一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1及其克隆方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1及其克隆方法与应用；所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；克隆方法包括烟草叶片cDNA合成：提取烟草叶片总RNA，反转录得到第一链cDNA；NtCIPK1基因的PCR扩增：以烟草叶片cDNA为模板，根据NtCIPK1基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物，并测序。应用为所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1在获得调控烟草钾含量的转基因烟草植株中的应用。本发明专利技术利用CRISPR/CAS9技术对克隆的NtCIPK1基因进行了功能鉴定。烟草NtCIPK1基因的克隆鉴定为调控烟草钾含量提供了新的基因靶标。

【技术实现步骤摘要】
一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1及其克隆方法与应用
本专利技术属于遗传工程
，具体涉及一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1及其克隆方法与应用。
技术介绍
Ca2+在真核生物信号转导中被称为第二信使，Ca2+信号传导是植物接收外界胁迫后将信息传递给体内的重要方式之一。在植物体内主要有三种接收Ca2+信号的感受器：钙调素（CaM）、钙依赖性蛋白激酶(CDPKs)和钙调素B类似蛋白家族（CBL）。CIPK（CBL-interactingproteinkinase）蛋白是植物特有的Ser/Thr蛋白激酶，属于植物SnRK3蛋白激酶亚家族。CIPKs是CBL特异性的靶蛋白激酶，CBL-CIPKs相互作用形成的网络系统接到了一系列植物对外界非生物胁迫刺激的响应。如，干旱、高盐、ABA等。CIPKs结构上主要包含两大结构域：N端激酶结构域（PKC）和Ｃ端调节结构域。C端调节结构域是CIPKs特有的结构，并且在CIPK家族中相当保守。C端调节结构域为CBL特异接合的NAF结构域和能与PP2C相互作用的PPI结构域。这2个结构域的结构特性使得CIPKs成为一个连接CBL蛋白和PP2C蛋白传导信号本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1，其特征在于所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种烟草蛋白激酶基因NtCIPK1，其特征在于所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。2.根据权利要求1所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1，其特征在于所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1编码的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。3.一种权利要求1或2所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1的克隆方法，其特征在于包括以下步骤：A、烟草叶片cDNA合成：提取烟草根部组织RNA，反转录得到第一链cDNA；B、NtCIPK1基因的PCR扩增：以烟草叶片cDNA为模板，根据NtCIPK1基因序列设计引物，进行PCR扩增，回收和纯化PCR扩增产物；C、纯化产物与载体链接，连接体系与过程如下：4μL纯化产物、1μLsaltsolution、1μLPCR®-BluntⅡ-TOPO（Invitrogen）混匀，25℃，水浴30min；将连接好的载体通过热激转化大肠杆菌DH5a，加液体培养基振荡培养后涂布至含100mg/L卡那霉素的LB平板上过夜培养，挑取菌落进行菌液培养，质粒提取和PCR检测，筛选阳性克隆，对阳性克隆进行测序。4.根据权利要求3所述的烟草蛋白激酶基因NtCIPK1的克隆方法，其特征在于B步骤中所述的引物为：NtCIPK1...

【专利技术属性】
技术研发人员：高玉龙，宋中邦，李梅云，王丙武，焦芳婵，吴兴富，李文正，隋学艺，李永平，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：云南,53