雌激素受体α基因与女性眼病发生时间相关制造技术

本发明专利技术公开了雌激素受体α基因与女性眼病发生时间相关。在ERα基因XbaⅠ位点多态性方面，AA基因型与GD的发生有关，是GD的易感基因型，并且与GO的发生时间有着密切关系，是GO早发的危险因素；ERα基因PvuⅡ酶切位点多态性与GO的发生发展无关。

Estrogen receptor alpha gene is associated with the onset time of female ophthalmopathy

The invention discloses that the estrogen receptor alpha gene is related to the occurrence time of female ophthalmopathy. As for the polymorphism of Xba I site of ERa gene, AA genotype is related to the occurrence of GD, is a susceptible genotype of GD, and is closely related to the occurrence time of GO, and is a risk factor for the early occurrence of GO. The polymorphism of Pvu II restriction site of ERa gene is not related to the occurrence and development of GO.

【技术实现步骤摘要】
雌激素受体α基因与女性眼病发生时间相关
本专利技术属于医学
，涉及雌激素受体α基因Xbal位点多态性与女性Graves眼病发生时间相关。
技术介绍
Graves眼病(GravesOphthalmopathy,GO)是一种以内分泌和眼眶病理表现为主的器官特异性自身免疫性疾病，是最常见的眼眶病。由于性激素对免疫系统的作用及性别的差异，女性更易发生免疫性疾病。GO常发生于毒性弥漫性甲状腺肿(Graves,Disease,GD)导致的甲亢的病人，女性GD患者是男性的7-10倍，约40％～75％的甲亢病人会发展成GO，GO患者男女比为3:16，且发生的时间不一。已有研究证实，雌激素受体-α(estrogenreceptor-α,ER-α)基因两个单核苷酸多态性位点XbaⅠ(G变A)和PvuⅡ(T变C)与女性易患疾病，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、1型糖尿病等显著相关。ER-α基因的XbaⅠ和PvuⅡ多态性是否影响女性GO患者的发生发展，目前尚未见报道。本课题即研究女性GD和GO患者该两个多态性的分布情况，以了解其基因频率和部分发病的分子学基础。
技术实现思路
本专利技术设立4组观察对象，分别为正常女性组，共126人；GD组，确诊为GD18个月以上，未出现眼征患者，共67人；GO-S组，诊断为GD后，18个月内出现眼征患者，共56人；GO-L组，诊断为GD后，18个月以上出现眼征患者，共40人；应用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)的方法，检测受试对象ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ位多态性分布的情况；分析ERα基因多态性与女性GO发病之间的相关关系。GO-S组AA基因型频率为80.4％，而正常对照组、GD组、GO-L组AA基因型频率分别为46.8％、59.1％和57.5％，差异有统计学意义(P＝0.005)。并且，GO-S组与正常对照组、GD组、GO-L组差异具均有统计学意义(P值分别为0.000，0.04，0.042)；将GD组、GO-S和GO-L合并与正常对照组相比较，AA基因型频率差异分为为66％和46.8％，差异具有统计学意义(P＝0.004)；GO-S组与GD组、GO-L组A等位基因频率分别为88.4％、75.4％和59.4％，计算暴露于A等位基因与GO-S的联系强度OR得出，GO-S组与GD组相比，暴露于A等位基因的OR(95％CI)为2.11(1.203-3.699),与GO-L相比，暴露于A等位基因的OR(95％CI)为2.45(1.312-4.575)；正常对照组、GD组、GO-S组和GO-L组在PvuⅡ多态性的分布差异不具有统计学意义(P＝0.698)。结论：雌激素受体α基因与女性眼病发生时间相关。具体的，雌激素受体α基因Xbal位点多态性与女性Graves眼病发生时间相关。在ERα基因XbaⅠ位点多态性方面，AA基因型与GD的发生有关，是GD的易感基因型，并且与GO的发生时间有着密切关系，是GO早发的危险因素；ERα基因PvuⅡ酶切位点多态性与GO的发生发展无关。