一种去除微生物污染的液体及使用方法技术

本发明专利技术公开了一种去除微生物污染的液体及其使用方法，所述液体中含有聚维酮碘、PEG 8000。本发明专利技术所提供的去除微生物污染的液体可以广谱杀灭真菌、细菌、病毒、支原体等微生物污染，而且对细胞没有明显毒害作用；再者，该液体制备简单，制作成本低廉，易于推广同时简便快捷地去除生物样本存放、细胞培养等引起的微生物污染问题。

A liquid for removing microbial contamination and its application

The invention discloses a liquid for removing microbial contamination and a method for using the liquid, which contains povidone iodine and PEG 8000. The liquid for removing microbial contamination provided by the invention can kill microbial contamination such as fungi, bacteria, viruses, mycoplasma and so on in a broad spectrum, and has no obvious toxic effect on cells; furthermore, the liquid has the advantages of simple preparation, low production cost, easy popularization, simple and quick removal of microbial contamination problems caused by biological sample storage, cell culture, etc.

【技术实现步骤摘要】
一种去除微生物污染的液体及使用方法
本专利技术涉及生物化学领域，特别是涉及了一种去除微生物污染的液体及使用方法。
技术介绍
聚维酮碘（PVP-I）是聚乙烯吡咯烷酮（PVP）与碘的复合物，不但保留了碘的强大的杀菌性能，无细菌和病毒的耐药性，而且克服了游离碘难溶于水、不稳定、对皮肤刺激性大和黄染等缺点。这种分子间的络合有效降低了碘的腐蚀性和刺激性。聚维酮碘溶液中碘以低毒性的络合碘存在，其中有80%-90%的络合碘可解聚成游离碘而发挥杀菌效力，是一种广谱的强力杀菌消毒剂，对革兰氏阴性、阳性菌、真菌和病毒具有广谱杀灭作用，适用于手术前洗手、手术术野及注射部位的清洗消毒，阴道粘膜冲洗，感染部位消毒以及医疗器械和环境消毒等。研究还发现，低浓度的PVP-I对细胞没有毒害作用。微生物污染是细胞培养工作的大敌，其中以细菌污染最为常见也最难预防。如何尽早发现污染并成功挽救珍稀细胞系，是许多实验室遇到的难题。对于培养物发生细菌污染的处理，一向被认为应该弃之，但是对独一无二的、无可替代的细胞系还应尽力考虑去除污染和挽救，方法有抗生素除菌法、巨噬细胞吞噬法和动物接种除菌法，其中较常使用的是抗生素冲击法。但抗生素的作用主要是通过抑制细菌细胞壁的合成达到抑制细菌生长的效果，并不能直接杀死细菌，而且抗生素对培养细胞的形态和性状都有一定的影响。还可以往细胞中添加巨噬细胞吞噬细菌，但是巨噬细胞在体外没有其他免疫细胞和抗体等因素的参与下，其吞噬功能是有限的。动物体内接种除菌法是利用动物的免疫系统来消灭污染微生物的方法。但是动物体内接种法容易带入动物体内的病毒。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种去除微生物污染的液体，从而简便快捷地去除生物样本存放、细胞培养等引起的微生物污染问题。本专利技术所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：一种去除微生物污染的液体，所述液体中含有聚维酮碘、PEG8000。在本专利技术中，按质量百分比计，所述聚维酮碘的含量为0.01%-0.08%。在本专利技术中，按质量百分比计，所述PEG8000的含量为0.02%-0.1%。在本专利技术中，所述液体的pH在6.0-8.0之间。在本专利技术中，所述液体中还含有DMSO。按质量百分比计，所述DMSO的含量为3%-5%。在本专利技术中，所述液体还含有碘酸根离子。在本专利技术中，所述液体还含有硫酸镁。所述硫酸镁的浓度为15-25mM。一种去除微生物污染的液体的使用方法，按照1份如任一上述去除微生物污染的液体兑2份水，使用于被污染的细胞中2小时-12小时。本专利技术具有如下有益效果：本专利技术所提供的去除微生物污染的液体可以广谱杀灭真菌、细菌、病毒、支原体等微生物污染，而且对细胞没有明显毒害作用；再者，该液体制备简单，制作成本低廉，易于推广同时简便快捷地去除生物样本存放、细胞培养等引起的微生物污染问题。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。实施例1去除SP2/0骨髓瘤细胞中的细菌污染1.