一种核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法及试剂盒，属于分子生物学领域。本发明专利技术利用SELEX技术筛选靶分子特异核酸适配体，经偶联到（琼脂）磁珠上，形成靶分子捕捉磁珠，利用核酸配基与配体的分子识别原理，捕捉分子靶蛋白，结合磁分离，从混合物中分离出；再通过加热（或酸和碱等）的方法处理，使靶分子和磁珠有效分离，从而得到纯化靶分子。本发明专利技术可以高效、微量或大量、快速分离纯化蛋白，可作为快速提取高纯度蛋白的平台，对在基因工程中细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达蛋白，发酵液，血清，体液或污水处理等混合液体中的蛋白进行分离纯化，在分子生物学机制研究，及药物学研究和应用具有重要意义。

A Method and Kit for Purification of Expressed Protein in Gene Engineering by Nucleic Acid Adaptor

The invention provides a method and a kit for purifying expressed protein in gene engineering by nucleic acid aptamer, which belongs to the field of molecular biology. The present invention uses SELEX technology to screen target molecule specific nucleic acid adapters, which are coupled to (agar) magnetic beads to form target molecule capturing magnetic beads, captures molecular target proteins based on the molecular recognition principle of nucleic acid ligands and ligands, and separates them from the mixture by magnetic separation, and then separates target molecules and magnetic beads effectively by heating (or acid and alkali, etc.). Purified target molecule was obtained. The present invention can isolate and purify proteins efficiently, trace or in large quantities and quickly. It can be used as a platform for rapid extraction of high purity proteins. It can isolate and purify proteins secreted or expressed in cells of bacteria, yeast, insects and mammals, fermentation broth, serum, body fluid or sewage treatment, etc. in mixed liquids in genetic engineering, study on molecular biological mechanism, and medicines. Research and application are of great significance.

【技术实现步骤摘要】
一种核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法及试剂盒
本专利技术涉及一种核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法，尤其是涉及一种将核酸配基分子识别原理有机结合，建立核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法，本专利技术同时还涉及基于该方法的试剂盒，属于分子生物学领域。
技术介绍
核酸与蛋白质在细胞内相互作用是普遍现象。核酸能折叠形成二级结构和三级结构，这对其与蛋白质相互结合作用非常重要。通过使核苷酸序列多样化而使核酸蛋白质相互作用来筛选特异靶标蛋白，从而可以纯化基因工程中的表达蛋白。SELEX技术被用来分离所选靶标的核苷酸配体，这些配体被称为配基或适配体，意即核酸可以形成一定结构并适配入靶分子的口袋，SELEX技术就是利用该原理分离筛选靶分子配基的方法。SELEX即指数级富集的配体进化系统(SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment，SELEX)，是利用大容量的随机寡核苷酸库文与靶蛋白相互作用，从中筛选出与靶标特异结合的核酸适配体。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速、高效等优点。自Tuerk等首先运用此技术筛选到特异性吸附噬菌体T4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）粗蛋白样品的制备：将基因工程中特定表达蛋白发酵液在4℃、12000r/min离心30min后弃去上清，用Binding Buffer稀释，重悬细胞，冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品；（2）提取靶分子：将粗蛋白样品与捕捉琼脂磁珠以4:1的体积比混合在一起，在37±0.3℃孵育30min，形成磁珠‑靶分子核酸适配体‑靶分子复合物，3×SSC洗涤一次， 0.4mM Binding Buffer洗涤3次，磁分离弃去不结合的发酵液，得到磁珠‑靶分子核酸适配体‑靶分子复合物；（3）靶分子制备：在磁珠‑靶分子适配体‑靶分子复合物...

【技术特征摘要】
1.一种核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）粗蛋白样品的制备：将基因工程中特定表达蛋白发酵液在4℃、12000r/min离心30min后弃去上清，用BindingBuffer稀释，重悬细胞，冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品；（2）提取靶分子：将粗蛋白样品与捕捉琼脂磁珠以4:1的体积比混合在一起，在37±0.3℃孵育30min，形成磁珠-靶分子核酸适配体-靶分子复合物，3×SSC洗涤一次，0.4mMBindingBuffer洗涤3次，磁分离弃去不结合的发酵液，得到磁珠-靶分子核酸适配体-靶分子复合物；（3）靶分子制备：在磁珠-靶分子适配体-靶分子复合物中加入洗脱缓冲液，晃动1min，收集洗脱缓冲液，立即加入pH为8.0、1M的Tris-HCL中和；重复加入洗脱缓冲液洗脱三次，混合三次洗脱中和液，透析除盐，即得纯化的靶分子-表达蛋白。2.如权利要求1所述一种核酸适配体纯化基因工程中表达蛋白的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述靶分子表达蛋白发酵液为细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖世奇，田彩平，袁红霞，魏政丽，毛爱红，
申请(专利权)人：廖世奇，
类型：发明
国别省市：甘肃,62