胡椒碱的一种新型降血脂作用制造技术

本发明专利技术公开了胡椒碱的一种新型降血脂作用。胡椒碱显著性降低荷脂ICR小鼠血清总胆固醇TC，总甘油三酯TG和低密度脂蛋白胆固醇LDL‑C水平并可浓度依赖性增加人THP‑1巨噬细胞的胆固醇流出，特异性上调ABCA1的蛋白水平，且与钙蛋白酶抑制剂calpeptin的作用类似。胡椒碱上调ABCA1的蛋白水平是通过抑制细胞内总钙蛋白酶的活性来实现的。本发明专利技术的有益效果是为胡椒碱作为降血脂类药物或保健食品进行进一步开发提供理论依据。

A New Hypolipidemic Effect of Piperine

The invention discloses a novel hypolipidemic effect of piperine. Piperine significantly decreased the serum TC, TG and LDL C levels of ICR mice, and increased the cholesterol efflux of THP_ 1 macrophages in a concentration-dependent manner. Piperine specifically increased the protein level of ABCA 1, similar to calpeptin, a calpain inhibitor. Piperine up-regulates the protein level of ABCA1 by inhibiting the activity of total intracellular calpain. The beneficial effect of the invention is to provide a theoretical basis for further development of piperine as a hypolipidemic drug or health food.