去除微生物污染的液体的配制：取聚维碘酮（阿拉丁试剂）、PEG8000，加入超纯水溶解，调节PH至7.0，定容，用0.22μm滤膜过滤除菌、除杂质，备用。2.往被污染的SP2/0骨髓瘤细胞中加入1/2体积的上述液体，置于5%二氧化碳细胞培养箱中37℃作用2小时；去除上清，加入1640培养基洗涤细胞一次；去掉液体，加入完全培养基继续培养细胞即可。3.表1为单独采用聚维酮碘作为杀菌剂作用于受污染的SP2/0细胞的实效效果。当聚维酮碘浓度为0.03%(特别说明：本专利技术中涉及所有百分数如无特别说明，则均为质量百分比)时，杀菌效果适中，而且细胞活性最佳。表1聚维酮碘浓度对于杀菌及细胞的影响聚维酮碘浓度（%）杀菌效果细胞活性0.005-++0.01+++0.03+++++0.05++++0.08++++“-”代表无效；“+”代表有效，“+”越多代表效果越明显。4.在0.03%的聚维酮碘中添加PEG8000，评估杀菌效果，结果如表2所示。可见0.14%以下的PEG8000对于细胞活性没有明显影响，但是添加PEG8000浓度在0.06%-0.1%时，杀菌效果具有明显提升。表2PEG8000浓度对于杀菌及细胞的影响PEG8000浓度（%）杀菌效果细胞活性0+++++0.02+++++0.06++++++0.1++++++0.14++++实施例2293T细胞真菌污染的去除1.去除微生物污染的液体的配制：取聚维碘酮、PEG8000，加出超纯水溶解，调节pH至8.0，添加不同体积的DMSO（二甲基亚砜），定容，用0.22μm滤膜过滤除菌、除杂质；备用。2.往被污染的293T细胞中加入1/2体积的上述液体，置于5%二氧化碳细胞培养箱中37℃作用12小时；去除上清，加入PBS（磷酸盐缓冲液，pH=7.4）洗涤细胞一次；去掉液体，加入完全培养基继续培养细胞即可。3.实验结果如表3所示，添加DMSO（3%-5%）可以提高杀菌效果。但是继续增大DMSO的浓度，细胞的活性受到抑制。表3添加DMSO杀灭真菌效果评价DMSO浓度（%,V/V）杀菌效果细胞活性0++++1+++++3++++++5+++++7+-实施例3小鼠原代成纤维细胞支原体污染的去除1.去除微生物污染的液体的配制：取聚维碘酮、PEG8000，加出超纯水溶解，调节PH至7.0，添加硫酸镁，溶解定容，用0.22μm滤膜过滤除菌、除杂质。备用。2.往被污染的小鼠原代成纤维细胞中加入1/2体积的上述液体，置于5%二氧化碳细胞培养箱中37℃作用5小时；去除上清，加入PBS（磷酸盐缓冲液，pH7.4）洗涤细胞一次；去掉液体，加入完全培养基继续培养细胞即可。3.实验结果如表4所示，添加硫酸镁浓度在15mM-25mM（mM表示毫摩尔每升）可以提高杀菌效果。表4添加硫酸镁杀灭真菌效果评价硫酸镁浓度（mM）杀菌效果细胞活性0++++5+++++15++++++25++++++50+++++实施例4PH对于杀菌效果的影响PH是影响聚维酮碘杀菌效果的重要因素，一般情况下，pH在4.0左右聚维酮碘具有良好的杀菌效果，而碱性范围内杀菌效果大幅度降低。但本专利技术人发现，添加了PEG8000的聚维酮碘溶液的最佳杀菌pH在6.0-8.0范围内。不同pH值的去除微生物污染的液体（0.03%聚维酮碘、0.06%PEG8000）添加到预先添加了大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌、支原体的完全培养基中，按照每毫升完全培养基添加0.5毫升去除微生物污染的液体，混匀，置于37℃作用2h；取作用完毕后的液体，用生理盐水稀释，取稀释后的液体进行生化培养检测。从评价结果（表5）来看，pH在6.0以上时杀菌效果较佳，7.0-8.0范围最佳。表5不同pH的去除微生物污染的液体的杀菌效果pH大肠杆菌金黄色葡萄球菌酵母菌支原体3.076%76%48%35%4.088%80%75%69%5.087%88%94%82%6.0100%90%100%93%7.0100%100%100%100%8.0100%100%100%100%9.098%99%92%96%实施例5保质期的确定聚维酮碘随着时间的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去除微生物污染的液体，其特征在于，所述液体中含有聚维酮碘、PEG 8000。

【技术特征摘要】
1.一种去除微生物污染的液体，其特征在于，所述液体中含有聚维酮碘、PEG8000。2.根据权利要求1所述的去除微生物污染的液体，其特征在于，按质量百分比计，所述聚维酮碘的含量为0.01%-0.08%。3.根据权利要求2所述的去除微生物污染的液体，其特征在于，按质量百分比计，所述PEG8000的含量为0.02%-0.1%。4.根据权利要求3所述的去除微生物污染的液体，其特征在于，所述液体的pH在6.0-8.0之间。5.根据权利要求3或4所述的去除微生物的污染的液体，其特征在于，所述液体中还含有DMSO。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金峰，柯跃斌，肖云军，吕子全，何洁，
申请(专利权)人：深圳市疾病预防控制中心深圳市卫生检验中心，深圳市预防医学研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44