环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用。本发明专利技术首次发现hsa_circ_0005758与结直肠癌相关，在结直肠癌患者的血浆中hsa_circ_0005758表达降低，因此，可通过检测受试者hsa_circ_0005758的表达，判断受试者是否患有结直肠癌或是否存在患有结直肠癌的风险。本发明专利技术的hsa_circ_0005758可作为结直肠癌相关性诊治分子标志物，能够实现结直肠癌的早期诊断；还可以作为筛选结直肠癌诊治的有效靶点，可将其制成诊断试剂盒、试纸、芯片等诊断工具。同时，本发明专利技术还证明了hsa_circ_0005758可抑制肠癌细胞增殖，因此可将其用于抗肿瘤药物领域。

Application of cyclic RNA as a molecular marker of colorectal cancer

The invention discloses the application of cyclic RNA as a molecular marker of colorectal cancer. For the first time, the present invention has found that hsa_circ_0005758 is related to colorectal cancer, and the expression of hsa_circ_0005758 is decreased in plasma of patients with colorectal cancer. Therefore, the expression of hsa_circ_0005758 in subjects can be detected to determine whether the subjects have colorectal cancer or whether there is a risk of colorectal cancer. The hsa_circ_0005758 of the invention can be used as a molecular marker for the diagnosis and treatment of colorectal cancer, and can realize the early diagnosis of colorectal cancer. It can also be used as an effective target for screening the diagnosis and treatment of colorectal cancer, and can be made into diagnostic kits, test papers, chips and other diagnostic tools. At the same time, the invention also proves that hsa_circ_0005758 can inhibit the proliferation of intestinal cancer cells, so it can be used in the field of antineoplastic drugs.

