自噬抑制剂在制备增强石蒜碱抗肝癌活性药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了自噬抑制剂在制备增强石蒜碱的抗肝癌活性药物中的应用。实验证明，石蒜碱促进了肝细胞肝癌的自噬；自噬抑制剂和石蒜碱联合用药的肝癌细胞凋亡率比自噬抑制剂单独用药的肝癌细胞凋亡率与石蒜碱单独用药的肝癌细胞凋亡率之和还要高，自噬抑制剂和石蒜碱在抗肝癌方面产生了协同作用，自噬抑制剂增强了石蒜碱的抗肝癌活性。本发明专利技术将在肝癌的治疗中发挥重要作用。

Application of Autophagy Inhibitors in the Preparation of Anti-hepatocellular Carcinoma Drugs Enhancing Lycorine Activity

The invention discloses the application of autophagy inhibitor in preparing Anti-hepatocarcinoma active drugs enhancing lycorine. Experiments show that lycorine promotes autophagy of hepatocellular carcinoma; the apoptotic rate of hepatocellular carcinoma cells treated with autophagy inhibitor and lycorine is higher than that of hepatocellular carcinoma cells treated with autophagy inhibitor alone and that of hepatocellular carcinoma cells treated with lycorine alone. Autophagy inhibitor and lycorine have synergistic effects on anti-hepatocellular carcinoma, and autophagy inhibitor enhances the apoptotic rate of lycorine. Anti-hepatocarcinoma activity. The invention will play an important role in the treatment of liver cancer.

