一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置及检测方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种基于磁性氧化铁纳米粒子信号放大检测天蚕素B装置及方法，包括以下步骤：1）将上玻片及下玻片浸泡，然后冲洗后吹干；2）将上玻片浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片浸泡，然后冲洗后吹干；3）将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并温育，再冲洗后吹干；4）将待检测的纳米金复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再温育，然后冲洗后吹干；5）将上玻片放置于下玻片上，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后观察液晶池光学信号的颜色及亮度。该方法能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。

A device for detecting cecropin B with magnetic iron oxide nanoparticles as signal amplifier and its detection method

The invention discloses a device and method for detecting cecropin B based on magnetic iron oxide nanoparticle signal amplification, which comprises the following steps: 1) soaking the upper glass and the lower glass, then rinsing and drying; 2) soaking the upper glass, then rinsing and drying; soaking the lower glass, then rinsing and drying; 3) adding cecropin B antibody solution to the surface of the lower glass, and incubating it warmly. 4) Drop the nano-gold composite cecropin B solution onto the lower slide, incubate it, then rinse it and dry it; 5) Place the upper slide on the lower slide, and then inject the liquid crystal 5CB from the opening into the convex cavity, so that the liquid crystal 5CB fills the whole convex cavity, then cools it to room temperature to obtain the liquid crystal cell, and then observe the optical properties of the liquid crystal cell. The color and brightness of the signal. This method can detect cecropin B with low cost, high sensitivity, less impact on objective environment and fast detection speed.

