一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌及其应用，属于微生物领域。本发明专利技术提供的高效橡胶树根病生防拮抗放线菌属于桑树链霉菌，其分类命名为Streptomyces samsunensis 17‑7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2018619。将该放线菌制备成生防制剂应用于橡胶树根病，能够对多种病原菌(橡胶白根病菌、褐根病菌等)具有很好的拮抗作用，尤其是对橡胶树褐根病菌拮抗作用显著，其抑菌率为89.28％，显著优于现有已知的拮抗菌株，该生防拮抗放线菌在橡胶树根病的防治方面具有较大的生防潜力。

Biocontrol antagonistic actinomycete against rubber tree root disease and its application

The invention provides an efficient biocontrol antagonistic actinomycete against rubber tree root disease and its application, which belongs to the field of microorganisms. The biocontrol antagonistic actinomycetes for rubber tree root disease provided by the invention belong to Streptomyces mulberry, and are classified as Streptomyces samsunensis 17 7. They are stored in the typical culture preservation center of China and the preservation number is CCTCC NO: M2018619. The biocontrol agent prepared by this actinomycete can antagonize many pathogenic bacteria (rubber albino rhizobia, brown rhizobia, etc.), especially the brown rhizobia of rubber trees. The bacteriostasis rate is 89.28%, which is significantly better than the existing known antagonistic strains. The biocontrol antagonistic actinomycete has a great effect on the control of rubber tree rhizobia. Biological control potential.

