一种水角的组培方法及其在种质保存中的应用技术

本发明专利技术提供了一种水角的组培方法及其在种质保存中的应用，涉及植物组培技术领域。本发明专利技术所述方法，包括以下步骤：1)将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；2)将步骤1)得到的所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；3)将步骤2)得到的所述增殖苗接种于生根培养基上进行生根培养，得组培苗。利用本发明专利技术所述方法，增殖率达1:5，生根率达95％，移栽成苗率为95％，且还能延长继代周期到1年以上。

A Tissue Culture Method of Water Corner and Its Application in Germplasm Preservation

The invention provides a tissue culture method of water angle and its application in Germplasm preservation, and relates to the technical field of plant tissue culture. The method comprises the following steps: 1) germinating the sterilized water horn seeds on the germination medium to obtain water horn germinating seedlings; 2) inoculating the water horn germinating seedlings obtained in step 1 into the multiplication medium to obtain multiplication seedlings; 3) inoculating the multiplication seedlings obtained in step 2 into the rooting medium to obtain tissue culture seedlings. By using the method, the multiplication rate is 1:5, the rooting rate is 95%, the transplanting seedling rate is 95%, and the subculture period can be prolonged to more than one year.

【技术实现步骤摘要】
一种水角的组培方法及其在种质保存中的应用
本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种水角的组培方法及其在种质保存中的应用。
技术介绍
水角(Hydroceratriflora)为凤仙花科水角属单种属多年生水生草本植物，其花粉红色或淡黄色，花型漂亮，果实成熟时紫红色，是一种极具开发潜力的水生观赏植物。水角主要分布于东南亚国家，而我国仅在海南地区有分布。由于生境变化，其分布范围十分狭窄，《中国生物多样性红色名录—高等植物卷》(2013)已将水角列为地区灭绝。另外，水生植物体内通气组织往往很发达，本身就容易带菌，而且其发达的通气组织在灭菌时消毒所用的药品极易残留其中，对植物细胞的存活和组织的生长会造成影响。在植物分类学上，水角属是凤仙花属的姊妹群，其植株花瓣全部离生，果实为假浆果，适应水生生境。水角的这些原始特征对于研究凤仙花科的起源、花演化式样和适应性分化等具有重要的意义。凤仙花科凤仙花属植物在观赏园艺方面应用广泛，已有很多组培快繁的研究，但水角的组培快繁和离体保存研究仍未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种水角的组培方法及其在种质资源保存中的应用，可获得高增殖率和生根率的组培苗，并且延长水角离体保存时间。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种水角的组培方法，包括以下步骤：1)将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；所述萌发培养基为MS培养基为基本培养基，还包括5～6.5g/L的琼脂，所述萌发培养基的pH值为5.5～6.2；2)将步骤1)得到的所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；所述增殖培养基以MS为基本培养基，还包括：0.06～0.15mg/L的TDZ，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述增殖培养基的pH值为5.5～6.2；3)将步骤2)得到的所述增殖苗接种于生根培养基上进行生根培养，得组培苗；所述生根培养基以MS为基本培养基，还包括：0.25～0.7mg/L的IAA，1～2g/L的活性炭，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.5～6.2。优选的，步骤1)所述消毒，包括：将种子放入已滴加2～3滴洗洁精的流动水中冲洗30～40min；用75％乙醇溶液进行表面消毒20～30s，用无菌水冲洗3～8遍；再用0.1％HgCl2溶液进行消毒8～15min，用无菌水冲洗2～5遍。优选的，步骤1)所述萌发，步骤2)所述增殖培养和步骤3)所述生根培养的温度独立的为23±2℃；光照强度独立的为20～40μmol/(m2·s)，光照时间独立的为10～14h/d。优选的，步骤2)所述增殖培养时接种所述萌发苗的带芽茎段和茎尖。优选的，当步骤3)所述组培苗生根3条以上、根长为2～3cm后，还包括炼苗和移栽。优选的，所述炼苗的时间为3～5d。优选的，所述移栽的基质为泥塘土。本专利技术还提供了上述组培方法在水角种质资源保存中的应用，将步骤2)得到的所述增殖苗接种于离体保存培养基中进行离体保存；所述离体保存培养基以MS为基本培养基，还包括：0.25～0.7mg/L的NAA，1～2g/L的活性炭，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.5～6.2。优选的，所述离体保存的温度为23±2℃；光照强度为20～40μmol/(m2·s)，光照时间为10～14h/d。本专利技术提供了一种水角的组培方法，以种子为对象，以种子萌发获得的小苗为外植体，经过不定芽诱导、增殖和生根等步骤，建立了水角的组培体系，一个月内的增殖系数高达1：5，生根率可达95％。本专利技术还提供了所述组培方法在水角种质保存中的应用，利用增殖得到的增殖苗进行离体保存，离体保存继代周期达1年以上，大大延长了离体保存周期，有利于水角种质资源的保存和开发利用，为今后的资源挖掘奠定基础。具体实施方式本专利技术提供了一种水角的组培方法，包括以下步骤：1)将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；所述萌发培养基为MS培养基为基本培养基，还包括5～6.5g/L的琼脂，所述萌发培养基的pH值为5.5～6.2；2)将步骤1)得到的所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；所述增殖培养基以MS为基本培养基，还包括：0.06～0.15mg/L的TDZ，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述增殖培养基的pH值为5.5～6.2；3)将步骤2)得到的所述增殖苗接种于生根培养基上进行生根培养，得组培苗；所述生根培养基以MS为基本培养基，还包括：0.25～0.7mg/L的IAA，1～2g/L的活性炭，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.5～6.2。本专利技术所述水角的组培方法，将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；所述萌发培养基为MS培养基为基本培养基，还包括5～6.5g/L的琼脂，所述萌发培养基的pH值为5.5～6.2。本专利技术所述所述消毒，优选包括：将种子放入已滴加2～3滴洗洁精的流动水中冲洗30～40min；用75％乙醇溶液进行表面消毒20～30s，用无菌水冲洗3～8遍；再用0.1％HgCl2溶液进行消毒8～15min，用无菌水冲洗2～5遍。本专利技术用75％乙醇溶液进行表面消毒后，优选用无菌水冲洗4～6遍，更优选为5遍。本专利技术用0.1％HgCl2溶液消毒后，优选用无菌水冲洗3～4遍。本专利技术在进行0.1％HgCl2溶液消毒后的无菌水冲洗时，优选在无菌条件下进行，更优选在超净台内进行。本专利技术在所述种子消毒前，优选还包括将种子表面的泥土或杂质等用纱布搽洗干净。本专利技术所述萌发培养基中包括琼脂，所述琼脂在所述萌发培养基中的浓度优选为5.2～6.4g/L，更优选为5.5～6g/L，最优选为5.6g/L。本专利技术对所述萌发培养基中的各成分的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。本专利技术所述萌发培养基的pH值优选为5.6～6，更优选为5.8。本专利技术所述萌发的温度优选为23±2℃，光照强度优选为20～40μmol/(m2·s)，光照时间优选为10～14h/d，更优选为11～13h/d，最优选为12h/d。在本专利技术中，萌发30天后在所述萌发培养基上得到萌发的无菌小苗，萌发率65％左右。得水角萌发苗后，本专利技术将所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；所述增殖培养基以MS为基本培养基，还包括：0.06～0.15mg/L的TDZ，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述增殖培养基的pH值为5.5～6.2。本专利技术所述接种优选为接种所述萌发苗的带芽茎段和茎尖。本专利技术所述增殖培养基中包括TDZ，所述TDZ在所述增殖培养基中的浓度优选为0.07～0.13mg/L，更优选为0.09～0.11mg/L，最优选为0.1mg/L。本专利技术所述TDZ可促进水角茎段腋芽或顶芽的生长。本专利技术对所述TDZ的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。本专利技术所述增殖培养基中包括蔗糖，所述蔗糖在所述增殖培养基中的浓度优选为16～24g/L，更优选为18～22g/L，最优选为20g/L。本专利技术对所述蔗糖的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水角的组培方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；所述萌发培养基为MS培养基为基本培养基，还包括5～6.5g/L的琼脂，所述萌发培养基的pH值为5.5～6.2；2)将步骤1)得到的所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；所述增殖培养基以MS为基本培养基，还包括：0.06～0.15mg/L的TDZ，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述增殖培养基的pH值为5.5～6.2；3)将步骤2)得到的所述增殖苗接种于生根培养基上进行生根培养，得组培苗；所述生根培养基以MS为基本培养基，还包括：0.25～0.7mg/L的IAA，1～2g/L的活性炭，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.5～6.2。

