核酸检测试纸、制备方法和检测方法技术

公开了一种核酸检测试纸、制备方法和检测方法，核酸检测试纸包括支撑垫，结合垫、检测垫、吸水垫依次布置在所述支撑垫上，结合垫与检测垫部分重合，吸水垫与检测垫部分重合，对照区经由对照探针溶液加载在检测垫上形成，检测区经由捕获探针溶液加载在检测垫上形成，设在检测垫上的固态可溶盐柱位于结合垫和检测区之间，可溶盐柱经由盐溶液在检测垫加热蒸发以在其孔隙中析出盐结晶形成。

Test paper, preparation method and detection method for nucleic acid detection

The invention discloses a test paper for nucleic acid detection, a preparation method and a detection method. The test paper for nucleic acid detection includes a support pad, which is arranged on the support pad in turn with a pad, a detection pad and a water absorbent pad. The combination pad and the detection pad overlap, and the water absorbent pad overlap with the detection pad part. The control area is formed by loading on the detection pad by a control probe solution, and the detection area is loaded on the detection pad by a capture probe solution. The solid soluble salt column on the testing pad is located between the bonding pad and the testing area. The soluble salt column is heated and evaporated by the salt solution in the testing pad to precipitate salt crystallization in its pore.

【技术实现步骤摘要】
核酸检测试纸、制备方法和检测方法
本专利技术涉及一种生物试纸检测
，特别是一种核酸检测试纸、制备方法和检测方法。
技术介绍
核酸检测是分子生物学领域的研究热点，已广泛应用于临床疾病检测、食品安全和环境污染等领域。传统的核酸检测方法(如PCR)存在操作过程复杂耗时，检测成本较高，需要专门的设备和专业的技术人员等缺点和局限性。近年来，纸基微流控检测技术发展迅速，并开始应用于核酸检测。利用纸基微流控技术进行核酸检测操作简单、检测快速、成本低廉且携带方便，受到人们的关注和重视。然而，目前基于核酸的纸基检测方法仍存在检测灵敏度不高的问题，难以达到临床检测要求，极大程度上限制了这种方法的应用和普及。因此，增强基于核酸的试纸检测信号，提高其检测灵敏度，对于促进该检测方法的实际应用，发挥其潜在应用价值具有十分重要的意义。为增强侧流试纸检测信号，国内外学者进行了多方面的研究，包括增强显色颗粒的光学性质、减缓液体流速、转换显色信号等方法。例如，将纳米金显色颗粒结合或聚集到一起，形成较大的纳米金团聚体，增大试纸检测线的显色强度；在单个纳米金颗粒表面吸附金或银金属颗粒，从而增加单个纳米金颗粒的尺寸和光学强度，最终实现检测信号的提高；在单个纳米金颗粒表面修饰酶类，利用酶促反应产生的颜色变化增强检测信号。但这些方法实验过程较复杂，稳定性不高，难以应用于临床实践。增强侧流试纸检测信号的另一个方法是有效控制检测过程中液体的流速，已有学者通过改变试纸的几何形状、在试纸中增加疏水性障碍或改变试纸的亲疏水性等方法延缓液体流速，增加试剂的反应时间，增强试纸的检测信号。然而，这些方法大多制造过程复杂、批量生产差异大、稳定性不高。另外，研究者利用纳米金的光热效应将光信号转换成温度信号、利用上转换纳米颗粒在激发状态下发出的荧光来增强检测灵敏度，但这些方法均需要额外的检测或激发装置，不利于集成、生产和临床应用。在
技术介绍
部分中公开的上述信息仅仅用于增强对本专利技术背景的理解，因此可能包含不构成在本国中本领域普通技术人员公知的现有技术的信息。
技术实现思路
