一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，属于分析测试技术领域，该方法为高效液相色谱法，色谱条件如下：C18色谱柱；柱温：30‑40℃；检测波长：270‑380nm；流动相：浓度为2mmol/L的磷酸溶液与N,N‑二甲基甲酰胺按体积比780‑820:180‑220混合后形成的混合液；泵流量：0.8‑1.2mL/min；进样体积：20μL；运行时间：15‑25min。配制土霉素标准储备溶液、土霉素工作标准品溶液和土霉素供试品溶液，再按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，利用峰面积外标法进行土霉素含量计算。该方法重现性好、准确度高、较宽的线性测试范围及良好耐用性，检测速度及精度明显优于生测法。

【技术实现步骤摘要】
一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法
本专利技术属于分析测试
，具体涉及一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法。
技术介绍
土霉素钙预混剂作为一种饲料添加剂，是土霉素生产菌的全发酵液与适量碳酸钙制成的土霉素钙盐，其活性成分为土霉素。在兽药国家标准中，土霉素钙预混剂含量采用微生物检定法进行测定。实践表明，采用微生物法测定含量有几个弊端：1)方法的影响因素多，对含量测试的准确度有较大的影响；2)方法繁琐，耗时较长，造成工作效率低；3)测试成本较高。这些缺陷，制约着工业化生产土霉素钙预混剂生产进程和质量控制，造成生产效率低，质量控制不稳定。鉴于上述情况，急需一种既能准确可靠检测土霉素钙预混剂含量检测，又能提高检测效率并降低检验成本的方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：1、一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，所述方法为高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱：C18；柱温：30-40℃；检测波长：270-380nm；流动相：浓度为2mmol/L的磷酸溶液与N,N-二甲基甲酰胺按体积比780-820:180-220混合后形成的混合液；泵流量：0.8-1.2mL/min；进样体积：20μL；运行时间：15-25min。优选的，所述高效液相色谱法具体包括如下步骤：(1)配制土霉素标准储备溶液：取土霉素标准品用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制浓度为500μg/mL的土霉素标准储备溶液，备用；(2)配制土霉素工作标准品溶液：以步骤(1)中土霉素标准储备溶液为母液用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制浓度为100μg/mL的土霉素工作标准品溶液，过0.22μm滤膜，备用；(3)配制土霉素供试品溶液：取土霉素钙预混剂样品用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制土霉素供试品溶液，过0.22μm滤膜，备用；所述土霉素供试品溶液中土霉素的理论浓度为0.4-500μg/mL；(4)利用高效液相色谱仪测试：取相同体积的土霉素工作标准品溶液和土霉素供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照权利要求1所述的色谱条件进行高效液相色谱分析；利用峰面积外标法进行含量计算，计算公式如下：公式中：A供：为土霉素供试品溶液图谱中土霉素的峰面积；A工：为土霉素工作标准品溶液图谱中土霉素标准品的峰面积；m标：为土霉素标准储备溶液中土霉素标准品的质量；m供：为土霉素供试品溶液中土霉素钙预混剂样品的质量；N％：为土霉素标准储备溶液中土霉素标准品的质量百分比。优选的，步骤(3)中，所述土霉素供试品溶液中土霉素的理论浓度为100μg/mL。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，该方法为高效液相色谱分析法，不仅大大地提升了检测速度及精度，同时还节约了检验成本，具体为：(1)实现了土霉素含量的快速准确的测定，最长每25min可完成一次数据采集，相比微生物检定法，检测效率提高数百倍，同时大大降低了样品的检验成本。(2)重复性好，连续6次进样测定同一个样品，测得土霉素含量的RSD可达0.05％，而使用微生物检定法测定，一般6次测定的RSD在3％左右。(3)再现性好，由不同检验员、在不同日期使用不同仪器，分别对同一批土霉素钙预混剂样品检测检测6次，检测结果总体RSD可达0.44％，远远小于常规要求的RSD不大于5％的要求。(4)准确度高，通过回收率测试可知，土霉素的回收率可达99.2-100.4％，符合常规要求的回收率95-105％范围。(5)较宽的线性测试范围，土霉素在0.5-250μg/mL的浓度范围内(相当于土霉素钙预混剂中含土霉素0.1-50wt％)具有良好的线性相关性，相关系数可达0.9996。(6)定量限与检出限，土霉素的定量限可达0.07wt％，检出限为0.018wt％，完全满足测定样品的要求。