检测猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒制造技术

提供了快速检测猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒，由试剂盒外包装盒、若干个密封在铝箔袋的胶体金检测试纸条、1份盛放在塑料瓶中的稀释液和若干份一次性定量吸管组成。该试剂盒可在10分钟内检测猪是否感染猪繁殖呼吸综合征病毒。与传统技术相比较，优势明显，技术改进明显，特别是针对目前临床上混合感染常见的情况，具有非常广阔的市场前景，可在基层检测和政府监管中发挥重大作用。

Colloidal gold detection kit for detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus

A colloidal gold detection kit for rapid detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus is provided, which consists of a kit outer packing box, a number of colloidal gold samples sealed in aluminum foil bags, 1 diluents filled in plastic bottles and a number of disposable quantitative pipette. The kit can detect pigs infected with porcine reproductive and respiratory syndrome virus within 10 minutes. Compared with traditional technology, it has obvious advantages and obvious technological improvement. Especially for the common clinical mixed infections, it has very broad market prospects and can play an important role in grass-roots detection and government supervision.

【技术实现步骤摘要】
检测猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒
本技术属于动物疫病快速检测领域，涉及一种检测猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒。
技术介绍
猪繁殖呼吸综合征(Porcinerespiratoryandreproductivesyndrome，PRRS)俗称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种猪高度易感的传染病。潜伏期通常为7～14天。PRRSV分离株的毒力差别很大，低毒力的分离株仅能引起猪群亚临床症状的流行或者地方性流行。猪群的免疫状况不同，感染后的临床表现也不同。普通毒力毒株初次感染群临床表现为病猪厌食、精神沉郁、低烧。母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎和仔猪出生后出现咳嗽、气喘、呼吸困难等呼吸系统症状。大体剖检可见肺病灶性实变，发病后期多出现并发或继发感染，其他病原引起的病变，如化脓或纤维素渗出等，此时脾脏、淋巴结肿大。兽医临床中常与猪瘟、圆环病、伪狂犬病等混合感染，引起免疫抑制，影响猪个体免疫抵抗力及猪群生产性能。由于混合感染提高了治疗难度，临床上往往需要先进行鉴别诊断后辨证治疗。传统的病原学诊断技术如病毒分离培养、聚合酶链式反应(PCR)等技术繁琐复杂，仪器设备昂贵，无法在基层应用；快速检测技术如ELISA等又需要酶标仪和实验室环境操作，养殖场现场难以开展检测。因此亟需开发一种能够现场检测的技术和产品，为基层养殖服务。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种检测猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒，该试剂盒可在10分钟内检测猪是否感染猪繁殖呼吸综合征病毒。本技术提供的胶体金检测试剂盒无需昂贵设备，操作简便，无需特殊培训，检测灵敏度高，非常适合基层实验室、养殖场现场检测应用。本技术所提供的胶体金检测试剂盒主要由试剂盒外包装盒、若干个密封在铝箔袋的胶体金检测试纸条、1份盛放在塑料瓶中的稀释液和若干份一次性定量吸管组成。其中胶体金检测试纸条是整个检测反应的载体，由PVC背板(7)、样品垫(1)、金标垫(2)、硝酸纤维素膜(简称为NC膜)(3)、吸水纸(4)、塑料外壳(由底板A和盖板B组成)构成。其连接关系是先将喷涂好检测线(简称为T线)(5)和质控线(简称为C线)(6)硝酸纤维素膜(3)粘贴到PVC背板(7)的相应位置，然后将样品垫(1)，金标垫(2)，吸水纸(4)依次粘贴到PVC背板(7)的相应位置。使金标垫(2)与硝酸纤维素膜(3)部分接触，约1～2mm；使样品垫(1)与金标垫(2)部分接触约2～4mm；使吸水纸(4)与硝酸纤维素膜(3)部分接触，约2～4mm。用切条机将其切成3～4mm宽的小条备用。所述金标垫上喷涂的是猪繁殖呼吸综合征病毒特异性单克隆抗体。所述硝酸纤维素膜上的检测线(简称为T线)和质控线(简称为C线)，其中T线位于靠近金标垫的一端，而C线位于靠近吸水垫的一端，其中T线喷涂的是猪繁殖呼吸综合征病毒特异性多克隆抗体，C线喷涂的是羊抗鼠IgG抗体。