一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针制造技术

本发明专利技术公开了一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针，属于分析化学技术领域和食品安全技术领域。本发明专利技术的荧光检测探针是通过将金属离子(包括锌离子、镁离子、铜离子)保护DNA、特异性DNA以及底物DNA与金纳米棒以及上转换纳米粒子相结合得到的；本发明专利技术的荧光检测探针能够同时检测活细胞内三种金属离子(包括锌离子、镁离子、铜离子)，且检测特异性强、灵敏度高、准确度高(检测活细胞内锌离子时，最低检测限为1.2μM/10

A fluorescence probe for detecting metal ions in living cells

The invention discloses a fluorescence detection probe capable of detecting metal ions in living cells, belonging to the technical field of analytical chemistry and food safety. The fluorescence detection probe of the invention is obtained by combining metal ions (including zinc ions, magnesium ions and copper ions) to protect DNA, specific DNA and substrate DNA with gold nanorods and up-conversion nanoparticles; the fluorescence detection probe of the invention can simultaneously detect three metal ions (including zinc ions, magnesium ions and copper ions) in living cells, and has strong specificity and sensitivity for detection. High accuracy and accuracy (the minimum detection limit for zinc ion in living cells is 1.2 umM/10).

【技术实现步骤摘要】
一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针
本专利技术涉及一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针，属于分析化学
和食品安全

技术介绍
生物体中，金属离子普遍参与各种生理过程，例如，镁离子是有关神经肌肉酶的激活剂，同时，也参与细胞增殖和凋亡过程；锌离子水平增高与阿尔兹海默症有关；铜离子在线粒体呼吸链中发挥着重要作用。因此，金属离子对于维持机体的动态平衡有着十分重要的意义。事实上，生物体是一个系统，各种组分(包括金属离子)均在在生物体中协同发挥作用，生物体的各种疾病也是与其体内的多个指标(包括金属离子指标)相关。因此，若能同时对活细胞内多种金属离子进行检测就变得十分有意义。然而，现有的大多数检测金属离子的方法只能同时检测一种金属离子，并且，现有的大多数检测金属离子的方法均存在前处理复杂、耗时、成本高、操作复杂的缺陷。例如，通过ICP-MS的方法检测镁离子，用此方法检测细胞内的镁离子时，除了需要大量的细胞样品外，还有极其复杂的前处理；还有，通过一些化学发光荧光探针和金属离子配位鳌合的方法检测金属离子，由于大多数化学探针是针对一类离子，用此方法检测细胞内的金属离子时，特异性很本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针，其特征在于，是修饰有巯基化DNA4的AuNRs@Pt二聚体、修饰有巯基化DNA7的上转换纳米粒子(UCNPs)，与荧光基因修饰的DNA3、荧光基因修饰的DNA5、荧光淬灭基团TAMRA修饰的DNA6以及DNA8的混合孵育物；所述修饰有巯基化DNA4的AuNRs@Pt二聚体是AuNRs@Pt‑DNA1以及AuNRs@Pt‑DNA2的孵育物；所述DNA1为与DNA2的活性部位互补或部分互补的序列；所述DNA2为锌离子特异性DNA酶；所述DNA3为与DNA2的非活性部位互补或部分互补的序列；所述DNA4为镁/铜离子特异性DNA酶；所述DNA5为与DNA4...

【技术特征摘要】
1.一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针，其特征在于，是修饰有巯基化DNA4的AuNRs@Pt二聚体、修饰有巯基化DNA7的上转换纳米粒子(UCNPs)，与荧光基因修饰的DNA3、荧光基因修饰的DNA5、荧光淬灭基团TAMRA修饰的DNA6以及DNA8的混合孵育物；所述修饰有巯基化DNA4的AuNRs@Pt二聚体是AuNRs@Pt-DNA1以及AuNRs@Pt-DNA2的孵育物；所述DNA1为与DNA2的活性部位互补或部分互补的序列；所述DNA2为锌离子特异性DNA酶；所述DNA3为与DNA2的非活性部位互补或部分互补的序列；所述DNA4为镁/铜离子特异性DNA酶；所述DNA5为与DNA4的活性部位互补或部分互补的序列；所述DNA6为与DNA4的非活性部位互补或部分互补的序列；所述DNA7为与DNA4的非活性部位互补或部分互补的序列；所述DNA8为与DNA4的活性部位互补或部分互补的序列。2.如权利要求1所述的一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针，其特征在于，所述DNA1的核苷酸序列为SEQIDNO.1；所述DNA2的核苷酸序列为SEQIDNO.2；所述DNA3的核苷酸序列为SEQIDNO.3；所述DNA4的核苷酸序列为SEQIDNO.4；所述DNA5的核苷酸序列为SEQIDNO.5；所述DNA6的核苷酸序列为SEQIDNO.6；所述DNA7的核苷酸序列为SEQIDNO.7；所述DNA8的核苷酸序列为SEQIDNO.8。3.如权利要求1或2所述的一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针，其特征在于，所述荧光检测探针的制备方法为将铂包裹的金纳米棒溶液与巯基聚乙二醇溶液混合后进行反应，得到金纳米棒-聚乙二醇复合物溶液；将金纳米棒-聚乙二醇复合物溶液分成两份，将两份金纳米棒-聚乙二醇复合物溶液分别与巯基化的DNA1、巯基化的DNA2混合后进行孵育，得到金纳米棒-聚乙二醇-DNA1复合物(AuNRs@Pt-DNA1)溶液以及金纳米棒-聚乙二醇-DNA2复合物(AuNRs@Pt-DNA2)溶液；将AuNRs@Pt-DNA1溶液以及AuNRs@Pt-DNA2溶液混合并进行反应，反应结束后，再与巯基化的DNA4混合并进行反应，得到修饰有巯基化DNA4的AuNRs@Pt二聚体溶液；将上转换纳米粒子(UCNPs)溶液与Tris-HCl缓冲液混合后，将混合得到的混合液与巯基化的DNA7混合并进行孵育，得到修饰有巯基化DNA7的上转换纳米粒子溶液；将修饰有巯基化DNA4的AuNRs@Pt二聚体溶液与修饰有巯基化DNA7的上转换纳米粒子溶液混合后，将混合得到的混合液与荧光基因修饰的DNA3、DNA5、荧光淬灭基团TAMRA修饰的DNA6以及DNA8混合并进行孵育，得到可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针溶液。4.如权利要求2或3所述的一种可检测活细胞内金属离子的荧光检测探针，其特征在于，所述荧光检测探针的制备方法为将铂包裹的金纳米棒溶液与巯基聚乙二醇溶液混合后进行反应，得到金纳米棒-聚乙二醇复合物溶液A；将金纳米棒-聚乙二醇复合物溶液A离心弃上清后...

【专利技术属性】
技术研发人员：匡华，高锐，胥传来，徐丽广，刘丽强，吴晓玲，宋珊珊，胡拥明，
申请(专利权)人：江南大学，无锡迪腾敏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32