(7)耐用性好：在一定范围内，改变柱温，改变流量，改变流动相比例，改变色谱柱批次进行系统适应性试验，RSD均小于1.0％，柱效，分离度，拖尾因子均符合要求。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：图1为实施例2中土霉素钙预混剂样品的高效液相典型色谱图；图2为本专利技术中土霉素工作标准品溶液的高效液相色谱图；图3为实施例5中土霉素工作标准品溶液在浓度0.5-250μg/mL范围内的线性回归分析曲线。具体实施方式下面将对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。测试过程中所使用的试剂及药品：纯化水(HPLC级)、盐酸(优级纯)、磷酸(优级纯)、N,N-二甲基甲酰胺(色谱纯)；配制2.0mol/L盐酸溶液：量取浓盐酸84mL用纯化水稀释至500mL；配制0.05mol/L盐酸溶液：量取2mol/L盐酸25mL用纯化水稀释至1000mL；配制2mol/L磷酸溶液：量取磷酸135mL用纯化水稀释至1000mL；配制2mmol/L磷酸溶液：取2mol/L磷酸溶液0.8mL，加入纯化水稀释至800mL。配制土霉素标准储备溶液：精密称定土霉素标准品25.0mg，转移至50mL的容量瓶中，用0.05mol/LHCl溶解，并稀释至刻度，摇匀后于冰箱中2-8℃下保存备用；配制土霉素工作标准品溶液：取上述土霉素标准储备溶液5mL于25mL容量瓶中，用0.05mol/LHCl稀释至刻度，配制成土霉素工作标准品溶液，过0.22μm滤膜，备用；土霉素供试品溶液按如下方法配制：取规格为20wt％的土霉素钙预混剂样品，精密称定50mg，转移至100mL的容量瓶中，用0.05mol/L盐酸将样品浸润，然后再用0.05mol/LHCl稀释至刻度，于磁力搅拌器上搅拌30min，过0.22μm滤膜，备用。检测仪器及条件：岛津LC-20A系列及LC-2010CHT型高效液相色谱仪；色谱条件：色谱柱：C18，填料粒径5μm，色谱柱的孔径和长度为4.6×100mm/150mm；柱温：35℃；检测波长：280nm；流动相：浓度为2mmol/L的磷酸溶液与N,N-二甲基甲酰胺按体积比800:200混合后形成的混合液；泵流量：1.00mL/min；进样体积：20μL；运行时间：18min。实施例1系统适应性测试取上述配制的土霉素工作标准品溶液，连续进行5次分析，进行方法的系统适应性测试，即对色谱参数峰面积的重复性(RSD)、柱效(N)、拖尾因子(T)分离度(R)进行测试，测试结果统计于下表1。表1系统适应性参数测试结果统计平行分析峰面积柱效(N)拖尾因子(T)分离度(R)1347585931381.42.82347963031611.42.83346180131701.32.74345191931651.32.75344626931801.32.7平均值346309531631.32.7s14543///RSD％0.42///由表1可知，系统适应性参数测试结果均符合常规要求。实施例2样品重复性测试取上述配制的土霉素工作标准品溶液，按照上述土霉素供试品溶液配制方法以同一批土霉素钙预混剂为样品配制6份土霉素供试品溶液，进行6次测定，均按如下方法进行测试：将相同体积的土霉素工作标准品溶液和土霉素供试品溶液，注入岛津LC-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱：C18；柱温：30‑40℃；检测波长：270‑380nm；流动相：浓度为2mmol/L的磷酸溶液与N,N‑二甲基甲酰胺按体积比780‑820:180‑220混合后形成的混合液；泵流量：0.8‑1.2mL/min；进样体积：20μL；运行时间：15‑25min。

【技术特征摘要】
1.一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱：C18；柱温：30-40℃；检测波长：270-380nm；流动相：浓度为2mmol/L的磷酸溶液与N,N-二甲基甲酰胺按体积比780-820:180-220混合后形成的混合液；泵流量：0.8-1.2mL/min；进样体积：20μL；运行时间：15-25min。2.根据权利要求1所述的一种测定土霉素钙预混剂中土霉素含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法具体包括如下步骤：(1)配制土霉素标准储备溶液：取土霉素标准品用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制浓度为500μg/mL的土霉素标准储备溶液，备用；(2)配制土霉素工作标准品溶液：以步骤(1)中土霉素标准储备溶液为母液用浓度为0.05mol/L的HCl溶液稀释配制浓度为100μg/mL的土霉素工作标准品溶液，过0.22μm滤膜，备用；(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢昌贤，秦定宇，金玲玲，杨晓亚，张艳华，云喜报，刘运添，王鹏飞，
申请(专利权)人：金河生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15