【技术特征摘要】
1.一种水角的组培方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将消毒后的水角种子接种于萌发培养基上进行萌发，得水角萌发苗；所述萌发培养基为MS培养基为基本培养基，还包括5～6.5g/L的琼脂，所述萌发培养基的pH值为5.5～6.2；2)将步骤1)得到的所述水角萌发苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得增殖苗；所述增殖培养基以MS为基本培养基，还包括：0.06～0.15mg/L的TDZ，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述增殖培养基的pH值为5.5～6.2；3)将步骤2)得到的所述增殖苗接种于生根培养基上进行生根培养，得组培苗；所述生根培养基以MS为基本培养基，还包括：0.25～0.7mg/L的IAA，1～2g/L的活性炭，15～25g/L的蔗糖和5～6.5g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.5～6.2。2.根据权利要求1所述组培方法，其特征在于，步骤1)所述消毒，包括：将种子放入已滴加2～3滴洗洁精的流动水中冲洗30～40min；用75％乙醇溶液进行表面消毒20～30s，用无菌水冲洗3～8遍；再用0.1％HgCl2溶液进行消毒8～15min，用无菌水冲洗2～5遍。3.根据权利要求1所述组...

【专利技术属性】
技术研发人员：何俊，张挺，杨娟，蔡杰，亚吉东，李村富，李春芳，李德铢，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53