一种氯霉素的特异性分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种能识别氯霉素的特异性分子印迹聚合物，和以其为识别元件的化学发光试剂盒及检测方法和应用。该分子印迹聚合物以硝基苯为假性分子模板，合成的特异性分子印迹聚合物能够只识别氯霉素。基于该分子印迹聚合物制备的化学发光试剂盒，可以对肉组织中氯霉素进行残留检测，且可重复使用，提高了检测灵敏度，缩短了检测时间，降低了检测成本。

A Molecularly Imprinted Polymer, Chemiluminescence Kit, Detection Method and Application of Chloramphenicol

The invention discloses a specific molecularly imprinted polymer capable of recognizing chloramphenicol, a chemiluminescence kit with chloramphenicol as a recognition element, a detection method and application thereof. The molecularly imprinted polymer uses nitrobenzene as a pseudo-template, and the synthesized specific molecularly imprinted polymer can only recognize chloramphenicol. The chemiluminescence kit based on the molecularly imprinted polymer can detect chloramphenicol residues in meat tissues, and can be reused. It improves the detection sensitivity, shortens the detection time and reduces the detection cost.

【技术实现步骤摘要】
一种氯霉素的特异性分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用
本专利技术涉及动物性食品安全领域，具体涉及一种氯霉素的分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用。
技术介绍
氯霉素是一种高效的广谱抗生素，曾广泛用于治疗人和动物的多种细菌性疾病。然而，氯霉素给食品动物使用后，会造成其在动物源性食品中的残留。消费者长期少量摄入氯霉素后，能导致消费者出现再生障碍性贫血，危及生命。因此，中国农业部于2002年颁布公告，禁止氯霉素以任何形式在食品动物的养殖过程中使用，且在所有动物性食品中不得检出。但由于其抗菌作用强，抗菌谱广，价格低廉，它在食品动物养殖过程中仍然存在非法使用的情况。为维护消费者健康，必须要对动物源性食品中的氯霉素残留进行监控。目前，有很多方法可以对氯霉素残留进行检测，其中免疫分析法简单、方便，可用于大批量样品的筛查，在基层检测机构广为使用。但免疫分析法的核心试剂-抗体需要4-6个月的生产周期，且以抗体为识别元件建立的免疫分析法或商品化免疫检测试剂盒均为一次性使用。因此，研制具有免疫分析法优点的、可循环使用的检测方法/产品势在必行。分子印迹聚合物是一种化学合成性材料，在合成过程中可以形成对特定目标物具有特异性识别能力的三维空腔，因此，被称为“塑料抗体”。而且，分子印迹聚合物制备期短（1-2周）、成本低、可重复循环使用。化学发光法是一种分析速度快（10-30秒）的检测法，灵敏度比传统免疫分析法更高，且所用试剂均为化学试剂，不受温度、时间等因素影响。目前，国内外有一些针对氯霉素分子印迹聚合物的研究报道，但这些聚合物均是以氯霉素本身作为分子模板，所合成的聚合物对氯霉素的两个同类物甲砜霉素和氟苯尼考有不同程度的交叉反应。由于这两个同类物并不是食品动物禁用的药物，且有允许残留限量，所以在用这些聚合物对氯霉素进行检测时会使假阳性结果的比率增加。因此，有必要合成对氯霉素具有高度特异性识别能力的分子印迹聚合物，将其与免疫分析法和化学发光法的优点结合，以分子印迹聚合物为识别元件在普通微孔滴定板上开发化学发光试剂盒，则具有分析速度快、操作简单、灵敏度高、可循环使用、适于批量样品筛查等优点。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种氯霉素的分子印迹聚合物，该分子印迹聚合物能够对氯霉素进行捕捉，并能够用于化学发光分析法的检测。为了实现上述目的，本专利技术采取如下技术方案：一种氯霉素的特异性分子印迹聚合物，其特征在于由如下方法制备，以下原料按物质的量计：（a）将1份假分子模板硝基苯、3~6份功能单体甲基丙烯酸、20~30份的引发剂偶氮二异丁腈和20~30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于溶剂中，60~70℃振荡反应10~12小时；（b）将上述反应后所得的固体颗粒物放在索氏提取器中，用提取液连续回流12~24小时，将所述假分子模板硝基苯提取出来；（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得氯霉素的特异性分子印迹聚合物。优选的，所述的步骤（a）中所用的溶剂为氯仿，步骤（b）中所用的提取液为甲醇与乙酸的混合溶液，并且甲醇与乙酸的体积比为9：0.5~2。。本专利技术的另一个目的是提供一种氯霉素的特异性检测的化学发光试剂盒，该试剂盒能够对氯霉素进行准确检测，操作便捷，结果可靠。为此，本专利技术采取如下技术方案：一种氯霉素的特异性检测的化学发光试剂盒，其特征在于该化学发光试剂盒以前述的分子印迹聚合物为识别试剂，以4-硝基苯甲酸的辣根过氧化物酶标记物为信号试剂，以鲁米诺和过氧化氢为化学发光试剂，以4-(咪唑-1-基)苯酚为增强剂，根据发光强度与待测物浓度具有反比关系对待测物浓度做出检测。所述4-硝基苯甲酸的辣根过氧化物酶标记物通过如下方法制备：（a）将1mmol的4-硝基苯甲酸溶于5mLN,N-二甲基甲酰胺中，然后加入30µL三乙胺和1~5mmol的氯甲酸异丁酯，4~10℃搅拌反应2~4小时，得A液；（b）将0.02mmol的辣根过氧化物酶溶解于2mL1mol/L碳酸氢钠溶液中，得B液；（c）将A液滴加到B液中，4~10℃搅拌反应10~12小时；（d）将上述反应液在4~20℃用PBS透析3~4天，然后将透析袋中的溶液在无菌条件下用虑径为0.2um的滤膜过滤，得到4-硝基苯甲酸的辣根过氧化物酶标记物。本专利技术还提供利用上述化学发光试剂盒对氯霉素的检测方法，包括如下步骤：（a）将权利要求1或2所述的分子印迹聚合物悬浮于重量百分比为0.3~2%聚乙烯醇溶液中，然后加入到不透明的聚苯乙烯滴定板的小孔中，放置1~2小时；（b）将待检测的氯霉素药物或样品提取液和所述4-硝基苯甲酸的辣根过氧化物酶标记物加入到所述聚苯乙烯滴定板的小孔中，室温放置5~50分钟；（c）对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤，清除杂质和没有被捕获的氯霉素药物；（d）将鲁米诺、过氧化氢和4-(咪唑-1-基)苯酚加入到所述聚苯乙烯滴定板的小孔中，将该聚苯乙烯滴定板置于化学发光仪或多功能酶标仪中，读取各小孔的化学发光值。优选的，所述步骤（c）中，用乙醇对所述聚苯乙烯滴定板的小孔进行洗涤。本专利技术还提供一种上述化学发光试剂盒在检测氯霉素领域的应用。本专利技术的有益效果是：以硝基苯为假分子模板，合成了一种特异性的分子印迹聚合物，其只能识别氯霉素，对其同类物甲砜霉素和氟苯尼考无交叉反应。以该分子印迹聚合物为识别元件制备的化学发光试剂盒，可以对动物肌肉中的氯霉素进行特异地、快速地、灵敏地检测，且不会因为样品中存在其同类物而出现假阳性结果，为实现氯霉素残留的现场快速检测奠定了基础，可在更大范围内保障动物性食品安全。另外，由于分子印迹聚合物对化学/物理条件变化的耐受性强，因此，本专利技术提供的化学发光试剂盒可以重复使用，大大地降低了检测成本，减少了资源浪费，符合当前社会绿色可持续发展的趋势。附图说明图1为对照的无分子模板时合成的聚合物的电镜扫描图片；图2为本专利制备的分子印迹聚合物的电镜扫描图片；图3为氯霉素检测的浓度与光密度值的标准曲线。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术做进一步说明，以下按物质的量计：实施例1分子印迹聚合物合成例1（a）将1份假分子模板硝基苯、3份功能单体甲基丙烯酸、20份的引发剂偶氮二异丁腈和20份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿溶剂中，60℃反应12小时，得到固体颗粒物；（b）将所述固体颗粒物放在索氏提取器中，用甲醇与乙酸（9：1，V/V）提取液连续回流12小时，将印迹的假模板分子硝基苯提取出来；（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得氯霉素的特异性的分子印迹聚合物。实施例2分子印迹聚合物合成例2（a）将1份假分子模板硝基苯、6份功能单体甲基丙烯酸、30份的引发剂偶氮二异丁腈和30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿溶剂中，70℃反应10小时，得到固体颗粒物；（b）将所述固体颗粒物放在索氏提取器中，用甲醇与乙酸（9：2，V/V）提取液连续回流24小时，将印迹的假模板分子硝基苯提取出来；（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得氯霉素的特异性的分子印迹聚合物。实施例3分子印迹聚合物合成例3（a）将1份假分子模板硝基苯、4份功能单体甲基丙烯酸、25份的引发剂偶氮二异丁腈和25份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于氯仿溶剂中，65℃反应11小时，得到固体颗粒物；（b）将所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种氯霉素的特异性分子印迹聚合物，其特征在于由如下方法制备，以下原料按物质的量计：（a）将1份假分子模板硝基苯、3~6份功能单体甲基丙烯酸、20~30份的引发剂偶氮二异丁腈和20~30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于溶剂中，60~70℃振荡反应10~12小时；（b）将上述反应后所得的固体颗粒物放在索氏提取器中，用提取液连续回流12~24小时，将所述假分子模板硝基苯提取出来；（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得氯霉素的特异性分子印迹聚合物。