附图说明图1ERα的PCR扩增产物，产物长度为278bp；图2雌激素受体αPCR扩增产物PvuⅡ酶切的电泳结果；图3雌激素受体αPCR扩增产物XbaⅠ酶切的电泳结果；图4雌激素受体α的PVUII酶切位点测序结果；图5雌激素受体α的XbaⅠ酶切位点测序结果。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行详细说明。1对象与方法1.1对象对照组：正常女性，年龄匹配，来源为滨州医学院附属医院眼科病房女性眼外伤、眼科屈光门诊女性患者及体检中心查体的女性。病例组：于2011年5月-2012年5月，在滨州医学院附属医院、滨州市人民医院、滨州市中心医院的眼科、内分泌科住院的女性GD患者，分为病例组1(GD组)、病例组2(GO-S组)、病例组3(GO-L组)。病例组1(GD组)：依据临床症状、体征结合血甲状腺激素测定明确诊断为GD，且无眼征已经18个月以上的女性GD患者。GD诊断依据参照《中国甲状腺疾病诊治指南》(中华医学会内分泌学会2008)。具备下列情况之一者排除：突眼(Hertel突眼计测量值＞18mm，双眼差值＞2mm)；②眼睑退缩(向前注视上睑缘位于角膜缘及角膜缘以上)；③上睑迟落(向下注视时上睑不能下移或下落缓慢)；④限制性眼外肌病(CT证实的眼外肌肥大)；⑤视神经病变(无其他可考虑原因导致的异常视力、瞳孔反应、色觉、视野)。病例组2(GO-S组)：明确诊断为GD,初诊时即有眼征,或诊断后18个月内出现眼征的女性GD患者。病例组3(GO-L组)：明确确诊为GD,诊断后18个月以上出现眼征的女性GD患者。眼征参照TAO诊断标准：(1)有眼睑退缩，只要合并下列体征或检查证据之一即可做出诊断确诊：①甲状腺功能异常或调节异常；②眼球突出，其突出度大于或等于20mm；③视神经功能障碍，包括视力下降，瞳孔反射、色觉、视野异常，无法用其他病解释；④眼外肌受累，眼球活动受限，影像学发现眼外肌增粗。(2)无眼睑退缩，则必须有甲状腺功能异常或调节异常并合并以下临床体征之一：①眼球突出；②视神经功能障碍；③眼外肌受累。并排除其他原因引起类似的眼部体征。剔除标准：其他原因引起的甲状腺功能亢进、骨质疏松、子宫肌瘤、子宫内膜异位症、类风湿关节炎及系统性红斑狼疮等可能与雌激素受体多态性相关的疾病以及系统免疫性疾病。有其他眼病，近三个月来应用激素或免疫抑制剂等患者。1.2实验方法1.2.1全血基因组DNA提取全部研究对象均于月经周期第3～7天上午8～10时采集空腹肘前静脉血5ml，置于一次性真空采血管中(EDTA抗凝剂)。全血经3000rpm/min离心10分钟，取血清,置于不同的EP管中，并将EP管按照病人编号和相应编号，然后将分装有血浆和血细胞的EP管放于-70度冰箱中保存。取血前嘱研究对象安静休息15-30分钟。如连续60天以上无月经来潮的妇女在任意日上午取血，取血方法同前。1.2.2聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)扩增ERα基因查询GeneBank，由primer5.0设计引物。由生工生物工程(上海)有限公司合成，上游引物:AGGGTTATGTGGCAATGACG，下游引物:CCTGCACCATATGTTACCT，产物为278bp的片段，包含ERα基因内含子1及部分外显子2。反应体系为50μL，含引物20pmol，模板DNA1μg，2×DNA聚合酶混合物25μL(美国Fermentas公司)，无核酸酶水补充至50μL。置于热循环仪(Eppendorf公司)中，95℃预变性5min；并按以下条件扩增36个循环:95℃变性10s，56℃退火30s，72℃延伸30s；最后72℃充分延伸10min。PCR产物上样于15g/L琼脂糖凝胶电泳15min，紫外灯下成像并检测。1.2.3PCR产物提纯PCR产物用普通DNA产物纯化试剂盒(北京天根生化科技有限公司)纯化回收。溶解于30μL灭菌蒸馏水中，4℃保存备用。1.2.4酶切酶切体系20μL，含1UXbaⅠ(或PvuⅡ)内切酶(生工生物工程(上海)有限公司)、10μLPCR产物、10mol/L缓冲液2μL，灭菌水补充至20μL。37℃水浴恒温酶切4h。分别取酶切本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.雌激素受体α基因与女性眼病发生时间相关。

【技术特征摘要】
1.雌激素受体α基因与女性眼病发生时间相关。2.按照权利要求1所述雌激素受体α基因与女性眼病发生时间相关，其特征在于：所述雌激素受体α基因Xbal位点多态性与女性Graves眼病发生时间相关。3.按照权利要求1所述雌激素受体α基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊，
申请(专利权)人：张磊，
类型：发明
国别省市：山东,37