【技术实现步骤摘要】
胡椒碱的一种新型降血脂作用
本专利技术属于药物
，涉及胡椒碱的一种新型降血脂作用。
技术介绍
高脂血症(Hyperlipoidemia)指血脂水平过高，可引发动脉粥样硬化、冠心病等严重危害人类健康的疾病。高脂血症的主要表现是血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量降低，而总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等脂质含量异常增高，并在动脉内膜上沉积，导致动脉管壁增厚变硬、管腔缩小，使供血器官的血液供应水平下降。伴随着血脂异常尤其是高胆固醇血症等引起的心肌梗死和脑血栓的高发，此类疾病的家庭和社会负担日渐加重，已成为重大的公共卫生问题。传统的降血脂药物主要通过抑制内源性胆固醇的合成(如HMG-CoA还原酶抑制剂)或增加肝脏胆固醇的消耗(如胆汁酸螯合剂)而实现降血脂作用，但是在动脉粥样斑块直接形成的过程中无能为力或作用较小。随着临床医务人员与患者对血脂异常防治的重视程度逐渐提高，快速、疗效确切的降血脂药物的临床需求越来越高，研发新型降血脂药物具有重要的现实意义。胡椒碱是胡椒的主要成分，分子量为285，分子式为C17H19NO3，结构式如下：现代药理学研究表明，胡椒碱具有预防动脉粥样硬化的作用，但是胡椒碱以钙蛋白酶为靶点的降血脂活性尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术揭示了胡椒碱的一种新型降血脂药理作用，即胡椒碱通过抑制钙蛋白酶活性增加胆固醇流出，达到降血脂目的，从而直接抑制动脉粥样斑块的形成。本专利技术的有益效果是为胡椒碱作为降血脂药物或保健类食品进行进一步开发提供理论依据。具体技术方案如下：胡椒碱具有降血脂作用，可显著性降低荷脂ICR小鼠血清总胆固醇(TC)，总甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。进一步，胡椒碱可浓度依赖性增加人THP-1巨噬细胞的胆固醇流出，并对THP-1细胞活力无影响。胡椒碱在动物和细胞水平工作浓度均未见毒性，可制成一切药学可接受口服和非口服制剂形式。进一步，胡椒碱与钙蛋白酶抑制剂calpeptin均可上调ABCA1的蛋白水平，两者的作用具有加和性，说明两者具有类似的作用机制。进一步研究发现胡椒碱对钙蛋白酶的蛋白表达水平无影响，但可特异性抑制钙蛋白酶活性，与calpeptin作用相当，说明胡椒碱是一个钙蛋白酶的活性抑制剂。本专利技术给出了胡椒碱通过抑制钙蛋白酶活性增加胆固醇流出而降低血脂指标的新型降血脂作用，这与临床现用的传统降血脂药物(如他汀类和胆汁酸螯合剂等)作用机制不同，是一种全新的靶向降血脂作用。附图说明图1为胡椒碱降血脂活性示意图，其中，A：血清总TC水平；B：血清总TG水平；C：血清HDL-C水平；D：血清LDL-C水平；图2为胡椒碱调控人THP-1巨噬细胞胆固醇流出示意图；图3为胡椒碱作用下THP-1巨噬细胞活力示意图；图4为胆固醇转运蛋白ABCA1表达水平示意图，其中，A：胡椒碱作用下ABCA1表达水平，其中，吡格列酮为阳性对照；B：胡椒碱与钙蛋白酶抑制剂calpeptin单独与共同作用下ABCA1的表达水平；图5为钙蛋白酶calpain1和calpain2在胡椒碱作用下的表达水平示意图；图6为胡椒碱作用下的总钙蛋白酶活性示意图。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例一：胡椒碱作用下ICR小鼠血清总TC，总TG，HDL-C和LDL-C水平。实验材料：8周龄ICR小鼠购自北京维通利华公司；TC、TG、HDL-C和LDL-C测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；胡椒碱购自SigmaAldrich公司。实验方法：小鼠饲喂高脂饲料(猪油10％，胆固醇3％，猪胆盐0.5％)3周，建立稳定的荷脂小鼠模型。将小鼠随机分为4组，分别为：普通饲料-对照组，普通饲料-胡椒碱组，高脂饲料-对照组和高脂饲料-胡椒碱组。胡椒碱组给予25mg/kg的胡椒碱，对照组给予相应溶剂。饲喂小鼠8周后，处死并取血清。分别测定血清中总TC,总TG，HDL-C和LDL-C水平。实验结果：胡椒碱可显著性降低血清TC，TG和LDL-C的水平，对HDL-C的水平无影响，参见图1。实施例二：胡椒碱调控THP-1巨噬细胞胆固醇流出。实验材料：THP-1单核细胞购自国家实验细胞资源共享服务平台(北京总部)；NBD-胆固醇购自上海爱必信公司；PMA购于SigmaAldrich公司。实验方法：取对数生长期的THP-1单核细胞，计数后将浓度为0.2×106个/mL的细胞接种于24孔板上，细胞用200nMPMA培养使之分化成为巨噬细胞。72h后，将RPMI-1640细胞培养液去除，按对照组(溶剂)、阳性对照组(吡格列酮)、给药组(胡椒碱5，10，25，50，100μM)等不同的实验分组给药。同时，将细胞用NBD-胆固醇标记。培养24h后，去除培养液并将细胞分为两组(空白组和apoA1组)，二次给药，继续培养6小时后分别测定细胞内外的荧光强度。按下述公式进行apoA1介导的胆固醇流出的计算。实验结果：胡椒碱可浓度依赖性地增加THP-1巨噬细胞胆固醇流出，经计算，其半数有效浓度EC50约为37μM，参见图2。实施例三：胡椒碱对人THP-1巨噬细胞的细胞活力的影响。实验材料：刃天青和毛地黄皂苷购于SigmaAldrich公司。实验方法：将浓度为0.2×106个/mL的对数生长期THP-1单核细胞接种于96孔板上，在200nMPMA诱导下培养72h分化成为巨噬细胞。将RPMI-1640细胞培养液去除，按对照组(溶剂)、阳性对照组(毛地黄皂苷50μg/mL)、给药组(胡椒碱50和100μM)等不同的实验分组给药。培养24h后，去除培养液并用0.1％的刃天青继续培养4h后测定各孔中的吸收度。实验结果：胡椒碱在工作浓度(50和100μM)均不影响人THP-1巨噬细胞的活力，对细胞没有毒性，预示其为低毒、安全、有效的活性化合物，参见图3。实施例四：胡椒碱与钙蛋白酶抑制剂calpeptin对胆固醇转运蛋白ABCA1表达的影响。实验材料：ABCA1抗体购自Novus公司，calpeptin购自SigmaAldrich公司。实验方法：取对数生长期的THP-1单核细胞，计数后将浓度为0.2×106个/mL的细胞接种于6孔板上，细胞用200nMPMA培养72h分化成为巨噬细胞。按对照组(溶剂)、阳性对照组(吡格列酮)、胡椒碱组、calpeptin组和胡椒碱+calpeptin组等不同的实验分组给药。细胞培养24h后，以4℃的PBS洗两次，加入NP40细胞裂解液180μL/孔。30min后收集裂解液，离心取上清，测定蛋白浓度。经计算，取20μg蛋白用于聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜至硝酸纤维素薄膜，5％脱脂牛奶封闭1h，1：1000加入一抗4℃孵育过夜，洗3次，每次15min，加二抗1：1000室温孵育1h，洗3次，每次15min，化学发光检测蛋白条带。实验结果：胡椒碱可显著性增加转运蛋白ABCA1的水平，钙蛋白酶抑制剂calpeptin也能显著性上调ABCA1蛋白水平，两者的作用具有加和性，参见图4。实施例五：胡椒碱作用下钙蛋白酶calpain1和calpain2的表达。实验材料：Calpain抗体购自Invitrogen公司。实验方法：将对数生长期的THP-1单核细胞0.2×106个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.胡椒碱具有降血脂的药理学活性。

【技术特征摘要】
1.胡椒碱具有降血脂的药理学活性。2.按照权利要求1所述胡椒碱具有降血脂的药理活性，其特征在于：所述胡椒碱显著性降低荷脂ICR小鼠血清总胆固醇TC，总甘油三酯TG和低密度脂蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：王李梅，王克威，侯兴明，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东,37