蛋白质生产方法技术

本发明专利技术提供蛋白质的生产方法，所述方法包括：在含有纳米纤维的培养基组合物中，在物理搅动的条件下，对具有蛋白质生产能力的细胞以附着于所述纳米纤维的状态进行悬浮培养。

Protein production methods

The present invention provides a method for producing protein. The method comprises suspension culture of cells with protein production capacity in a medium composition containing nanofibers and in a state of attachment to the nanofibers under physically agitated conditions.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质生产方法
本专利技术涉及通过细胞培养来生产蛋白质的技术。
技术介绍
近年来，在生命科学领域中，通过对能够生产出目标有用蛋白质(抗体、疫苗等)的动物细胞进行大量培养从而以工业规模生产有用蛋白质已日益变得非常重要。在利用动物细胞培养对有用蛋白质进行的生产中，对于抗体等，使用能够悬浮培养的CHO-DG44细胞等来进行培养，对于疫苗等，将MDCK细胞、Vero细胞以粘附于微担体粒子的状态来进行培养。然而，在通过CHO-DG44培养来生产蛋白质的情况下，其实施只能在受已确立的多项权利制约的条件下进行。另外，最近正在进行对利用人细胞的人糖链修饰型抗体的生产方法的开发，但处于开发中的PerC6细胞同样只能在受多项权利制约的条件下实施。另外，同样源自人的HEK293细胞是粘附性的，因此不适于悬浮培养。此外，具有自身悬浮并增殖的能力的细胞具有癌化的风险，因此，现状是尚不存在能相当于后CHO-DG44细胞(postCHO-DG44cell)的细胞。另一方面，疫苗生产中使用的微担体法是将MDCK细胞、Vero细胞粘附于担体表面来进行培养的方法。在该方法的情况下，搅拌培养是必需的，但存在因该搅拌造成担体之间碰撞而导致产生表面细胞损伤的问题。这样的细胞损伤对蛋白质的生产效率造成不利影响，因此建立能代替其的新的悬浮培养法是人们所期望的。关于细胞的培养，本申请的专利技术人已报道了适用于以高产量生产尤其是动物细胞蛋白质的蛋白质生产促进剂及含有其的培养基、利用所述蛋白质生产促进剂及含有其的培养基的蛋白质制造方法(专利文献1)。另外，还已报道：通过将包含纤维素、甲壳质(chitin)等多糖类的纳米纤维混合于液体培养基中，能够在不实质上提高该液体培养基的粘度的情况下对动植物细胞及/或组织以静置状态进行悬浮培养，通过使用该培养基组合物进行培养而使得细胞的增殖活性亢进(专利文献2)。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2014/030726A1专利文献2：WO2015/111686A1
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术的课题在于提供使得利用悬浮培养的、通过粘附性细胞实现的蛋白质生产更为高效的技术。用于解决课题的手段本申请的专利技术人经深入研究发现，通过在含有包含纤维素、甲壳质等多糖类的纳米纤维的液体培养基中、在搅拌条件下对粘附于所述纳米纤维的蛋白质生产细胞进行悬浮培养，可显著增加蛋白质的生产量，由此完成了本专利技术。即，本专利技术如下文所述。[1]蛋白质的生产方法，所述方法包括：在含有纳米纤维的培养基组合物中，在物理搅动的条件下，对具有蛋白质生产能力的细胞以附着于所述纳米纤维的状态进行悬浮培养。[2]如[1]所述的方法，其中，所述纳米纤维由选自由纤维素、甲壳质及壳聚糖(chitosan)组成的组中的任一种非水溶性多糖类构成。[3]如[1]所述的方法，其中，所述纳米纤维为甲壳质纳米纤维。[4]如[3]所述的方法，其中，培养基组合物中的甲壳质纳米纤维的含量为0.003～0.1％(重量/容量)。[5]如[1]～[4]中任一项所述的方法，其中，所述细胞为粘附细胞。[6]细胞的增殖方法，所述方法包括：在含有纳米纤维的培养基组合物中，在物理搅动的条件下，对细胞以附着于所述纳米纤维的状态进行悬浮培养。[7]如[6]所述的方法，其中，所述纳米纤维由选自由纤维素、甲壳质及壳聚糖组成的组中的任一种非水溶性多糖类构成。[8]如[6]所述的方法，其中，所述纳米纤维为甲壳质纳米纤维。[9]如[8]所述的方法，其中，培养基组合物中的甲壳质纳米纤维的含量为0.003～0.1％(重量/容量)。[10]如[6]～[9]中任一项所述的方法，其中，所述细胞为粘附细胞。专利技术的效果根据本专利技术，能够使细胞高效增殖，从而实施对酶、细胞增殖因子、抗体等蛋白质的大量生产。