【技术实现步骤摘要】
环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用
本专利技术属于生物医药领域，特别涉及环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用。
技术介绍
由于胃肠道肿瘤早期症状不明显，筛查指标特异性不高，因此，早期发现、早期诊断成为一大难题，并且术后复发检测指标精确性及敏感性尚不理想，环状RNA的研究为胃肠道肿瘤早期诊断带来了曙光。环状RNA属于非编码RNA，由外显子和或内含子经非共价连接形成的闭合RNA(Guarnerio,J.,etal.,OncogenicRoleofFusion-circRNAsDerivedfromCancer-AssociatedChromosomalTranslocations.Cell,2016.166(4):p.1055-1056.)。环状RNA特征主要有以下几点：①环状RNA广泛存在于真核生物体内，丰度高，具有时空特异性的特点；②不具有5’端帽子及3’端尾巴(ployA)结构，因而不被RNA核糖核酸酶剪切，在真核生物体内具有结构稳定性的特点；③多具有高度保守序列，在生物进化过程中多数不发生变异；④可在人类血清外泌体中广泛存在，且在肿瘤组织中具有特异性表达。研究表明，环状RNA在肿瘤的恶性进程具有重要的作用，其调控途径主要通过吸附微小RNA，起到微小RNA海绵体的作用，解除微小RNA对靶基因的抑制作用，进而调控靶基因表达(Holdt,L.M.,etal.,Circularnon-codingRNAANRILmodulatesribosomalRNAmaturationandatherosclerosisinhumans.NatCommun,2016.7:p.12429.)。因此，在未来的临床诊断中，监测血浆环状RNA的表达水平能够给疾病的临床诊断提供参考，成为早期诊断和疾病病程相关的标志物；通过调控环状RNA的表达，能够为肿瘤的诊治提供新策略。虽然如今对环状RNA的研究越来越多，已成为新一代肿瘤早期诊断的潜在生物标志物，但到目前为止，尚未有可用于结直肠癌早期诊断及筛查的血浆环状RNA标志物的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用。本专利技术的另一目的在于提供环状RNA在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用。所述的环状RNA为hsa_circ_0005758，其核苷酸序列如下所示(SEQIDNO.1)：TCACCCCAAACCAGAAGGCCTGGCTGCTGCCAAGAAGCTTTGTGAGAATCTTTTGCAAACAGTTCATGCTGAATACTCTAGATTTGTGAATCAGATTAATACTGCTGTACCTTTACCAGGCTATACACAACCCTCTGCTATAAGTAGTGTCCCTCCTCAACCACCATATTATCCATCCAATGGCTATCAGTCTGGTTACCCTGTTGTTCCCCCTCCTCAGCAGCCAGTTCAACCTCCCTACGGAGTACCAAGCATAGTGCCACCAGCTGTTTCATTAGCACCTGGAGTCTTGCCGGCATTACCTACTGGAGTCCCACCTGTGCCAACACAATACCCGATAACACAAGTGCAGCCTCCAGCTAGCACTGGACAG；所述的hsa_circ_0005758在circbase(circbase数据库)中的环化位点序列如下(SEQIDNO.2)：agctagcactggacagtcaccccaaaccagaagg；其通过可变剪切形成，呈封闭环状结构，不易被核糖核酸外切酶降解，比线性RNA更稳定；部分环状RNA分子含微小RNA应答元件，可充当竞争性内源RNA，与微小RNA结合，在细胞中起到微小RNA海绵的作用，进而解除微小RNA对其靶基因的抑制作用，上调靶基因的表达水平。所述的hsa_circ_0005758可以是天然或人工合成的hsa_circ_0005758，或者使用可以表达hsa_circ_0005758的DNA片段的载体转染细胞获得。所述的载体包括病毒载体和真核载体。所述的病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒载体、甲病毒载体等。所述的疱疹病毒包括单纯疱疹病毒、痘苗病毒、EB病毒等。所述的真核表达载体可以是任何适当的载体，包括但不限于pCMT-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA6.0表达载体、pEGFP表达载体、PefBos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，如pBin438、pCAMBIA1301等。环状RNA在制备用于诊断结直肠癌的试剂盒、试纸、芯片、高通量测序平台、外泌体、或脂质体中的应用，所述的环状RNA为hsa_circ_0005758。所述的试剂盒包括用于诊断hsa_circ_0005758的引物或探针。所述的用于诊断hsa_circ_0005758的引物的核苷酸序列为：上游引物：5'-gcatagtgccaccagctgtt-3'；下游引物：5'-tctggtttggggtgactgtc-3'。进一步，所述的试剂盒中用于诊断hsa_circ_0005758的引物或探针还可包括现有技术中已经报道的可以用于检测所述环状RNA表达水平的引物或探针。所述的芯片包括固相载体，以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针。进一步，所述的固相载体可采用基于芯片领域的各种常规材料，包括但不限于尼龙膜，经活性基团(如醛基、氨基等)修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。所述的试纸包括用于诊断hsa_circ_0005758的引物或探针。所述的用于诊断hsa_circ_0005758的引物的核苷酸序列为：上游引物：5'-gcatagtgccaccagctgtt-3'；下游引物：5'-tctggtttggggtgactgtc-3'。所述的高通量测序平台包括用于诊断hsa_circ_0005758的引物或探针。所述的用于诊断hsa_circ_0005758的引物的核苷酸序列为：上游引物：5'-gcatagtgccaccagctgtt-3'；下游引物：5'-gcctggtaaaggtacagcagta-3'。环状RNA在制备用于检测hsa_circ_0005758表达水平的试剂中的应用，所述的环状RNA为hsa_circ_0005758。环状RNA作为结直肠癌分子标志物在筛选治疗结直肠癌药物中的应用，在得知了全面所述的hsa_circ_0005758与结直肠癌的密切相关性后，可以基于该特征来筛选促进hsa_circ_0005758表达的物质；进而可从所述的物质中找到对于治疗结直肠癌真正有用的药物。因此，本专利技术还提供了一种筛选治疗结直肠癌的潜在物质的方法，所述的方法包括：用候选物质处理结直肠癌相关细胞体系，若所述候选物质可促进前面所述的hsa_circ_0005758表达或活性，则表明该候选物质是治疗结直肠癌的潜在物质。所的述细胞体系可以是亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系(如动物模型，优选非人哺乳动物的动物模型，如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用，其特征在于：所述的环状RNA为hsa_circ_0005758。

【技术特征摘要】
1.环状RNA作为结直肠癌分子标志物的应用，其特征在于：所述的环状RNA为hsa_circ_0005758。2.环状RNA在制备用于诊断结直肠癌的试剂盒、试纸、芯片、高通量测序平台、外泌体或脂质体中的应用，其特征在于：所述的环状RNA为hsa_circ_0005758。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的试剂盒和试纸均包括用于诊断hsa_circ_0005758的引物或探针；所述的用于诊断hsa_circ_0005758的引物的核苷酸序列为：上游引物：5'-gcatagtgccaccagctgtt-3'；下游引物：5'-tctggtttggggtgactgtc-3'；所述的高通量测序平台包括用于诊断hsa_circ_0005758的引物或探针；所述的用于诊断hsa_circ_0005758的引物的核苷酸序列为：上游引物：5'-gcatagtgccaccagctgtt-3'；下游引物：5'-gcctggtaaaggtacagcagta-3'。4.环状RNA在制备用于检测hsa_circ_0005758表达水平的试剂中的应用，其特征在于：所述的环状RNA为hsa_c...

【专利技术属性】
技术研发人员：施颖，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东,44