一种药用野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法技术

本发明专利技术涉及一种药用野生稻带茎尖幼芽超低温保存及再生植株方法，具体的说，涉及一种药用野生稻带茎尖幼芽的超低温保存方法。属植物细胞工程技术领域，超低温保存及再生植株的方法包括如下步骤：1.田间取样及组培体系建立；2.内生菌的检测；3.丛生芽的诱导；4.丛生芽的预培养；5.丛生芽的包埋；6.丛生芽的装载及玻璃化的处理；7.冷冻及解冻洗涤；8.恢复培养。本发明专利技术首次提出对药用野生稻带茎尖幼芽成功进行超低温保存，保存后野生稻恢复生长状况良好。对野生稻及禾本科植物的超低温保存具有很好的参考价值。

A Method of Cryopreservation and Restoration Culture of Stem Tips of Medicinal Wild Rice

The invention relates to a method for ultra-low temperature preservation and plant regeneration of medicinal wild rice with shoot-tip buds, in particular to a method for ultra-low temperature preservation of medicinal wild rice with shoot-tip buds. It belongs to the field of plant cell engineering technology. The methods of cryopreservation and plant regeneration include the following steps: 1. establishment of field sampling and tissue culture system; 2. detection of Endophytic bacteria; 3. induction of cluster buds; 4. pre-culture of cluster buds; 5. embedding of cluster buds; 6. loading and vitrification of cluster buds; 7. freezing and thawing washing; 8. resumption of culture. For the first time, the medicinal wild rice shoots with stem tips were successfully preserved at ultra-low temperature, and the wild rice restored to good growth condition after preservation. It has good reference value for cryopreservation of wild rice and Gramineae plants.

【技术实现步骤摘要】
一种药用野生稻茎尖的超低温保存及恢复培养方法
本专利技术涉及一种药用野生稻茎尖的保存方法，具体的说，涉及一种药用野生稻带茎尖幼芽的超低温保存方法。属植物细胞工程

技术介绍
药用野生稻是原产中国的3种野生稻之一，由于长期生长在恶劣的自然条件下，药用野生稻经受了各种自然灾害和不良环境的自然选择，是一种很稀缺和重要的野生稻种质资源，由于长期处于野生状态，经受各种灾害和环境的自然选择，形成了丰富的变异类型，对水稻病虫害有较强的抗性，对环境有较强的适应性，并具有优质、高产、氮磷高效利用、广亲和及雄性不育等优良基因，是水稻育种和改良的重要遗传资源，具有极高的科学研究价值。当前迅速恶化的环境和不利的气候条件及人类现代急速扩张的经济活动导致了野生稻生境丧失及恶化、栖息地急剧减少；此外野生稻又具有柱头外露、异交结实率较高、种子休眠性强、落粒性强、发芽率低的生物学特性。这些因素使药用野生稻种面临灭绝的危险,对野生稻遗传多样性的保护刻不容缓。目前，对药用野生稻的保护措施主要有就地保护和迁地保护（即以种子保存的种质厍、以种茎保存的种质圃）。植物组织与细胞的培养为植物的种质保存开辟了新的途径。组织培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药用野生稻茎尖的超低温保存方法，包括如下步骤：步骤一.田间取样及组培体系建立：取根状茎，冲去根部附着泥沙， 用1%多菌灵浸泡1小时后，在清水培养10‑20天，取地上部分新萌生的气生芽；常规消毒后接种，每30天继代1次;步骤二.内生菌检测：将组培苗转移到含10 g L‑1葡萄糖和5 g L‑1酵母提取物的培养基中培养7‑10天，选取未污染的组培苗进接种到含BA及NAA的培养基上，每30天继代1次;步骤三.丛生芽诱导：取继代30天的无菌组培苗无菌组培苗，剥取2‑3mm茎尖，放入含TDZ0.5‑5mgL‑1 的MS 培养基中，约5‑7天诱导出2‑3mm的丛生芽；步骤四.丛生芽预培养：将丛生芽...

【技术特征摘要】
1.一种药用野生稻茎尖的超低温保存方法，包括如下步骤：步骤一.田间取样及组培体系建立：取根状茎，冲去根部附着泥沙，用1%多菌灵浸泡1小时后，在清水培养10-20天，取地上部分新萌生的气生芽；常规消毒后接种，每30天继代1次;步骤二.内生菌检测：将组培苗转移到含10gL-1葡萄糖和5gL-1酵母提取物的培养基中培养7-10天，选取未污染的组培苗进接种到含BA及NAA的培养基上，每30天继代1次;步骤三.丛生芽诱导：取继代30天的无菌组培苗无菌组培苗，剥取2-3mm茎尖，放入含TDZ0.5-5mgL-1的MS培养基中，约5-7天诱导出2-3mm的丛生芽；步骤四.丛生芽预培养：将丛生芽带基部转入含蔗糖0.3molL-1及ABA0.5-5mgL-1的培养基上培养1-3天后，转入0.7molL-1及ABA0.5-5mgL-1的培养基上预培养1-3天;步骤五.丛生芽包埋：解剖镜下切取2-3mm的芽，在2-4%的无钙离子海藻酸钠溶液中轻蘸，整齐放在5mm×20mm金属网状装载条上，每条装载条上5-10个芽，将带芽的装载条浸入含有0.1-0.3%氯化钙...

【专利技术属性】
技术研发人员：林田，李天菲，杨华，刘鸿艳，韩静，周莉，魏仕伟，龙萍，罗利军，
申请(专利权)人：上海市农业生物基因中心，
类型：发明
国别省市：上海,31