蛋白DEPDC1作为诊断三阴乳腺癌的标记物的用途制造技术

本发明专利技术提供了蛋白DEPDC1作为诊断三阴乳腺癌的标记物的用途。本发明专利技术还提供了miR‑26b在制备治疗三阴乳腺癌的药物中的用途。本发明专利技术还提供了miR‑26b在制备抑制DEPDC1mRNA表达的药物中的用途。本发明专利技术发现在三阴乳腺癌组织中，DEPDC1表达明显高于配对的癌旁组织。三阴乳腺癌细胞中过表达DEPDC1可以通过上调FOXM1表达促进细胞生长和肿瘤形成。相反，敲低DEPDC1后显示相反作用。而且，三阴乳腺癌中，miR‑26b作为肿瘤抑制因子能够直接抑制DEPDC1表达并减弱DEPDC1对细胞生长和克隆形成的促进作用。本发明专利技术为三阴乳腺癌的发生发展调控指出了一条新的重要机制。

Application of protein DEPDC1 as a marker for diagnosis of triple negative breast cancer

The present invention provides the use of protein DEPDC1 as a marker for the diagnosis of triple negative breast cancer. The present invention also provides the application of microRNA 26b in the preparation of drugs for the treatment of triple negative breast cancer. The invention also provides the use of microRNA 26b in the preparation of drugs that inhibit DEPDC1 gene expression. The expression of DEPDC1 in triple negative breast cancer tissues is significantly higher than that in matched adjacent tissues. Overexpression of DEPDC1 in triple negative breast cancer cells can promote cell growth and tumorigenesis by up-regulating FOXM1 expression. On the contrary, knocking down DEPDC1 showed the opposite effect. Moreover, in triple negative breast cancer, as a tumor suppressor, microRNA26b can directly inhibit the expression of DEPDC1 and reduce the promotion of DEPDC1 on cell growth and cloning. The invention points out a new important mechanism for the occurrence, development and regulation of triple negative breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
蛋白DEPDC1作为诊断三阴乳腺癌的标记物的用途
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种蛋白质，具体来说是蛋白DEPDC1作为诊断标记物的用途。
技术介绍
乳腺癌（BC）是一种最普遍的癌症，可以根据基因表达谱分为四种不同的类型：LuminalA亚型、LuminalB亚型、HER2过表达型和基底样乳腺癌（BLBC）。三阴性乳腺癌（TNBC）的特点是缺乏ER、PR和HER2表达，属于基底样乳腺癌。TNBC侵袭性高、肿瘤体积和肿瘤负荷较大，相比其他亚型更易发生转移。目前，新发的TNBC诊断率在9%到16%，而年轻女性的发病率明显上升。然而TNBC对目前在临床实践中应用的靶向药物并不敏感，其主要治疗方法仍是化疗。因此，寻找特异性的致癌因素是为实现靶向治疗和改善三阴乳腺癌的临床预后效果而亟待解决的一个问题。DEPDC1即含DEP（Dishevelled和EGL-10、Pleckstrin）结构域的蛋白质1，是在秀丽隐杆线虫乃至哺乳动物等多个物种中的一种高度保守的蛋白（具体信息和氨基酸序列见https://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_001107592.1）。尽管众多报道表明含有DEP结构域的蛋白（散乱和EGL-10，Pleckstrin）可以调控多种细胞功能，包括大量的信号蛋白，DEPDC1的病理生理作用并没有得到完善的研究。自从Kanehira等首次发现膀胱癌的新基因DEPDC1，并报道了其在膀胱癌细胞生长的重要作用，DEPDC1的重要功能及其可能的调控将被进一步阐明。Mi等人发现DEPDC1是一个新的细胞周期相关基因，可调节有丝分裂。他们还发现在其他肿瘤如肝癌、大肠癌和胶质母细胞瘤中，DEPDC1与细胞的生长和凋亡相关，也许是一种新的诊断标志物或预后预测因子。然而，DEPDC1在乳腺癌中的功能知之甚微。三阴乳腺癌的特征是雌激素受体、孕激素受体、HER2基因都是阴性的，该类肿瘤恶性程度比其他亚型更高，目前还没有对其敏感的靶向药物。临床上三阴乳腺癌比其他类型乳腺癌预后更差，至今仍无有效治疗策略。