The invention discloses a primer and probe for detecting porcine circovirus type 3 based on digital PCR technology, and a kit and a method thereof. Primers and probes, including upstream primer FP, downstream primer BP, probe Probe; detection kit includes 2 * ddPCR Supermix, super pure water without RNA enzyme, virus total DNA extraction reagent, negative control and positive control. The detection method is to extract the samples to be detected by DNA, and to detect the DNA quantitatively by using the droplet digital PCR technology. The number of copies of the samples is determined by amplification of the copy number, and the content of porcine circovirus type 3 is determined. The invention has the advantages of accuracy, sensitivity, wide applicability, no need to rely on standard curves, and absolute quantification. It can realize early detection, early treatment and early prevention of porcine circovirus type 3 virus disease, and effectively control outbreak.
【技术实现步骤摘要】
基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型菌的引物和探针及其试剂盒与方法
本专利技术属于分子生物学
，涉及一种基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型的引物和探针及其试剂盒与方法。
技术介绍
猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV)是一种小型、无包膜、单链环状DNA病毒，属于圆环病毒科属。猪圆环病毒主要有三个基因型，即PCV1，PCV2和PCV3。其中，PCV1不具有致病性，PCV2有致病性，与猪的多种疾病有关联，如断奶仔猪多系统衰竭综合征，皮炎，肾病综合征及及先天性震颤等。PCV3是2016年美国首次发现的病毒，能导致猪生殖失败，新生儿仔猪严重流失等症状。我国辽宁、江西、重庆等养殖场都已检测到病原体。目前，猪圆环病毒已遍及世界各养猪国家和地区，在我国猪群中已广泛流行，给养猪业造成了巨大损失。猪圆环病毒3型作为一种新型病毒，目前在我国的地理分布、流行情况、组织向性、在疾病中的作用和来源尚不清楚。为此，建立早期快速检测方法对猪圆环病毒3型的研究、预防和控制具有十分重要的意义。目前，实验室常用的检测猪圆环病毒的方法有细菌分离、电镜法、血清学诊断技术(免疫组...
【技术保护点】
1.一种基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型引物和探针，包括上游引物FP、下游引物BP、探针Probe，其核苷酸序列分别如下所示：FP：5’‑GGTTCCAACGGAAATGACGTT‑3’；BP：5’‑GCCCACAGCTGGCACATAC‑3’；Probe：5’‑FAM‑ATGGTGGAGTATTTCTT‑MGB‑3’，其中5端标记的荧光基团是FAM，3端标记的淬灭基团是MGB。
【技术特征摘要】
1.一种基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型引物和探针，包括上游引物FP、下游引物BP、探针Probe，其核苷酸序列分别如下所示：FP：5’-GGTTCCAACGGAAATGACGTT-3’；BP：5’-GCCCACAGCTGGCACATAC-3’；Probe：5’-FAM-ATGGTGGAGTATTTCTT-MGB-3’，其中5端标记的荧光基团是FAM，3端标记的淬灭基团是MGB。2.如权利要求1所述的基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型的引物和探针，其特征在于：扩增反应时，FP引物、BP引物和探针的摩尔比为4：4：2。3.一种基于数字PCR技术检测副猪圆环病毒3型的试剂盒，其特征在于，试剂盒包含权利要求1或2中所述的引物和探针。4.如权利要求3所述的基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型，其特征在于，还包括以下成分的部分或者全部：(1)2×ddPCRSupermix；(2)无RNA酶的超纯水；(3)阳性对照和阴性对照；(4)病毒总DNA提取试剂。5.如权利要求4所述的基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型的试剂盒，其特征在于：所述的2×ddPCRSupermix含有：2×PCRBuffer，2×TaqDNAPolymerase，16μMFP，16μMBP引物、20μM探针，400μMdNTPmix和2×RNaseCocktail。6.如权利5所述的基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型的试剂盒，其特征在于：所述的2×PCRBuffer含有20mMTris-HCl(pH8.3)，50mMMgCl2，20mMKCl和2mg/mLBSA。7.如权利要求4所述的基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型的试剂盒，其特征在于：阳性对照为猪圆环病毒3型DNA，阴性对照为去离子水。8.一种基于数字PCR技术检测猪圆环病毒3型试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1...
【专利技术属性】
技术研发人员：李丽丽，温雯，孟赫诚，石磊，陈洵，
申请(专利权)人：暨南大学，华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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