一种窿缘桉内生真菌Chaetomium sp次生代谢产物的制备方法及用途技术

本发明专利技术公开了一种内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法及用途，该方法包含：(1)将窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.在PDA固体培养基活化、继代培养，再在PDB液体培养基中摇培；(2)将步骤(1)中获得的液体种子在大米培养基中发酵培养，获得固体发酵物；(3)固体发酵物采用甲醇冷浸提取，过滤，滤液浓缩得到粗提物，将粗提物水混悬后用石油醚和乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚和乙酸乙酯层粗提物；(4)通过减压柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、半制备型高效液相色谱获得化合物A‑F。本发明专利技术的方法对窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.的次生代谢产物进行分离，并且次生代谢产物具有抑菌和抗肿瘤作用。

Preparation and Application of Secondary Metabolites of an Endophytic Fungus Chaetomium SP from Eucalyptus marginata

The invention discloses a preparation method and application of secondary metabolites of endophytic fungus Chaetomium sp. The method comprises: (1) activating and subculturing endophytic fungus Chaetomium sp. in PDA solid medium, and shaking culture in PDB liquid medium; (2) fermenting and culturing liquid seeds obtained in step (1) in rice medium to obtain solid fermentation products; (3) solid development. The fermentation products were extracted by methanol in cold extraction, filtered and filtrate concentrated to extract crude extracts. Crude extract water was suspended and then extracted with petroleum ether and ethyl acetate. Crude extracts of petroleum ether and ethyl acetate were obtained respectively. (4) A F was obtained by vacuum column chromatography, Sephadex gel column chromatography and semi preparative high performance liquid chromatography. The method of the invention separates the secondary metabolites of the endophytic fungus Chaetomium sp. of Eucalyptus marginata, and the secondary metabolites have bacteriostatic and antineoplastic effects.

【技术实现步骤摘要】
一种窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp次生代谢产物的制备方法及用途
本专利技术涉及一种窿缘桉内生真菌次生代谢产物，具体涉及一种窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.次生代谢产物的制备方法及用途。
技术介绍
窿缘桉(EucalyptusexsertaF.Muell)又名小叶桉、风吹柳，是较早从澳大利亚引入我国的桉树树种之一，在广东、海南和广西等地广泛栽种。窿缘桉除作为重要经济用材林之外，其叶片在民间可作为中草药，具有降压消炎的作用，其树皮的甲醇提取物具有杀虫作用。随着桉树大面积种植，病害发生的范围和程度也随之增加。灰腐病、青枯病、焦枯病、溃疡病以及根腐病的发生对桉树的栽培产生了巨大损失。如目前危害最为严重的青枯病，会导致桉树叶片失水萎蔫，病部变褐坏死，根系变黑腐烂，严重时导致整株枯萎死亡，对于林业生产造成严重的经济损失。目前，对于桉树病害防治的主要方法是使用化学农药，然而化学农药的持续大量使用对环境中非靶标有益生物产生巨大危害，严重破坏了生态系统环境的结构和功能，同时带来了严重的环境污染，导致土壤特别是耕地地力的基础生产能力下降；部分易残留，毒性高的传统药剂也成为影响人畜健康及微本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，该方法包含：(1)将窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.接种到PDA固体培养基平板上活化、继代培养，再将其菌丝接种至PDB液体培养基中，摇培；(2)将步骤(1)中获得的液体种子接入已灭菌的大米培养基中，后转至28℃恒温发酵培养，获得固体发酵物；(3)所述的固体发酵物采用甲醇冷浸提取，过滤，滤液浓缩得到粗提物，将所述的粗提物水混悬后用石油醚和乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚和乙酸乙酯层粗提物；(4)通过减压柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、半制备型高效液相色谱获得化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E和化合...

【技术特征摘要】
1.一种窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，该方法包含：(1)将窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.接种到PDA固体培养基平板上活化、继代培养，再将其菌丝接种至PDB液体培养基中，摇培；(2)将步骤(1)中获得的液体种子接入已灭菌的大米培养基中，后转至28℃恒温发酵培养，获得固体发酵物；(3)所述的固体发酵物采用甲醇冷浸提取，过滤，滤液浓缩得到粗提物，将所述的粗提物水混悬后用石油醚和乙酸乙酯萃取，分别得到石油醚和乙酸乙酯层粗提物；(4)通过减压柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、半制备型高效液相色谱获得化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E和化合物F，分别具有如下式(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)、(Ⅳ)、(Ⅴ)、(Ⅵ)结构：2.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述活化培养5～7d，所述继代培养4～5d。3.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述摇培条件为28℃，150rpm，摇培6～7d。4.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述发酵时间为60d。5.根据权利要求1所述的窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述柱层析依次采用石油醚、体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱液进行洗脱，收集流出液，再依次采用纯石油醚、石油醚和二氯甲烷混合液、纯二氯甲烷、二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱液进行梯度洗脱，收集流出液，经葡聚糖凝胶柱层析、半制备型高效液相色谱获得化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E和化合物F。6.根据权利要求5所述的窿缘桉内生真菌Chaetomiumsp.次生代谢产物的制备方法，其特征在于，所述葡聚糖凝胶柱层析采用SephadexLH-20。7.根据权利要求6所述的窿缘桉内生真菌Chaetom...

【专利技术属性】
技术研发人员：单体江，毛子翎，欧阳锦逵，王军，孙思，王伟，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44