一种将砒霜和全反式维甲酸联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种将砒霜As2O3和全反式维甲酸ATRA联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物，有效成分为按照总体液量终浓度计的砒霜和全反式维甲酸，并提供了其在制备防治肝癌切除后复发转移的药物中的应用。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术提供的药物组合物及应用，披露了砒霜具有诱导肝癌干细胞分化的作用，砒霜和全反式维甲酸都抑制PML蛋白；且砒霜和全反式维甲酸分别可调低PML下游肝癌干细胞关键基因Oct4表达。打破传统诱导肝癌细胞凋亡的方式，针对肝癌切除后残留的肝癌干细胞，用小剂量砒霜诱导肝癌干细胞分化；用全反式维甲酸和砒霜组合，能够起到协同作用，减少砒霜用量，达到清除残留的肝癌干细胞的作用。

A combination of arsenic and all-trans retinoic acid for removal of residual hepatocellular carcinoma stem cells and its application

The invention discloses a pharmaceutical composition for removing residual hepatocellular carcinoma stem cells by combining arsenic As2O3 and ATRA. The effective component is arsenic and all-trans retinoic acid at the final concentration of total liquid volume, and provides the application of arsenic and all-trans retinoic acid in the preparation of drugs for preventing recurrence and metastasis of hepatocellular carcinoma after resection. The beneficial effects of the invention are as follows: the medicinal composition and application of the invention disclose that arsenic can induce differentiation of hepatocellular carcinoma stem cells, arsenic and all-trans retinoic acid can inhibit PML protein, and arsenic and all-trans retinoic acid can reduce the expression of Oct4, the key gene of downstream hepatocellular carcinoma stem cells of PML, respectively. Breaking the traditional way of inducing apoptosis of hepatocellular carcinoma cells, aiming at the residual hepatocellular carcinoma stem cells after resection of hepatocellular carcinoma, the differentiation of hepatocellular carcinoma stem cells is induced by low dose arsenic; the combination of all-trans retinoic acid and arsenic can play a synergistic role, reduce the amount of arsenic and achieve the effect of eliminating residual hepatocellular carcinoma stem cells.