试纸条整体呈3mm～4mm宽，盛放于塑料外壳中。所述塑料外壳分为底板A和盖片B两部分，底板A上设置有卡槽(8-1和8-2)和固定柱(9-1、9-2、9-3、9-4、9-5和9-6)6个，每个固定柱上还设置有嵌入孔位；盖板B上设置有加样孔(10)、观察窗(11)、并且盖板底面(B1)设置有6个立柱(12-1、12-2、12-3、12-4、12-5和12-6)，可嵌入底板B上的6个固定柱(9-1、9-2、9-3、9-4、9-5和9-6)上的嵌入孔位中用于固定底板和盖板，形成胶体金试纸条的外壳；盖板B的正面(B2)靠近观察窗(10)的位置还设置有二维码区域(12)，用于胶体金读数仪扫描获取检测试纸条的批次、内置曲线信息等。组装试纸条时可将胶体金试纸条(13)放入底板A的卡槽(8-1和8-2)上和6个立柱(9-1、9-2、9-3、9-4、9-5和9-6)之间，确保试纸条平整、无损；然后将盖板B盖在底板A上，确保盖板B的6个立柱(9-1、9-2、9-3、9-4、9-5和9-6)能嵌入底板A的6个固定柱(9-1、9-2、9-3、9-4、9-5和9-6)的孔位中，还要确保试纸条的样品垫端能在盖板B的加样孔(10)中正常露出、硝酸纤维素膜的T线(5)和C线(6)能在观察窗(11)露出；轻轻压按盖板B，确保卡壳组装紧密，不松开脱落，然后在二维码区域(12)贴上预先印刷好的批次二维码信息。将组装好的胶体金试纸条1个、干燥剂1小袋、一次性定量吸管1支放入铝箔袋，用封口机密封保存备用。密封的胶体金试纸条25条和50mL样本稀释液(0.1mol/LPBS，含有0.5％吐温-20和0.1％十二烷基硫酸钠)及说明书等放入试剂盒外包装盒中，形成完整的试剂盒，密封后避光保存于室温环境。与传统方法相比较，本技术具有以下有益效果：(1)操作简单，无需特殊仪器设备，不需要酶标仪、PCR仪器、移液器等，非常适合于基层检测实验室推广应用。(2)耗时短，整体检测时间10min，检测效率高，血清样本经过简单处理后金可点样检测，方便快捷。(3)检测灵敏度高，成本低，利用猪繁殖呼吸综合征病毒特异性单克隆抗体建立的双抗体夹心法测定猪繁殖呼吸综合征病毒，具有特异性好、灵敏度高的特点，非常适合于鉴别诊断检测。(4)检测结果可定性定量。在有胶体金读数仪的情况下，可以扫描试纸条上的二维码，获取不同批次胶体金试纸条的内置曲线信息，继而测定T线和C线的显色，可以定量及半定量检测抗原。本技术提供的猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒与传统技术相比较，优势明显，技术改进明显，特别是针对目前临床上混合感染常见的情况，具有非常广阔的市场前景，可在基层检测和政府监管中发挥重大作用。附图说明图1本技术胶体金检测试纸条结构。图2本技术胶体金检测试纸条结构纵剖图。图3本技术胶体金检测试纸条塑料外壳底板A示意图。图4本技术胶体金检测试纸条塑料外壳盖板B底面B1示意图。图5本技术胶体金检测试纸条塑料外壳盖板B正面B2示意图。图6本技术胶体金检测试纸条组装示意图。图7本技术胶体金检测试纸条组装完成俯视图。具体实施方式下面结合具体实施方式来进一步描述本技术。本技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚，但这些实施例仅是范例性质，并不对本技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本技术的精神和范围下可以对本技术技术方案的细节和形式进行修改或者替换，但这些修改和替换均落入本技术的保护范围。下述试剂、实验材料，如没有特殊说明，均来源于商品化产品。实施例1.胶体金检测试纸条组分的制备1)胶体金标记猪繁殖呼吸综合征病毒特异性单克隆抗体的制备：取市售的猪繁殖呼吸综合征疫苗免疫Balb/C小鼠，免疫剂量为50μg/只/次，5次免疫后测定血清效价，首次免疫将疫苗与等量弗氏完全佐剂混合乳化，后续免疫使用弗氏不完全佐剂。待血清效价大于1:5000(OD450>1.2)时用75μg/只腹腔注射加强免疫，然后使用常规方法融合细胞，并用猪繁殖呼吸综合征病毒、猪繁殖呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒等进行筛选检测，直至获得能与猪繁殖呼吸综合征病毒特异性反应的单克隆杂交瘤细胞株，继续筛选其中优选的单克隆抗体细胞株，扩大培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒主要由外包装盒、若干个密封在铝箔袋的胶体金检测试纸条、1份盛放在塑料瓶中的稀释液和若干份一次性定量吸管组成，其中：所述胶体金检测试纸条由PVC背板（7）、样品垫（1）、金标垫（2）、硝酸纤维素膜（3）、吸水纸（4）、塑料外壳构成，其连接关系是先将喷涂好检测线（5）和质控线（6）硝酸纤维素膜（3）粘贴到PVC背板（7）的相应位置，然后将样品垫（1），金标垫（2），吸水纸（4）依次粘贴到PVC背板（7）的相应位置；使金标垫（2）与硝酸纤维素膜（3）部分接触，约1~2mm；使样品垫（1）与金标垫（2）部分接触约2~4mm；使吸水纸（4）与硝酸纤维素膜（3）部分接触，约2~4mm，用切条机将其切成3~4mm宽的小条备用；所述金标垫上喷涂的是猪繁殖呼吸综合征病毒特异性单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上喷涂有2条线，检测线和质控线，其中检测线位于靠近金标垫的一端，而质控线线位于靠近吸水垫的一端，检测线喷涂的是猪繁殖呼吸综合征病毒特异性多克隆抗体，质控线喷涂的是羊抗鼠IgG抗体；所述胶体金试纸条整体呈3mm~4mm宽，盛放于塑料外壳中。...

