一种GFP标记白僵菌BbofDH1-5-GFP及其应用制造技术

本发明专利技术是通过基因工程的技术手段获得了GFP标记的白僵菌，并通过四种方法将所述的GFP标记的白僵菌接种于玉米中，然后利用激光扫描共聚焦显微镜在蓝光下进行荧光观察并拍照，本发明专利技术的方法能够准确观测不同接种浓度下，白僵菌孢子在植物组织内的宿存情况，操作简便，省时省力，同时，本发明专利技术为研究虫生真菌在植物中的定殖机理奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种GFP标记白僵菌BbofDH1-5-GFP及其应用
农业生防微生物，所述的生防微生物具体为白僵菌；以及对于虫生真菌在宿主植物中的定殖检测技术。
技术介绍
玉米是我国重要的粮食作物，苗期容易受到蛴螬、金针虫等地下害虫的侵害，因而苗期防虫对于提高玉米产量起到重要的作用。金龟子绿僵菌作为一种重要的昆虫病原真菌，已经开发出多种商品化制剂应用于各种害虫，尤其是地下害虫的生物防治，其中主要是颗粒剂。昆虫病原真菌制剂释放到田间后，其在生态系中的动态及环境安全性一直备受关注。因此，快速准确地鉴别人工释放菌株和自然界发生的菌株对评价真菌制剂的应用效果和生态安全性十分必要。分子标记等技术是鉴定菌株的重要手段，但其操作复杂，耗时较长，难以对菌株进行实时监测。绿色荧光蛋白作为一种重要的报告基因，对病原菌入侵活细胞过程的研究、环境微生物的监测等诸多方面显示了良好的应用前景。在昆虫病原真菌中，利用苯菌灵为筛选标记将绿色荧光蛋白基因转入载体，得到组成型表达载体，并转入金龟子绿僵菌获得成功表达，进而对金龟子绿僵菌侵染昆虫的过程进行了观察研究。利用GFP标记成功地研究了白僵菌芽孢的转化方法；而利用含有GFP的金龟本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种GFP标记的白僵菌，其特征在于，其是以以下方法制备获得的：1)PCR方法获得GFP以及抗性蛋白编码基因；2)PCR方法获得与上述基因可操作连接的DNA元件，所述的元件包括启动子和终止子；3)将上述编码基因与元件通过酶切连接的方式构建入可在真菌中表达的载体中；4)采用原生质体转化的方法将步骤3)获得的载体转染入白僵菌；5)筛选获得阳性克隆。

【技术特征摘要】
1.一种GFP标记的白僵菌，其特征在于，其是以以下方法制备获得的：1)PCR方法获得GFP以及抗性蛋白编码基因；2)PCR方法获得与上述基因可操作连接的DNA元件，所述的元件包括启动子和终止子；3)将上述编码基因与元件通过酶切连接的方式构建入可在真菌中表达的载体中；4)采用原生质体转化的方法将步骤3)获得的载体转染入白僵菌；5)筛选获得阳性克隆。2.如权利要求1所述的GFP标记的白僵菌，其特征在于，所述的可操作连接的DNA元件中的启动子为PgpdA。3.如权利要求1-2任一项所述的GFP标记的白僵菌，所述的终止子为TtrpC。4.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：隋丽，李启云，徐文静，张正坤，路杨，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：吉林,22