The invention discloses an antibody labeling method coupled with a time-resolved fluorescent microsphere and its application. The labeling method of the invention is: (1) time-resolved fluorescent microspheres are sufficiently mixed with buffer solution, and then centrifuged at low temperature and high speed; (2) the precipitation after centrifugation is dissolved again, and the labeled antibody is evenly dispersed by ultrasound, then added into the complex solution to oscillate the reaction; (3) then the coupling agent is added into the solution of step (2) for coupling reaction, and the precipitation after centrifugation is centrifuged at low temperature and high speed; (4) the precipitation after centrifug Re-dissolve, then add the sealing liquid for sealing reaction, and then centrifuge at low temperature and high speed; (5) Re-dissolve the precipitate after centrifugation and evenly disperse it by ultrasound, that is to say, obtain the antibody labeled by time-resolved fluorescent microspheres. The labeling method of the invention is simple, has good repeatability and is convenient for large-scale application. The fluorescent antibody labeled by the method can be applied to various fields of immunodiagnosis and provides a more convenient and fast detection means for in vitro diagnosis.
【技术实现步骤摘要】
一种时间分辨荧光微球偶联的抗体标记方法及其应用
本专利技术属于生物分析
,特别是涉及一种时间分辨荧光微球偶联的抗体标记方法及其应用。
技术介绍
对某些抗原或特异性蛋白进行检测时,通常会应用到免疫标记技术。免疫标记技术是将既容易测定又具有高敏感性的物质标记到特异性抗原或者抗体蛋白上,通过这些标记物的增强放大作用来显示反应体系中抗原或者抗体的性质和含量的技术。目前常用的标记物包括胶体金、乳胶、荧光素、酶和放射性核素等。但在实际应用中,这些免疫标记技术都存在不同缺陷。例如在胶体金和乳胶标记技术中,存在灵敏度低、线性范围窄的缺点而无法满足市场对免疫诊断产品的需求;在荧光素标记技术中,荧光素存在荧光寿命和荧光效率的问题,且标记到抗原或抗体上的方法复杂;酶标记技术中,酶容易失活,从而影响待测物的检出限;放射性核素标记技术中,核素具有放射性,存在强烈的环境污染和健康危害。此外,采用这些方法在临床应用过程中,在读出方式上也有很大的不同。比如胶体金和乳胶肉眼判读,存在一定的人为主观性;荧光素标记技术、酶标技术、放射性核素技术的操作过程较为复杂且需要高额的设备费用和维护费用,同时不利于携带和搬运。而这些条件往往决定了检测的客观性和很多检测不能在条件落后及不发达地区开展。因此,目前市场对操作简单、结果判读客观、高灵敏度、检测费用更为便宜、更利于大范围推广的免疫标记方法和检测技术有进一步的需求。目前,时间分辨荧光免疫分析法是与化学发光、电化学发光并驾齐驱的三种超敏免疫分析方法之一。其原理是采用较长荧光半衰期的稀土离子作标记物,由于这种标记物Stokes位移大(>150nm) ...
【技术保护点】
1.一种时间分辨荧光微球偶联的抗体标记方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将时间分辨荧光微球用缓冲液充分混合,然后低温高速离心;(2)将步骤(1)离心后的沉淀复溶,并通过超声分散均匀,然后将待标记抗体加入到复溶液中,振荡反应一定时间;(3)反应结束后在步骤(2)的溶液中加入偶联剂进行偶联反应,之后低温高速离心去除上清液;(4)将步骤(3)离心后的沉淀复溶,然后加入封闭液进行封闭反应,之后低温高速离心去除上清液;(5)将步骤(4)离心后的沉淀复溶,并通过超声分散均匀,即获得时间分辨荧光微球标记的抗体。
【技术特征摘要】
1.一种时间分辨荧光微球偶联的抗体标记方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将时间分辨荧光微球用缓冲液充分混合,然后低温高速离心;(2)将步骤(1)离心后的沉淀复溶,并通过超声分散均匀,然后将待标记抗体加入到复溶液中,振荡反应一定时间;(3)反应结束后在步骤(2)的溶液中加入偶联剂进行偶联反应,之后低温高速离心去除上清液;(4)将步骤(3)离心后的沉淀复溶,然后加入封闭液进行封闭反应,之后低温高速离心去除上清液;(5)将步骤(4)离心后的沉淀复溶,并通过超声分散均匀,即获得时间分辨荧光微球标记的抗体。2.根据权利要求1所述的抗体标记方法,其特征在于,所述缓冲液为PBS缓冲液。3.根据权利要求1所述的抗体标记方法,其特征在于,所述抗体源自鼠、兔、羊、鸡或人,所述时间分辨荧光微球与抗体的质量比为1mg:20-30μg。4.根据权利要求1所述的抗体标记方法,其特征在于,所述偶联剂为戊二醛;所述时间分辨荧光微球与偶联剂的质量比为1:0.1-0.3,偶联时间为1-1...
【专利技术属性】
技术研发人员:汪惠泽,欧阳云,叶肖俊,葛秀龙,
申请(专利权)人:杭州莱和生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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