【技术实现步骤摘要】
自噬抑制剂在制备增强石蒜碱抗肝癌活性药物中的应用
本专利技术涉及自噬抑制剂的用途，特别涉及自噬抑制剂在制备增强石蒜碱抗肝癌活性药物中的应用。
技术介绍
肝细胞癌(HCC)是全球最常见的侵袭性肿瘤之一。肝癌是一种高度致命的肿瘤，其中位生存率在诊断后仍保持在1年以下。肝癌是源于慢性肝脏疾病如慢性炎症和肝硬化的异质性疾病。迄今为止，针对肝癌的治疗策略主要包括切除术，移植术，局部消融术和化疗。由于肝癌的早期症状不明显，大多数肝癌患者被诊断为晚期阶段，失去手术机会，及时接受过手术的患者多数仍会发生复发和转移。在化学治疗剂中，索拉非尼是一种小分子多激酶抑制剂，被认为是一种积极的治疗方法，是延长晚期肝癌患者生存期延长的唯一批准的全身药物。然而，索拉非尼治疗晚期肝癌患者的预期寿命仅为8-11个月。在过去几十年中，尽管肝癌患者常规治疗方案取得了显着进展，但由于治疗有限，预后差，复发率高，仍然是全球最致命的恶性肿瘤之一。新的有效和有希望的治疗策略仍然需要在全球范围内进行深入的探索。具有多种生物活性和机制的天然产物通常作为癌症预防和抗癌药物发现的优良药物。已经探索了石蒜碱(结构如图1中a)，一种普通民间药物的活性生物碱，其中包括抗癌，抗病毒，抗疟疾，抗菌和抗炎活性等多种生物活性。尽管石蒜碱的靶点或机制尚未定义，但是石蒜碱的主要生物学活性和低细胞毒性使其成为潜在的临床药物或潜在的潜在药物。例如，它作为有前途的抗癌剂被宫颈癌，白血病，前列腺癌和多发性骨髓瘤所广泛关注。然而，其明确的分子机制目前仍不清楚。自噬(autophagy)是由Ashford和Porter在1962年发现细胞内有“自己吃自己”的现象后提出的，是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体(autophagosome)，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物，以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。自噬的过程如下：1)：细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构，然后不断扩张，被称为Phagophore。2)：Phagophore不断延伸，将胞浆中的任何成分，全部揽入，然后“收口”，成为密闭的球状的autophagosome，即“自噬体”。3)：自噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(这种情况不是必然要发生的)。4)：自噬体与溶酶体融合形成autolysosome，期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解，二者的内容物合为一体，自噬体中的“货物”也被降解，产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中供细胞重新利用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何增强石蒜碱的抗肝癌活性或抗肝癌细胞活性。为了解决以上技术问题，本专利技术提供了自噬抑制剂在制备增强石蒜碱的抗肝癌活性或抗肝癌细胞活性产品(如药物、疫苗、保健品和/或食品)中的应用。上述应用中，所述自噬抑制剂包括抑制自噬体形成的试剂、抑制自噬体与溶酶体融合的试剂和/或抑制溶酶体降解的试剂。本专利技术还提供了自噬抑制剂和石蒜碱在制备抗肝癌或抗肝癌细胞产品(如药物、疫苗、保健品和/或食品)中的应用。本专利技术还提供了石蒜碱在制备促进肝癌自噬的产品(如促进肝癌自噬的试剂)中的应用。上述应用中，所述自噬抑制剂具体可为3-甲基腺嘌呤(3-MA)。上述应用中，所述自噬抑制剂和所述石蒜碱的配比本领域技术人员可根据抗肝癌或抗肝癌细胞的效果确定，如所述自噬抑制剂和所述石蒜碱的配比具体可为3mM所述自噬抑制剂：40μmol石蒜碱。本专利技术还提供了抗肝癌或抗肝癌细胞的产品(如药物、疫苗、保健品和/或食品)，所述产品含有自噬抑制剂和石蒜碱。上述抗肝癌或抗肝癌细胞的产品中，所述自噬抑制剂和所述石蒜碱均可单独包装。上述抗肝癌或抗肝癌细胞的产品中，所述自噬抑制剂和所述石蒜碱的配比本领域技术人员可根据抗肝癌或抗肝癌细胞的效果确定，如所述自噬抑制剂和所述石蒜碱的配比具体可为3mM所述自噬抑制剂：40μmol石蒜碱。上述抗肝癌或抗肝癌细胞的产品中，所述产品的活性成分可为所述自噬抑制剂和所述石蒜碱，所述产品的活性成分还可含有其它成分，所述产品的其它活性成分本领域技术人员可根据抗肝癌效果确定。上述抗肝癌或抗肝癌细胞的产品中，所述产品还可含有载体或赋形剂。所述载体材料包括但不限于水溶性载体材料(如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、有机酸等)、难溶性载体材料(如乙基纤维素、胆固醇硬脂酸酯等)、肠溶性载体材料(如醋酸纤维素酞酸酯和羧甲基纤维素等)。上述抗肝癌或抗肝癌细胞的产品中，所述自噬抑制剂具体可为3-甲基腺嘌呤(3-MA)。上述应用中或上述抗肝癌或抗肝癌细胞的产品中，所述肝癌可为肝细胞肝癌。本申请中，抗肝癌、抗肝癌细胞、抗肝癌活性或抗肝癌细胞活性具体可为促进肝癌细胞凋亡和/或促进肝癌细胞自噬和/或降低肝癌细胞活力。实验证明，石蒜碱促进了肝细胞肝癌的自噬；自噬抑制剂和石蒜碱联合用药的肝癌细胞凋亡率比自噬抑制剂单独用药的肝癌细胞凋亡率与石蒜碱单独用药的肝癌细胞凋亡率之和还要高，自噬抑制剂和石蒜碱在抗肝癌方面产生了协同作用，自噬抑制剂增强了石蒜碱的抗肝癌活性。附图说明图1为石蒜碱抑制了肝细胞肝癌的生长。图1中，a为石蒜碱的结构式；b为细胞活力测定结果；c为单细胞克隆形成测定结果；d-f为异种移植瘤致瘤性检测结果，g为通过Ki67染色进行免疫组化检测肿瘤生长中增殖的相对变化，h为心、肝、脾、肺和肾的HE染色免疫组化检测结果。图2为石蒜碱促进了肝细胞肝癌的自噬。图2中，a为蛋白质印迹分析HepG2和SMMC-7721中p62和LC-3B的表达量；b蛋白质印迹分析HepG2和SMMC-7721中Atg5、Atg7和Atg12的表达量；c为透射电子显微镜分析，d和e为自噬通量分析；f为蛋白质印迹分析肝细胞肝癌中p62和LC-3B的表达量；g为免疫组化检测肝细胞肝癌中LC-3B的表达量。图3为抑制自噬可以进一步促进石蒜碱诱导的肝癌细胞凋亡。图3中，a、c和f为蛋白质印迹分析各处理细胞中p62、LC-3B、CleavedCaspase-3、PARP1/2和Actin表达量。b、d和e为各处理细胞的细胞活力和细胞凋亡率。图3中，a和b的各图片中，从左至右分别为对照处理细胞、石蒜碱单独处理细胞、3-MA单独处理细胞和石蒜碱和3-MA联合处理细胞。c和d的各图片中，从左至右分别为对照siRNA单独处理1细胞、石蒜碱和对照siRNA联合处理1细胞、LC-3B-1单独处理细胞、石蒜碱和LC-3B-1联合处理细胞。e和f的各图片中，从左至右分别为对照siRNA单独处理2细胞、石蒜碱和对照siRNA联合处理2细胞、LC-3B-2单独处理细胞、石蒜碱和LC-3B-2联合处理细胞。图4为石蒜碱通过TCRP1/Akt/mTOR信号通路促进肝癌细胞凋亡和自噬。图4中，a为蛋白质印迹分析HepG2和SMMC-7721中TCRP1蛋白水平；b为实时定量PCR分析HepG2和SMMC-7721中的TCRP1的mRNA水平和蛋白质印迹分析HepG2和SMMC-7721中的TCRP1蛋白水平；c为蛋白质印迹分析结果表明过表达TCRP1显著阻止了石蒜碱对Akt/mTOR通路的抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.自噬抑制剂在制备增强石蒜碱抗肝癌活性产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.自噬抑制剂在制备增强石蒜碱抗肝癌活性产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述自噬抑制剂为3-甲基腺嘌呤。3.自噬抑制剂在制备增强石蒜碱抗肝癌细胞活性产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述自噬抑制剂为3-甲基腺嘌呤。5.自噬抑制剂和石蒜碱在制备抗肝癌或抗肝癌细胞产品中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：于海洋，邱玉玲，王涛，张祎，高秀梅，韩立峰，庞旭，刘二伟，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津,12