为解决上述现有技术的不足之处，本专利技术提供一种核酸检测试纸、制备方法和检测方法，显著提高其检测灵敏度，操作简单，成本低廉，适用性强，达到快速、高效、便捷检测的目的。本专利技术的目的是通过以下技术方案予以实现。本专利技术的一个方面，一种核酸检测试纸包括，支撑垫，结合垫、检测垫、吸水垫依次布置在所述支撑垫上，结合垫与检测垫部分重合，吸水垫与检测垫部分重合，对照区，其经由对照探针溶液加载在检测垫上形成，检测区，其经由捕获探针溶液加载在检测垫上形成，可溶盐柱，设在检测垫上的固态可溶盐柱位于结合垫和检测区之间，可溶盐柱经由盐溶液在检测垫加热蒸发以在其孔隙中析出盐结晶形成。所述的核酸检测试纸中，所述结合垫中包含检测探针-显色颗粒复合物，所述检测探针-显色颗粒复合物经由显色颗粒胶体溶液与检测探针溶液混合反应形成。所述的核酸检测试纸中，所述检测探针溶液由检测探针粉末、醋酸缓冲液、TCEP和超纯水组成，对照探针溶液由对照探针粉末、链霉亲和素溶液、PBS缓冲液和无水乙醇组成，捕获探针溶液由捕获探针粉末、链霉亲和素溶液、PBS缓冲液和无水乙醇组成，所述盐溶液包括SSC缓冲液、氯化钠溶液、柠檬酸钠溶液、醋酸钠溶液、PBS缓冲液和/或碳酸盐缓冲液。所述的核酸检测试纸中，所述SSC缓冲液包括氯化钠和柠檬酸钠。所述的核酸检测试纸中，所述检测垫包括硝酸纤维素膜，显色颗粒胶体溶液为纳米金胶体溶液，所述纳米金颗粒粒径为13nm。所述的核酸检测试纸中，结合垫与检测垫重合2mm，吸水垫与检测垫重合2mm。根据本专利技术的另一方面，一种核酸检测试纸的制备方法包括以下步骤：第一步骤，制备空白试纸条，结合垫、检测垫、吸水垫依次布置在所述支撑垫上，结合垫与检测垫部分重合，吸水垫与检测垫部分重合，然后将其裁剪成空白试纸条；第二步骤，制备显色颗粒胶体溶液，将显色颗粒胶体溶液与检测探针溶液混合反应形成检测探针-显色颗粒复合物，探针-显色颗粒复合物加载到所述空白试纸条的结合垫上；第三步骤，对照探针溶液加载在空白试纸条的检测垫上形成对照区，第四步骤，捕获探针溶液加载在空白试纸条的检测垫上形成检测区，第五步骤，在检测垫上位于结合垫和检测区之间的位置加载盐溶液，加热蒸发以在其孔隙中析出盐结晶形成可溶盐柱。所述的核酸检测试纸的制备方法中，所述检测探针溶液由检测探针粉末、醋酸缓冲液、TCEP和超纯水组成，对照探针溶液由对照探针粉末、链霉亲和素溶液、PBS缓冲液和无水乙醇组成，捕获探针溶液由捕获探针粉末、链霉亲和素溶液、PBS缓冲液和无水乙醇组成，所述盐溶液包括SSC缓冲液、氯化钠溶液、柠檬酸钠溶液、醋酸钠溶液、PBS缓冲液和/或碳酸盐缓冲液。所述的核酸检测试纸的制备方法中，第五步骤，在硝酸纤维素膜上位于结合垫和检测区之间的位置滴加盐溶液，盐溶液渗透硝酸纤维素膜并填充到纤维孔隙中，形成充满盐溶液的柱形区域，其在37℃烘干箱烘干1～3h，盐溶液中的水分蒸发且在硝酸纤维素膜上形成固态的可溶盐柱。根据本专利技术的又一方面，一种利用所述核酸检测试纸的检测方法包括以下步骤：第一步骤，目标物粉末加入SSC缓冲液以形成目标物溶液；第二步骤，所述结合垫浸入目标物溶液预定时间，目标物溶液依次通过检测垫、可溶盐柱、检测区，最后被吸水垫吸收；第三步骤，取出核酸检测试纸，观察对照区和检测区的显色情况，若对照区和检测区同时显色，表明结果为阳性；若检测区未显色，对照区显色，表明结果为阴性；若检测区和对照区均未显色，表明结果不可靠，需重复检测。本专利技术具有以下有益效果：利用盐溶液在试纸硝酸纤维素膜上形成可溶盐柱，在检测过程中通过减缓液体流速，增加反应时间以及加快核酸反应速率两方面的作用增强试纸的检测信号，提高检测灵敏度。该方法操作简单、成本低廉、稳定性好、应用广泛。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够使得本专利技术的技术手段更加清楚明白，达到本领域技术人员可依照说明书的内容予以实施的程度，并且为了能够让本专利技术的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，下面以本专利技术的具体实施方式进行举例说明。附图说明通过阅读下文优选的具体实施方式中的详细描述，本专利技术各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。说明书附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本专利技术的限制。显而易见地，下面描述的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。而且在整个附图中，用相同的附图标记表示相同的部件。在附图中：图1是根据本专利技术一个实施例的核酸检测试纸的结构示意图；图2是根据本专利技术一个实施例的核酸检测试纸的制备方法的步骤示意图；图3是根据本专利技术一个实施例的核酸检测试纸的检测方法的步骤示意图；图4(a)至图4(b)是根据本专利技术一个实施例的核酸检测试纸的检测结果图；图5(a)至图5(b)是根据本专利技术一个实施例的核酸检测试纸的检测结果图。以下结合附图和实施例对本专利技术作进一步的解释。具体实施方式下面将参照附图更详细地描述本专利技术的具体实施例。虽然附图中显示了本专利技术的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸检测试纸，其包括，支撑垫，结合垫、检测垫、吸水垫依次布置在所述支撑垫上，结合垫与检测垫部分重合，吸水垫与检测垫部分重合，对照区，其经由对照探针溶液加载在检测垫上形成，检测区，其经由捕获探针溶液加载在检测垫上形成，可溶盐柱，设在检测垫上的固态可溶盐柱位于结合垫和检测区之间，可溶盐柱经由盐溶液在检测垫加热蒸发以在其孔隙中析出盐结晶形成。