具体实施方式以下对本专利技术进行更详细的说明。本说明书中所用的用语定义如下。本专利技术中的细胞，是指构成动物或植物的最基本的单元，其具有作为其要素的处于细胞膜内部的细胞质和各种细胞器。此时，细胞内部可以含有或不含有包含DNA的细胞核。例如，本专利技术的动物来源的细胞包括：精子、卵子等生殖细胞，构成生物体的体细胞，干细胞，祖细胞，从生物体分离的癌细胞，从生物体分离的获得了永生能力且能够在体外稳定维持的细胞(细胞株)，从生物体分离的进行了人工基因改造的细胞，从生物体分离的进行了人工细胞核交换的细胞等。作为构成生物体的体细胞的实例，包括但不限于：成纤维细胞、骨髓细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、嗜中性粒细胞、红血细胞、血小板、巨噬细胞、单核球、骨细胞、骨髓细胞、周皮细胞、树突细胞、角质细胞、脂肪细胞、间充质细胞、上皮细胞、表皮细胞、内皮细胞、血管内皮细胞、肝实质细胞、软骨细胞、卵丘细胞、神经系统细胞、胶质细胞、神经元、少突胶质细胞、小胶质细胞、星形胶质细胞、心脏细胞、食道细胞、肌肉细胞(例如，平滑肌细胞或骨骼肌细胞)、胰脏β细胞、黑色素细胞、造血祖细胞、及单核细胞等。所述体细胞包括例如从皮肤、肾脏、脾脏、肾上腺、肝脏、肺、卵巢、胰脏、子宫、胃、结肠、小肠、大肠、脾脏、膀胱、前列腺、睾丸、胸腺、肌肉、结缔组织、骨、软骨、血管组织、血液、心脏、眼、脑或神经组织等任意组织采集的细胞。干细胞是指兼具自体自身复制能力与分化为其他多种系统的能力的细胞，作为其实例，包括但不限于：胚胎干细胞(ES细胞)、胚胎肿瘤细胞、胚胎生殖干细胞、诱导性多能干细胞(iPS细胞)、神经干细胞、造血干细胞、间充质系干细胞、肝干细胞、胰干细胞、肌干细胞、生殖干细胞、肠干细胞、癌干细胞、毛囊干细胞等。祖细胞是处于由上述干细胞分化为特定的体细胞、生殖细胞的中途阶段的细胞。癌细胞是源自体细胞的获得了无限增殖能力的细胞。细胞株是通过在生物体外的人工操作而获得了无限增殖能力的细胞，作为其实例，包括但不限于：CHO(中国仓鼠卵巢细胞株)、HCT116、Huh7、HEK293(人胎肾细胞)、HeLa(人子宫癌细胞株)、HepG2(人肝癌细胞株)、UT7/TPO(人白血病细胞株)、MDCK、MDBK、BHK、C-33A、HT-29、AE-1、3D9、Ns0/1、Jurkat、NIH3T3、PC12、S2、Sf9、Sf21、HighFive(注册商标)、Vero等。本专利技术的植物来源的细胞包括从植物体的各组织分离出的细胞，也包括从所述细胞人工除去细胞壁而得到的原生质体。本专利技术的组织是指具有不同性质、功能的若干种细胞以一定的形式集合而成的结构的单元。作为动物组织的实例，包括上皮组织、结缔组织、肌组织、神经组织等。作为植物组织的实例，包括分裂组织、表皮组织、同化组织、叶肉组织、输导组织、机械组织、薄壁组织、去分化的细胞块(愈伤组织)。对细胞及/或组织进行培养时，可从上文记载的细胞及/或组织中任意选择所培养的细胞及/或组织来进行培养。细胞及/或组织可以是从动物或植物体直接采集的。细胞及/或组织可以是通过实施特定的处理而从动物或植物体诱导、生长或形质转换之后采集的。该情况下，所述处理可在生物体内进行，也可在生物体外进行。作为动物，例如可举出鱼类、两栖类、爬行类、鸟类、泛甲壳类、六足类、哺乳类等。作为哺乳动物的实例，可举出但不限于：大鼠、小鼠、兔子、豚鼠、松鼠、仓鼠、田鼠、鸭嘴兽、海豚、鲸鱼、狗、猫、山羊、牛、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.蛋白质的生产方法，所述方法包括：在含有纳米纤维的培养基组合物中，在物理搅动的条件下，对具有蛋白质生产能力的细胞以附着于所述纳米纤维的状态进行悬浮培养。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.04 JP 2016-0752511.蛋白质的生产方法，所述方法包括：在含有纳米纤维的培养基组合物中，在物理搅动的条件下，对具有蛋白质生产能力的细胞以附着于所述纳米纤维的状态进行悬浮培养。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述纳米纤维由选自由纤维素、甲壳质及壳聚糖组成的组中的任一种非水溶性多糖类构成。3.如权利要求1所述的方法，其中，所述纳米纤维为甲壳质纳米纤维。4.如权利要求3所述的方法，其中，培养基组合物中的甲壳质纳米纤维的含量为0.003～0.1％(重量/容量)。5.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：金木达朗，林寿人，川原浩治，
申请(专利权)人：日产化学株式会社，独立行政法人国立高等专门学校机构，
类型：发明
国别省市：日本,JP