一种针对产苯唑西林酶OXA-48细菌的特异性检测方法技术

本发明专利技术涉及生化分析和耐药细菌检测技术领域，尤其涉及一种针对产苯唑西林酶OXA‑48细菌的特异性检测方法。本发明专利技术提供了利用等温滴定微量热仪记录碳青霉烯酶中D类苯唑西林酶OXA‑48在特定条件下催化碳青霉烯类底物时的实时热谱曲线，并根据该曲线是否具有“双相热谱曲线”特征，快速准确地判断待测细菌样品是否携带OXA‑48酶的信息，即待测细菌样品是否为产OXA‑48酶细菌。经实验证实，本检测方法具有良好的特异性和灵敏度，而且本方法操作简单快速，可在20分钟内准确获得样本检测结果，节省了检测时间，提高了检测效率。因此，本发明专利技术方法的推广应用可满足针对苯唑西林酶OXA‑48的医学研究及临床应用需要。

【技术实现步骤摘要】
一种针对产苯唑西林酶OXA-48细菌的特异性检测方法
本专利技术涉及生化分析和耐药细菌检测
，尤其涉及一种针对产苯唑西林酶OXA-48细菌的特异性检测方法以及其在生物医学中的应用，具体涉及采用等温滴定微量热仪记录苯唑西林酶OXA-48在特定条件下催化碳青霉烯类底物时出现的“双相热谱曲线”特征，并根据该特征的出现与否快速判断待测样品是否产OXA-48酶的特异性分析方法。
技术介绍
碳青霉烯类抗生素自1976年被发现以来，一直是抗菌谱最广、抗菌活性最强的非典型β-内酰胺抗生素，因其具有对β-内酰胺酶稳定以及毒性低等特点，已经成为治疗严重细菌感染最主要的抗菌药物之一。然而，随着临床的大量使用，这类抗生素的疗效正在丧失，许多细菌已经能够通过产碳青霉烯酶水解碳青霉烯类抗生素而使其失活。基于氨基酸序列相似性，碳青霉烯酶被分为两个超家族：以丝氨酸为活性中心的A和D类，以及活性中心需要金属离子辅助的B类。苯唑西林酶OXA-48是近年来发现的一种新的D类碳青霉烯酶，具有一定的碳青霉烯类药物水解活性，该酶在肠杆菌科中报道较多，其活性不能被β-内酰胺酶抑制剂所抑制，因此产此类酶的细菌几乎对所有β-内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对产苯唑西林酶OXA‑48细菌的特异性检测方法，其特征在于：所述检测方法包括下述步骤：(1)将待测细菌样品用包含100mM磷酸、20‑320mM氯离子，pH为7.5的缓冲液配制成浓度为OD600＝4‑20的细菌悬液，然后将该细菌悬液加入等温滴定微量热仪样品池中；(2)向滴定针中加入由上述相同缓冲液溶解配制的碳青霉烯类抗生素溶液；(3)将滴定针中的碳青霉烯类抗生素溶液加入等温滴定微量热仪样品池，检测温度为37℃，抗生素终浓度为20‑800μM，记录样品池中实时热量变化，直至热量变化回到基线，即所有碳青霉烯类抗生素被水解完全，得到实时热谱曲线；(4)根据所得到的实时热谱曲线是否具有“双相...

【技术特征摘要】
1.一种针对产苯唑西林酶OXA-48细菌的特异性检测方法，其特征在于：所述检测方法包括下述步骤：(1)将待测细菌样品用包含100mM磷酸、20-320mM氯离子，pH为7.5的缓冲液配制成浓度为OD600＝4-20的细菌悬液，然后将该细菌悬液加入等温滴定微量热仪样品池中；(2)向滴定针中加入由上述相同缓冲液溶解配制的碳青霉烯类抗生素溶液；(3)将滴定针中的碳青霉烯类抗生素溶液加入等温滴定微量热仪样品池，检测温度为37℃，抗生素终浓度为20-800μM，记录样品池中实时热量变化，直至热量变化回到基线，即所有碳青霉烯类抗生素被水解完全，得到实时热谱曲线；(4)根据所得到的实时热谱曲线是否具有“双相热谱曲线”特征，判断待测细菌样品是否携带OXA-48酶的信息。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于第(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：和媛，张烨，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61