【技术特征摘要】
1.一种氯霉素的特异性分子印迹聚合物，其特征在于由如下方法制备，以下原料按物质的量计：（a）将1份假分子模板硝基苯、3~6份功能单体甲基丙烯酸、20~30份的引发剂偶氮二异丁腈和20~30份的交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯置于溶剂中，60~70℃振荡反应10~12小时；（b）将上述反应后所得的固体颗粒物放在索氏提取器中，用提取液连续回流12~24小时，将所述假分子模板硝基苯提取出来；（c）将步骤（b）反应后的固体颗粒物烘干后，得氯霉素的特异性分子印迹聚合物。2.如权利要求1所述的分子印迹聚合物，其特征在于，所述的步骤（a）中所用的溶剂为氯仿，步骤（b）中所用的提取液为甲醇与乙酸的混合溶液，并且甲醇与乙酸的体积比为9：0.5~2。3.一种氯霉素的特异性检测的化学发光试剂盒，其特征在于该化学发光试剂盒以如权利要求1或2所述的分子印迹聚合物为识别试剂，以4-硝基苯甲酸的辣根过氧化物酶标记物为信号试剂，以鲁米诺和过氧化氢为化学发光试剂，以4-(咪唑-1-基)苯酚为增强剂，根据发光强度与待测物浓度具有反比关系对待测物浓度做出检测。4.如权利要求3所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述4-硝基苯甲酸的辣根过氧化物酶标记物通过如下方法制备：（a）将1mmol的4-硝基苯甲酸溶于5mLN,N-二甲基甲酰胺中，然后加入30µL三乙胺和1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建平，贾冰杰，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：河北,13