【技术特征摘要】
1.一种检测猪繁殖呼吸综合征病毒的胶体金检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒主要由外包装盒、若干个密封在铝箔袋的胶体金检测试纸条、1份盛放在塑料瓶中的稀释液和若干份一次性定量吸管组成，其中：所述胶体金检测试纸条由PVC背板（7）、样品垫（1）、金标垫（2）、硝酸纤维素膜（3）、吸水纸（4）、塑料外壳构成，其连接关系是先将喷涂好检测线（5）和质控线（6）硝酸纤维素膜（3）粘贴到PVC背板（7）的相应位置，然后将样品垫（1），金标垫（2），吸水纸（4）依次粘贴到PVC背板（7）的相应位置；使金标垫（2）与硝酸纤维素膜（3）部分接触，约1~2mm；使样品垫（1）与金标垫（2）部分接触约2~4mm；使吸水纸（4）与硝酸纤维素膜（3）部分接触，约2~4mm，用切条机将其切成3~4mm宽的小条备用；所述金标垫上喷涂的是猪繁殖呼吸综合征病毒特异性单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上喷涂有2条线，检测线和质控线，其中检测线位于靠近金标垫的一端，而质控线线位于靠近吸水垫的一端，检测线喷涂的是猪繁殖呼吸综合征病毒特异性多克隆抗体，质控线喷涂的是羊抗鼠IgG抗体；所述胶体金试纸条整体呈3mm~4mm宽，盛放于塑料外壳中。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述塑料外壳由底板A、盖板B组成，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵荣茂，吴佳兴，宋辉，魏佳玥，吴迪，
申请(专利权)人：北京纳百生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：北京,11