所以，找出参与三阴乳腺癌发展过程中的重要调控因子是非常必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供蛋白DEPDC1作为诊断标记物的用途，所述的这种蛋白DEPDC1作为诊断标记物的用途要解决现有技术中对于诊断、治疗三阴乳腺癌的效果不佳的技术问题。本专利技术提供了蛋白DEPDC1作为诊断三阴乳腺癌的标记物的用途。本专利技术还提供了蛋白DEPDC1作为标记物在制备诊断三阴乳腺癌的试剂中的用途。本专利技术还提供了miR-26b在制备抑制DEPDC1mRNA表达的药物中的用途。本专利技术还提供了miR-26b在制备治疗三阴乳腺癌的药物中的用途。具体的，所述的miR-26b基因序列如SEQIDNO.1所示。具体的，所述的蛋白DEPDC1的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术通过Westernblotting和实时定量PCR检测DEPDC1和miR-26b的表达情况。本专利技术还应用了荧光素酶报告基因检测来确定miR-26b和DEPDC1之间的相互作用，并在体内和体外两个方面都确定了DEPDC1和miR-26b在细胞增殖和肿瘤成瘤方面的作用。本专利技术发现在三阴乳腺癌组织中，DEPDC1表达明显高于配对的癌旁组织。三阴乳腺癌细胞中过表达DEPDC1可以通过上调FOXM1表达促进细胞生长和肿瘤形成。相反，敲低DEPDC1后显示相反作用。而且，三阴乳腺癌中miR-26b作为肿瘤抑制因子能够直接抑制DEPDC1表达并减弱DEPDC1对细胞生长和克隆形成的促进作用。本专利技术的研究结果表明：DEPDC1通常在三阴性乳腺癌中表达上调，它可促进细胞生长和集落形成，是TNBC的致癌因子。通过本专利技术的研究显示，在TNBC中，miR-26b对DEPDC1的负调控。在FOXM1介导下DEPDC1对细胞增殖具有促进作用。这些结果为提高TNBC的治疗疗效提供新的治疗靶点。本专利技术和已有技术相比，其技术效果是积极和明显的。本专利技术的结果显示，miR-26b负性调节的DEPDC1通过上调FOXM1表达，促进细胞增殖和肿瘤形成，为三阴乳腺癌的发生发展调控指出了一条新的重要机制。附图说明图1：DEPDC1在三阴乳腺癌中作为一个促癌因子上调。A和B分别显示了DEPDC1在10对三阴乳腺癌癌组织和配对的非肿瘤组织中的表达情况。C和D分别显示了DEPDC1在33对三阴乳腺癌癌组织和配对的非肿瘤组织中的表达情况。E和F分别显示了在三阴乳腺癌组织中DEPDC1和细胞生长标志物（PCNA和Ki67）的相关性。G和H和I分别显示了在三阴乳腺癌组织中DEPDC1和细胞周期相关基因（CCNA2,、CCNB1和CCNE2）之间的相关性。图2：在MDA-MB-436细胞中构建DEPDC1过表达的细胞系。A:在一系列三阴乳腺癌细胞系中DEPDC1的mRNA表达水平。B和C分别显示了在MDA-MB-436细胞中通过mRNA表达水平（图B）和蛋白表达水平（图C）验证DEPDC1过表达的效率。图3：DEPDC1过表达促进三阴乳腺癌细胞增殖和肿瘤生长。A显示了在MDA-MB-436细胞中DEPDC1过表达导致细胞活力增加。B显示了BrdU嵌入合成的DNA的能力也被过表达DEPDC1所增强。C显示了和对照组相比DEPDC1过表达可以上调PCNA蛋白的表达。D显示了过表达DEPDC1抑制进入G0/G1期细胞的比例，增加进入S期的细胞数目。E显示了DEPDC1过表达促进MDA-MB-436细胞克隆形成。标尺：100微米。F显示了按预定分组从裸鼠分离的代表性肿瘤。G和H分别显示了过表达DEPDC1增加移植肿瘤的体积（图G）和重量（图H）。图4：在MDA-MB-231细胞中应用实时定量PCR和免疫印迹方法验证DEPDC1的敲除效率。A和B分别显示了在MDA-MB-231细胞中用shRNA技术敲除DEPDC1后对mRNA和蛋白表达水平的检测。图5：在三阴乳腺癌细胞中敲除DEPDC1抑制细胞增殖和克隆形成。A显示了敲除DEPDC1显著抑制细胞生长。B显示了在MDA-MB-231细胞中敲除DEPDC1抑制BrdU嵌入合成的DNA中。C显示了敲除DEPDC1后下调PCNA的表达。D显示了敲除DEPDC1抑制细胞周期进程，使更多细胞停留在G0/G1期。E显示了在MDA-MB-231细胞中克隆形成能力在敲除DEPDC1后被减弱。标尺：100微米。F显示了按指定分组从裸鼠中分离的代表性肿瘤。G和H分别显示了敲除DEPDC1后皮下成瘤的体积（图G）和重量（图H）都下降。图6：在三阴乳腺癌细胞中DEPDC1被miR-26b直接下调。A显示了候选的DEPDC1功能调控因子示意图。B显示了三阴乳腺癌组织和配对癌旁组织中miR-26b表达情况。C显示了在相同的三阴乳腺癌组织中miR-26b和DEPDC1表达的相关性。D显示了DEPDC1的3’非转录区miR-26b的潜在结合位点。E显示了荧光素酶报告检测显示miR-26b显著降低野生型3’非转录区质粒的荧光素酶活性，然而突变质粒的荧光素酶活性没有变化。F和G分别显示了在MDA-MB-231细胞中miR-26b抑制DEPDC1的mRNA（图H）和蛋白（图I）表达水平。H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.蛋白DEPDC1作为制备诊断三阴乳腺癌的标记物的用途。

【技术特征摘要】
1.蛋白DEPDC1作为制备诊断三阴乳腺癌的标记物的用途。2.蛋白DEPDC1作为标记物在制备诊断三阴乳腺癌的试剂中的用途...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆劲松，张蕾，马俊，许雅芊，徐曙光，杨凡，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：上海,31