The present application belongs to the technical field of tobacco metabolites, and specifically relates to a patent application for an extraction method for improving the activity of oxidase in tobacco leaf extract. The method is aimed at extracting oxidase from fresh tobacco leaves, including preparation of extract (RIPA, NEB or PBS), pretreatment of tobacco leaves and extraction by solution method. The preliminary results showed that the SOD activity in the extract was improved to 3.7U/ug total protein and 6.3*10 POD activity.
【技术实现步骤摘要】
一种提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法
本申请属于烟草代谢物
,具体涉及一种提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法专利申请事宜。
技术介绍
烟草作为一种较为特殊的经济作物,其产量与品质直接关系到我国国民经济的健康发展。为了研究烟草基因功能,创制新的育种材料,对烟草代谢物进行深入研究和分析显然具有十分重要的意义。SOD是广泛存在于需氧生物细胞内的一族含金属辅助因子的酶,催化O2-的歧化反应,生成H2O和O2,而H2O2在过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)催化下转化为水而得以清除。因此,SOD是生物体抗氧化胁迫的关键酶类,其活性决定了O2-和H2O2的浓度。烟叶生长发育过程中经常会遇到干旱、低温等环境胁迫,在这些胁迫条件下,烟苗内的内源性抗氧化剂的含量会发生显著下降,同时细胞膜透性增大,O2-大量产生,积累膜脂过氧化产物,并随环境胁迫时间的延长而增加。随着膜脂过氧化作用的加剧,活性氧生成与清除机制的失衡,烟苗的生长发育和烟叶品质会产生不可逆转的不良影响。而过氧化物酶(peroxidase,POD)与细胞色素氧化酶是生物体内另外两种与氧化高度相关的生物酶,其中过氧化物酶(peroxidase,POD)能催化脂肪酸、芳香胺和酚类物质的氧化,是木质素合成的关键酶之一,还参与乙烯的生物合成和氧自由基的消除反应。同时,POD与植物的抗病性也有密切的关系。细胞色素氧化酶是一种高等生物呼吸链中的末端氧化酶,其负责催化的将电子从细胞色素C(cytc)传到O2的反应是能量代谢中的主要不可逆步骤,也是线粒体呼吸控制中的主要部位。由于氧化酶类蛋白在植物生 ...
【技术保护点】
1.一种提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法,其特征在于,该方法针对新鲜烟叶中氧化酶的提取,具体包括如下步骤:(1)制备提取液,具体采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS;配方组成为:裂解液RIPA :pH 8.0的Tris‑Cl、50 mM,EDTA、1mM,SDS、0.1%,NaCl、150 mM,NP‑40、1%,PMSF、1 mM;缓冲液NEB: pH 7.5的Hepes、20mM,KCl、40 mM,EDTA、1 mM,PMSF、1 mM;(2)烟叶预处理将栽培烟草8‑12叶期的新鲜烟叶研磨粉碎;(3)溶液法提取在步骤(2)研磨成粉烟叶样品中加入步骤(1)中制备的提取液,震荡混匀后,冰上静置不少于1h;具体用量方面,研磨成粉烟叶样品100mg,提取液用量为500μl~1mL;静置完成后,5000~15000rpm离心不少于20min,保留上清液,即为氧化酶的提取液。
【技术特征摘要】
1.一种提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法,其特征在于,该方法针对新鲜烟叶中氧化酶的提取,具体包括如下步骤:(1)制备提取液,具体采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS;配方组成为:裂解液RIPA:pH8.0的Tris-Cl、50mM,EDTA、1mM,SDS、0.1%,NaCl、150mM,NP-40、1%,PMSF、1mM;缓冲液NEB:pH7.5的Hepes、20mM,KCl、40mM,EDTA、1mM,PMSF、1mM;(2)烟叶预处理将栽培烟草8-12叶期的新鲜烟叶研磨粉碎;(3)溶液法提取在步骤(2)研磨成粉烟叶样品中加入步骤(1)中制备的提取液,震荡混匀后,冰上静置不少于1h;具体用量方面,研磨成粉烟叶样品100mg,提取液用量为500μl~1mL;静置完成后,5000~15000rpm离心不少于20min,保留上清液,即为氧化酶的提取液。2.如权利要求1所述提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法,其特征在于,所述氧化酶指:超氧化物歧化酶、过氧化物酶和细胞色素C氧化酶。3.如权利要求2所述提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法,...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐国云,翟妞,周会娜,张慧,陈千思,刘萍萍,郑庆霞,许亚龙,王晨,李晶,
申请(专利权)人:中国烟草总公司郑州烟草研究院,
类型:发明
国别省市:河南,41
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