【技术特征摘要】
1.一种核酸检测试纸，其包括，支撑垫，结合垫、检测垫、吸水垫依次布置在所述支撑垫上，结合垫与检测垫部分重合，吸水垫与检测垫部分重合，对照区，其经由对照探针溶液加载在检测垫上形成，检测区，其经由捕获探针溶液加载在检测垫上形成，可溶盐柱，设在检测垫上的固态可溶盐柱位于结合垫和检测区之间，可溶盐柱经由盐溶液在检测垫加热蒸发以在其孔隙中析出盐结晶形成。2.根据权利要求1所述的核酸检测试纸，优选的，其中，所述结合垫中包含检测探针-显色颗粒复合物，所述检测探针-显色颗粒复合物经由显色颗粒胶体溶液与检测探针溶液混合反应形成。3.根据权利要求2所述的核酸检测试纸，其中，所述检测探针溶液由检测探针粉末、醋酸缓冲液、TCEP和超纯水组成，对照探针溶液由对照探针粉末、链霉亲和素溶液、PBS缓冲液和无水乙醇组成，捕获探针溶液由捕获探针粉末、链霉亲和素溶液、PBS缓冲液和无水乙醇组成，所述盐溶液包括SSC缓冲液、氯化钠溶液、柠檬酸钠溶液、醋酸钠溶液、PBS缓冲液和/或碳酸盐缓冲液。4.根据权利要求3所述的核酸检测试纸，其中，所述SSC缓冲液包括氯化钠和柠檬酸钠。5.根据权利要求2所述的核酸检测试纸，其中，所述检测垫包括硝酸纤维素膜，显色颗粒胶体溶液为纳米金胶体溶液，所述纳米金颗粒粒径为13nm。6.根据权利要求1所述的核酸检测试纸，其中，结合垫与检测垫重合2mm，吸水垫与检测垫重合2mm。7.一种核酸检测试纸的制备方法，其包括以下步骤：第一步骤，制备空白试纸条，结合垫、检测垫、吸水垫依次布置在所述支撑垫上，结合垫与检测垫部分重合，吸水垫与检测垫部分重合，然后将其裁剪成空白试纸条；第二步骤，制备显色颗粒胶体溶液，将显色...

【专利技术属性】
技术研发人员：何晓聪，徐峰，杨媛媛，刘智，屈治国，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61