【技术实现步骤摘要】
一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌及其应用
本专利技术属于微生物生防菌株
，具体涉及一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌及其应用。
技术介绍
橡胶树根病是严重危害橡胶树的一类病害，我国胶园发病率在2％以上。橡胶树根病属于慢性型病害，发病初为零星分散、扩展缓慢，但发病起来累计的经济损失不小。根病对橡胶树造成根部腐烂，轻病患株吸收功能下降，影响产胶量，严重发病时可以引起整株树根腐烂最终导致植株死亡。目前，我国橡胶树上发现的病害多达90种以上，而其中根病是橡胶树三大毁灭性病害之一。橡胶树根病给橡胶生产造成巨大的经济损失，黄志雅等调查云南省八十年代建立的二代胶园，发现橡胶定植1-2周年后即发生褐根病和红根病。橡胶树根病在中国的植胶园中普遍发生，发病严重的林段发病率达到10％以上。对于橡胶树根病的防治，在施用化学药剂的同时结合农业栽培措施，挖隔离沟阻断病根病菌接触传播，病根挖出且高温暴晒，在连续光照和高温条件下杀死病原菌，从而断绝其侵染源和传播途径，达到防治目的，但劳动强度大，不便于操作。十三吗啉等作为防治橡胶树根病的有效药剂，其防治成本较高，多菌灵WP、代森锰锌·乙膦铝·烯酰吗啉WP等高毒药剂的普遍使用，对作物及其环境分别存在一定的药害和污染，且连续使用易产生抗药性。放线菌是一类具有重要的经济价值和生物研究价值的微生物资源菌，其能够产生大量的抗生素、酶及其抑制剂等具有生物活性的物质。放线菌产生的抗生素不仅应用于工业、医学等领域，同时在农作物病虫害的生物防治上也有广泛的应用。对植物病害采用高效、环保、安全的综合防治措施是当今社会发展的需要，利用拮抗菌制备生物农药符合这个要求。现有的拮抗菌在抑制橡胶树根病方面虽有一定的效果，但仍有待进一步提高，如何寻找新的具备更强有效的生防菌株，成为本领域希望解决的技术问题。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术提供了一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌及其应用，本专利技术发现了一株放线菌，其能够高效抑制橡胶树根病菌，对橡胶树褐根病菌、白根病菌等病原菌均起到了很强的拮抗抑制作用，其在橡胶树根病的防治中具有较大的应用空间，开发应用前景广阔。专利技术人从云南省植胶区根际土壤中筛选出一株对橡胶树根病菌具有较强拮抗作用的生防放线菌，并对其进行了分类鉴定，发酵条件优化等研究，以期为橡胶树根病的生物防治奠定基础。本专利技术首先提供了一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌，该放线菌属于桑树链霉菌，其分类命名为Streptomycessamsunensis17-7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年9月13日，保藏中心地址为：武汉市武昌珞珈山，邮编为430072，保藏编号为CCTCCNO:M2018619。本专利技术提供的上述菌株17-7对橡胶树根病菌(包括橡胶白根病菌、褐根病菌)均有较好的抑制作用，其抑菌直径分别为45.95mm、46.84mm，抑菌率分别为82.62％、89.28％。与现有已知的拮抗菌株相比，其抑菌效果更加显著。本专利技术的上述菌株17-7在供试的9种培养基上均生长良好，气生菌丝呈白色(ISP1、ISP5、ISP6)、黑色(ISP2、ISP7、高氏一号培养基)、深灰色(PDA)、灰黑色(ISP3、ISP4)，基内菌丝呈橙黄色(PDA)、白色(ISP1、ISP2、ISP3、ISP5、ISP6、高氏一号培养基)、浅褐色(ISP4)、红棕色(ISP7)，产生黄色(ISP3)、橙黄色(ISP2、ISP7)色素(表3)。菌株17-7能产生过氧化氢酶、脲酶和脂酶，能使明胶液化，牛奶凝固和胨化，硝酸盐还原，纤维素分解(产生纤维素酶)。对NaCl的耐受范围为1％～4％，pH的耐受范围为6～8。菌株17-7可以利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖，不能利用果糖，不能利用丙氨酸，甘氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、精氨酸。本专利技术还保护由上述生防拮抗放线菌制备成的生防制剂。本专利技术还进一步提供了上述生防放线菌在防治橡胶树根病中的应用，以及用于制备防治橡胶树根病的生防菌剂中的应用。作为优选的，本专利技术所述放线菌可很好应用于橡胶树白根病和褐根病，尤其对橡胶褐根病菌其抑制作用极其显著。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术提供的生防菌株17-7对橡胶褐根病菌的抑制效果显著优于现有已知的生防菌株，在使用安全、环保的前提下，无需与化学药剂结合便可具备巨大的潜在防效；(2)本专利技术的生防菌株17-7对橡胶白根病菌、褐根病菌具有较好的抑菌效果，且对多种病原菌均有明显的拮抗抑制作用。附图说明图1为菌株17-7发酵滤液对橡胶褐根病菌的抑菌效果图，其中A为对照，B为加入17-7发酵滤液；图2为17-7菌株16SrRNA基因序列的系统发育分析。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本专利技术进行进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
技术实现思路
所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。实施例1(一)材料1.1样品来源：从云南省红河、德宏、临沧、普洱等植胶区采集根际土样。采土时，先铲去表层土，挖5～20cm深度的土壤100g，装入自封袋内，写好标签，封好袋口，带回实验室。1.2培养基：土壤分离培养基为高氏I号培养基；对峙实验培养基为马铃薯琼脂糖培养基(PDA)；活性检测培养基YMG(每升中含麦芽浸膏10.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖4.0g，KH2PO42.0g，酸水解酪蛋白1.0g，pH7.2-7.4)及液体高氏培养基；1.3主要试剂盒仪器：BacteriaGenomicDNAKit购自北京康为世纪公司；DYY-6C型电泳仪(北京六一)；CLIMACELL培养箱(美国3M)；BSD-400博迅振荡培养箱。(二)方法2.1放线菌发酵液的制备：种子液：挑取单个菌落接种于100mL的发酵基础培养基中，28℃、140r/min振荡培养5d制成种子液。发酵：以10％的接种量在基础发酵培养基中接入种子液，28℃、160r/min振荡培养5d后，12000r/min离心15min，经0.22μm的滤膜过滤，得发酵滤液。2.2放线菌的分离与纯化：将土样自然风干，并用研钵磨细，称取2.5g烘干土壤样品，置于盛有25ml水的三角瓶中，充分振荡，静置10min，采用平板梯度稀释法分离放线菌。28℃培养4-5d后，根据菌落形态、色泽、气生菌丝有无、产色素情况等特点，初步鉴定为放线菌，并对分得到的放线菌进行编号。并采用高氏一号培养基对分离的放线菌进行纯化，纯化培养后的放线菌于斜和甘油管中保存。2.3拮抗放线菌初筛：采用平板对峙法对分离到的放线菌进行抗菌活性的初筛。以橡胶树的两种根病病原菌为供试菌株，白根病菌(Rigidoporuslignosus)、褐根病菌(Phellinusnoxius)(均由本实验室分离获得)，以不接种放线菌的平板作对照，28℃下培养4-5天，测量抑菌圈直径。2.4拮抗放线菌复筛：采用菌丝生长速率法将菌株发酵滤液1mL与融化的PDA培养基19mL混匀，倒入无菌培养皿中制成带毒培养基平板，培养基凝固后，在每个平板中接入1个供试菌菌饼(直径为5mm)，使菌饼带菌丝的一面贴在培养基表面，以水与培养基混合的平板为对照，每个处理3次重复，28℃下培养4-7d后，用十字交本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌，其特征在于，所述放线菌的分类命名为Streptomyces samsunensis 17‑7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年9月13日，保藏编号为CCTCC NO:M2018619。

【技术特征摘要】
1.一株高效橡胶树根病生防拮抗放线菌，其特征在于，所述放线菌的分类命名为Streptomycessamsunensis17-7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年9月13日，保藏编号为CCTCCNO:M2018619。2.权利要求1所述的高效橡胶树根病生防拮抗放线菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘一贤，施玉萍，蔡志英，李岚岚，戴利铭，
申请(专利权)人：云南省热带作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53