【技术实现步骤摘要】
一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置及检测方法
本专利技术属于抗菌肽检测
，涉及一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置及检测方法。
技术介绍
Fe3O4纳米微粒是一种具有磁性的特殊纳米材料，具有良好的生物相容性、超顺磁性、低毒性等优点，现已被应用于药物载体、磁共振成像、生物分离等领域。王金玉等以磁性氧化铁为载体成功构建MDR1反义探针；鲍洁等利用靶向表皮生长因子受体的抗体与磁性氧化铁纳米颗粒结合，制备的表皮生长因子受体抗体-磁性氧化铁纳米颗粒造影剂可用于对肝癌细胞进行显像。刘益宏利用共沉淀法制备的磁性氧化铁成功用于搭载阿霉素，可用于对肿瘤的治疗。天蚕素是最早被发现和研究的一种阳离子抗菌肽。天蚕素B对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌均具有很强的杀伤力，而对真菌和真核细胞没有毒，而在动植物抗病基因工程、植物育种、生物饲料添加剂等领域有着巨大的潜在应用价值。然而，现有的检测手段，现有多肽检测方法有电位滴定法、高效液相色谱法等，电位滴定法滴定终点难以判定，且受客观环境影响大；高效液相色谱法的分析成本高，耗时长。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供了一种以磁性氧化铁为信号放大器检测天蚕素B的方法，该方法能够实现天蚕素B的检测，且检测成本低，检测灵敏度高，受客观环境影响较小，且检测速度快。为达到上述目的，本专利技术所述的以磁性氧化铁为信号放大器检测天蚕素B的方法包括以下步骤：1）将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，然后冲洗后吹干；2）将上玻片浸入DMOAP水溶液中进行浸泡，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于60℃-80℃的乙醇溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，乙醇溶液中APTES与DMOAP体积比为3:1；3）将经过步骤2）处理的下玻片浸泡在含有GA的水溶液中30-50min再冲洗后吹干；4）将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，并放置在37℃-50℃的温度下温育2.5-4h，再冲洗后吹干；5）将待检测的磁性氧化铁复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再放置于28℃-40℃的温度下温育1.5-3h，然后冲洗后吹干；6）将上玻片放置于下玻片上，其中，上玻片与下玻片之间用Mylar聚酯片隔开，Mylar聚酯片的中部开设有凸型空腔，该凸型空腔的一侧开口，再将液晶5CB加热使液晶5CB呈各向同性的液态，然后将液晶5CB从该开口处注入到所述凸型空腔内，使得液晶5CB注满整个凸型空腔，再冷却至室温，得液晶池，然后利用偏光显微镜观察液晶池光学信号的颜色及亮度，以实现对天蚕素B的检测。步骤1）中分别通过乙醇及去离子水进行清洗，然后用N2吹干；步骤2）中上玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；下玻片用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；步骤3）中用超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；步骤4）中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；步骤5）中分别用PBS缓冲液及超纯水进行冲洗，然后用N2吹干；将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃-100℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基。步骤2）中上玻片DMOAP水溶液的体积分数为0.2-0.3%，浸泡时间为30min-50min；下玻片浸泡时间为1-1.5h。步骤3）中下玻片GA水溶液的体积分数为1-2.5%，浸泡时间为30min-50min。步骤4）中，将天蚕素B抗体溶液滴加到下玻片表面，再用洗耳球吹开，然后放置于28℃-40℃的温度下温育2.5-4h。步骤5）中，将待检测的磁性氧化铁复合的天蚕素B溶液滴加到下玻片上，再用洗耳球吹开，然后放置于28℃-40℃的温度下温育1.5-3h。步骤6）中将液晶5CB加热至40℃-50℃，使液晶5CB呈各向同性的液态。上述方法中，下玻片实际上充当了载液基底的作用，步骤1）~4）对下玻片的处理主要在于向下玻片表面固定天蚕素B抗体。换言之，采用其他方式将天蚕素B抗体固定在其他材质的载液基底表面，亦可利用相同的原理实现本专利技术的技术方案。例如，采用一种表面具有活性羟基的光学透明固态聚合物，用APTES/DMOAP与表面具有活性羟基的光学透明固态聚合物反应，形成APTES/DMOAP自组装膜；再令戊二醛GA与APTES/DMOAP自组装膜反应，将GA接在载液基底表面；最后令天蚕素B抗体与GA反应，将天蚕素B抗体接在载液基底表面。其得到的表面固定有天蚕素B抗体的光学透明固态聚合物载片，亦可实现本专利技术的技术方案。因此，本专利技术载液基底的备选材料可为各种光学透明且含有活性羟基的非晶态聚合物、或者经处理在表面产生羟基的无机非晶态透明固体材料等，只要该材料经表面处理固定了天蚕素B抗体，均可实现与本专利技术相同的技术效果，本专利技术不再一一赘述。另外，本专利技术所采用的光折变热致液晶，其原理是利用光折变热致液晶本身的特性，在载液基底表面产生液晶相，利用天蚕素B与天蚕素B抗体特异性结合扰乱液晶分子的垂直取向，从而导致光学信号的颜色及亮度发生变化，从而反映待测物天蚕素B的浓度。本专利技术虽然仅提供了以液晶5CB为光折变热致液晶的实施例，但是本领域技术人员结合本专利技术基本原理及本领域公知常识，容易想到采用其他的光折变热致液晶实现上述功能原理。因此，对光折变热致液晶材料进行等效替换，也落入本专利技术的保护范围。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术所述的以磁性氧化铁为信号放大器检测天蚕素B的方法在具体操作时，利用3-氨丙基三乙氧基硅烷/N,N-二甲基-N-十八烷基(3-[三甲氧基硅烷]丙基)与APTES及DMOAP混合自组装对下玻片表面进行修饰，然后利用GA中的醛基与天蚕素B抗体中的氨基反应，将天蚕素B抗体固定在下玻片上，最后利用天蚕素B与天蚕素B抗体特异性结合扰乱液晶分子的垂直取向，从而导致光学信号的颜色及亮度发生变化，以实现对天蚕素B的检测，检测速度快，检测灵敏度高，并且检测成本低，受客观环境影响较小。附图说明图1为实施例一得到的照片图；图2为实施例二得到的照片图；图3为实施例三得到的照片图；图4为实施例四得到的照片图；图5为实施例五得到的照片图；图6为实施例六得到的照片图；图7为实施例七得到的照片图；图8为实施例八得到的照片图；图9为实施例九得到的照片图；图10为实施例十得到的照片图；图11为实施例十一得到的照片图；图12为实施例十二得到的照片图；图13为本专利技术的检测装置的示意图。图中：1、偏光显微镜；2、液晶池盖片；3、载液基底；4、载液区。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做进一步详细描述：实施例一至四空白检测装置及偏光检测实施例一1）将玻片切割为上玻片及下玻片，再将上玻片及下玻片用Piranha溶液于80℃的温度下浸泡，使上玻片及下玻片表面产生羟基，然后冲洗后吹干，其中，Piranha溶液中H2SO4与H2O2的体积比为7:3；2）将上玻片浸入DMOAP水溶液中浸泡30min-50min，再冲洗后吹干；同时将下玻片放置于60℃的乙醇溶液中浸泡，然后冲洗后吹干，其中，乙醇溶液中APTES与DMOAP体积比为3:1，DMOAP水溶液的体积分数为0.2%，其中，APTES的体积分数为3%，DMOAP的体积分数为1%；3）将下玻片浸入GA水溶液中浸泡30-50min，再冲洗后吹本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置，其特征在于，包括：载液基底，所述载液基底上固定有天蚕素B抗体；含有磁性氧化铁纳米粒子的试液，用于溶解待测样品、并提供天蚕素B与天蚕素B抗体的反应环境；以及光折变热致液晶，用于反映待测物天蚕素B的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置，其特征在于，包括：载液基底，所述载液基底上固定有天蚕素B抗体；含有磁性氧化铁纳米粒子的试液，用于溶解待测样品、并提供天蚕素B与天蚕素B抗体的反应环境；以及光折变热致液晶，用于反映待测物天蚕素B的浓度。2.根据权利要求1所述的一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置，其特征在于，天蚕素B抗体由包括以下步骤的方法固定在载液基底上：1）用APTES/DMOAP与表面具有活性羟基的载液基底反应，形成APTES/DMOAP自组装膜；2）令戊二醛GA与APTES/DMOAP自组装膜反应，将GA接在载液基底表面；3）令天蚕素B抗体与GA反应，将天蚕素B抗体接在载液基底表面。3.根据权利要求2所述的一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置，其特征在于，具有活性羟基的载液基底为经Piranha溶液处理，在表面产生活性羟基的玻片。4.根据权利要求1所述的一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置，其特征在于，所述载液基底为光学透明载片。5.根据权利要求1所述的一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置，其特征在于，还包括：液晶池盖片，用于与载液基底结合形成用于储存液晶液的空腔。6.根据权利要求5所述的一种以磁性氧化铁纳米粒子为信号放大器检测天蚕素B的装置，其特征在于，所述液晶池盖片为玻...

【专利技术属性】
技术研发人员：栾崇林，徐佳，苏秀霞，张婧，张海宁，霍文静，胡金龙，晏春苗，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44