一种基因组定点敲除的方法技术

本发明专利技术公开了一种基因组定点敲除的方法。本发明专利技术保护一种基因编辑系统，包括Cas9核酸酶和sgRNA；所述Cas9核酸酶如序列表的序列4所示；所述sgRNA的核苷酸序列如序列表的序列2自5’端第445‑530位所示。敲除效率的提升可能会伴随脱靶效率的增加，本发明专利技术通过使用eSpCas9(1.1)+sgRNA(modified)，平衡了这一矛盾，提升敲除效率的同时，不增加脱靶效率甚至是一定程度的降低脱靶效率。

【技术实现步骤摘要】
一种基因组定点敲除的方法
本专利技术涉及一种基因组定点敲除的方法。
技术介绍
CRISPR-Cas9(theclusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats-CRISPR-associatedprotein9)技术的出现和发展，已经成为强有力的基因组编辑手段，被广泛应用到很多组织和细胞中。CRISPR/Cas9protein–RNA复合物通过向导RNA(guideRNA)定位于靶点上，切割产生DNA双链断裂(DSB，dsDNAbreak)，而后，生物体会本能的启动DNA修复机制修复DSB。一般有两种修复机制，一种是非同源末端连接(NHEJ，non-homologousendjoining)，一种是同源重组(HDR，homology-directedrepair)，通常情况下，NHEJ修复占大多数，通过随机插入或者缺失不同数量的碱基，细胞将断裂的DSB连接起来，引起编码蛋白的氨基酸移码或发生提前终止，从而改变蛋白的结构，影响基因功能，实现基因定点敲除。为了提高工作效率，降低工作成本，定点敲除效率的提升一直是植物基因组定点敲除的重要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因编辑系统，包括Cas9核酸酶和sgRNA；所述Cas9核酸酶如序列表的序列4所示；所述sgRNA的核苷酸序列如序列表的序列2自5’端第445‑530位所示。

【技术特征摘要】
1.一种基因编辑系统，包括Cas9核酸酶和sgRNA；所述Cas9核酸酶如序列表的序列4所示；所述sgRNA的核苷酸序列如序列表的序列2自5’端第445-530位所示。2.表达权利要求1所述的基因编辑系统的重组表达载体、表达盒、重组细胞或重组菌。3.一种用于基因敲除的重组表达载体，包括表达盒甲和表达盒乙；所述表达盒甲表达权利要求1中所述的Cas9核酸酶；所述表达盒乙包括n个元件乙；所述元件乙包括权利要求1中所述的sgRNA和靶序列；所述重组表达载体可靶向n个不同的靶序列进行基因敲除。4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：所述元件乙还包括pre-tRNA的核苷酸序列；所述pre-tRNA的核苷酸序列如序列表的序列2自5’端第344-420位所示。5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述元件乙自5’端依次为pre-tRNA的核苷酸序列、靶点序列和sgRNA的核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐雯，杨进孝，康桂婷，刘亚，王飞鹏，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京,11