉膜，所述第一泊拉膜和所述第二泊拉膜之间填充有所述生物物质测定饲料。

【技术特征摘要】
1.测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)配制刺吸式口器昆虫的全人工饲料，所述全人工饲料灭菌；(2)将待测的生物物质与步骤(1)得到的全人工饲料混合，得到生物物质测定饲料；(3)将步骤(3)所得的生物物质测定饲料置于昆虫饲养装置中，饲养刺吸式口器昆虫；(4)从第0天开始记录刺吸式口器昆虫的生长繁育及死亡情况，直至刺吸式口器昆虫全部死亡；其中，步骤(3)中的昆虫饲养装置包括饲养壳体，所述饲养壳体的上部具有上开口，所述饲养壳体的下部具有下开口，所述上开口与所述下开口连通形成贯通的通道，所述下开口上覆盖有纱网，所述上开口上覆盖有第一泊拉膜，所述第一泊拉膜上覆盖有第二泊拉膜，所述第一泊拉膜和所述第二泊拉膜之间填充有所述生物物质测定饲料。2.根据权利要求1所述的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，其特征在于，所述生物物质为生物蛋白Cry1Ab、Cry1Ah或Cry1Ab-Ma。3.根据权利要求1所述的测定生物物质对刺吸式口器昆虫影响的方法，其特征在于，所述全人工饲料中包含以下重量份的原料：丙氨酸50份、精氨酸200份、天冬酰胺150份、天冬氨酸50份、半胱氨酸25份、胱氨酸2.5份、谷氨酸100份、谷氨酰胺300份、甘氨酸10份、组氨酸100份、DL-高丝氨酸400份、丁酸10份、异亮氨酸100份、亮氨酸100份、盐酸赖氨酸100份、蛋氨酸50份...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙丹丹，何康来，陈瑜，王振营，白树雄，张天涛，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11