【技术实现步骤摘要】
一种将砒霜和全反式维甲酸联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物及其应用
本专利技术涉及抗癌药
，具体涉及一种将砒霜和全反式维甲酸联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物及其应用。
技术介绍
肝细胞癌(Hepatocellarcarcinoma,HCC)发病率居世界恶性肿瘤第五位，死亡率则为恶性肿瘤第二位。我国为HCC高发区，发病人数几乎占全球的50％。HCC与乙型肝炎病毒感染和肝硬化密切相关，我国乙型肝炎病毒感染者占总人口10％，HCC发病率可能长期居高不下。HCC诊断时多数已属进展期，手术切除率低于50％，即使手术切除也易复发和转移，5年生存率只有10％～30％，故有“癌中之王”之称。HCC治疗主要采用手术、介入治疗，射频及肝移植等方法，治疗效果总体仍然不好，HCC复发和转移则是迫切需要解决的关键问题。越来越多的研究证实包括肝癌在内的实体肿瘤存在肿瘤干细胞(cancerstemcells，CSCs)。CSCs是肿瘤组织中少数具有无限增殖和多向分化的潜能的一类细胞，表现出极强的自我更新能力，是肿瘤恶性增殖的“根源细胞”，同时其具有强大的耐药能力和浸润转移能力。肿瘤的生长是由CSCs进行驱动，治疗后少量残存的CSCs可促使肿瘤复发和转移，这是目前各治疗方案效果欠佳的关键原因。针对CSCs的靶向治疗可能成为防止癌肿复发和转移的关键。HCC的治疗不仅仅局限杀灭快速增殖的癌细胞，更应清除CSCs。然而，到目前为止，尚无有效清除CSCs，阻止手术后癌复发和转移的方法。故进一步研究清除CSCs的方法对HCC的综合治疗具有重要意义。鉴于HCC诊断明确时多数已属进展期，外科切除HCC作为首选治疗(手术固然可以切除HCC细胞和肝癌干细胞(livercancerstemcells，LCSCs)，已经转移出切除范围LCSCs则不能根除，HCC手术切除率低于50％，即使手术切除癌肿也易复发和转移，5年生存率10％～30％。即使完全切除了病肝的肝移植，仍有HCC复发(血循环内可能转移LCSCs)。HCC对传统的化疗药物不敏感，而且休眠的LCSCs易于耐受抗癌药物。残留或已经移出LCSCs是肝癌根治性切除后复发和转移的根源，但是现有的常规性临床治疗只针对增殖快的癌细胞，没有针对性清除LCSCs，现有技术条件下，临床常规治疗不能根除LCSCs，基础和临床研究尚未找到防治HCC复发和转移的良方。砒霜(arsenictrioxide，As2O3)是剧毒中药，自20世纪70年代以来，我国成功用As2O3治疗急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukaemia，APL)取得了世人瞩目的突破性进展，95％APL患者得以治愈。As2O3具有明显抑制HCC增殖、细胞周期阻滞和诱导癌细胞凋亡的作用。2004年国家食品药品监督管理局(SFDA)批准了As2O3可用于治疗晚期HCC，但是，多中心II期临床试验治疗晚期HCC，结果显示单用As2O3抗癌效果很不满意，而且As2O3治疗HCC机制不清，此后As2O3抗HCC研究几乎陷入停滞状态。As2O3虽然具有抑制肝癌细胞增殖，诱导肝癌细胞凋亡的作用，亚砷酸钠也有抑制肝癌细胞增殖和抑制LCSCs的功能，但是，研究发现0.8μg/mlAs2O3处理HCC细胞96小时，As2O3方能显著地阻止HuH7细胞的生长。按此浓度以60kg体重HCC患者及60％体液计算，每日至少需28.8mgAs2O3才可诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞增殖，此量砒霜毒性很大，按0.5μg/mlAs2O3诱导LCSCs分化，至少需每日需用14.4mgAs2O3，也就是说按照SFDA推荐剂量10mg/日治疗晚期肝癌(诱导肝癌细胞凋亡)几乎是无效的。如何使用低剂量As2O3，又能清除LCSCs是治疗HCC的关键。维甲酸(RA)又称视黄酸或维生素A酸,是维生素A的衍生物。机体内一定浓度的维甲酸可调节细胞的增殖、分化、成熟,是机体正常生长发育和各种生理活动必不可少的重要因子。维甲酸类化合物受体属于类固醇－甲状腺素核转录因子超家族,现已发现两大类受体可与维甲酸结合,介导维甲酸作用。全反式维甲酸(ATRA)抗癌通过诱导癌细胞的分化和癌细胞凋亡，影响肿瘤细胞周期(ATRA可影响细胞DNA的合成,改变细胞周期和信号传导途径,使细胞在G1期前停滞,还可影响某些癌基因及细胞因子基因的表达)，减缓癌细胞能量代谢和肿瘤相关蛋白表达。ATRA治疗APL针对PML-RARa融合癌蛋白的RARa部分，ATRA诱导实体癌分化通过何种途径，目前尚不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物及其应用。为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：一种将As2O3和ATRA联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物，所述药物组合物中的有效成分为：按照患者总体液量终浓度计为1.0μg/ml的As2O3和ATRA。进一步的，上述的一种将As2O3和ATRA联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物，所述药物组合物中得有效成分为：按照患者总体液量终浓度计为0.25μg/ml的As2O3和患者总体液量终浓度计为0.75μg/ml的ATRA。本专利技术的第二个目的是提供了一种将As2O3和ATRA联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物在制备用于防治肝癌切除后复发转移的药物中的应用。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的将As2O3和ATRA联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物及其应用，首次披露砒霜具有诱导肝癌干细胞分化的作用，As2O3和ATRA都抑制PML蛋白，即肝癌干细胞PML蛋白是二者的靶蛋白；且As2O3和ATRA分别作用可以调低PML下游肝癌干细胞关键基因Oct4表达。本专利技术打破传统诱导肝癌细胞凋亡的方式，旨在用小剂量As2O3诱导肝癌干细胞分化，针对肝癌切除后残留的肝癌干细胞；用ATRA和As2O3组合，能够起到协同作用，减少砒霜用量，达到清除残留的肝癌干细胞的作用。附图说明图1显示为(A)免疫荧光分析As2O3处理前后LCSCsPML蛋白表达；(B)WesternBlotting分析0.5μg/mlAs2O3处理前后选自HuH7和HCC组织LCSCsPML蛋白表达；(C)HuH7分选的LCSCs经0.5μg/mlAs2O3处理5d内PML蛋白表达。图2显示为(A)0.5μg/mlAs2O3处理5～7d,LCSCs关键基因Oct4，Sox2，Klf4表达明显下调(p＜0.05)，c-Myc表达无显著变化；(B)As2O3处理Oct4，Sox2，Klf4蛋白表达明显降低(p＜0.05)，c-Myc蛋白表达无显著变化。图3显示为(A).自HuH7分选的LCSCs培养的肿瘤球；(B).自HuH7分选的LCSCs经0.5μg/mlAs2O3处理培养的肿瘤球；(C).自HCC组织分选的LCSCs培养的肿瘤球；(D).自HCC组织分选的LCSCs经0.5μg/mlAs2O3处理培养的肿瘤球。图4显示为siPML和As2O3处理7dCD133+CD13+LCSCs表达PML和Oct4蛋白。图5显示为(A).0.5μg/mlAs2O3处理7d后CD133+CD13+LCS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将砒霜和全反式维甲酸联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中的有效成分为：按照总体液量终浓度计为1.0μg/ml的砒霜和全反式维甲酸。

【技术特征摘要】
1.一种将砒霜和全反式维甲酸联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中的有效成分为：按照总体液量终浓度计为1.0μg/ml的砒霜和全反式维甲酸。2.根据权利要求1所述的一种将砒霜和全反式维甲酸联合使用的用于清除残留肝癌干细胞的药物组合物，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：金世龙，密雷，王伟，金榆凯，
申请(专利权)人：金世龙，
类型：发明
国别省市：重庆,50